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3 种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用.pdf3 种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用.pdf -- 5 元

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第36卷第4期湖南农业大学学报自然科学版Vol.36No.42010年8月JournalofHunanAgriculturalUniversityNaturalSciencesAug.2010DOI10.3724/SP.J.1238.2010.004593种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用曾强1,黄良宗1,李丹1,朱燕秋2,谢海燕2,顾万军关键词板蓝根甘草鱼腥草猪繁殖与呼吸综合征病毒11.佛山科学技术学院生命科学学院,广东佛山5282312.东莞市动物疫病预防控制中心,广东东莞523107摘要为研究板蓝根、甘草和鱼腥草3种中药粗提物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV的作用,采用体外细胞培养法,在Marc145单层细胞上,对3种中药粗提物进行直接抗PRRSV活性试验.结果表明,板蓝根和甘草粗提物阻断PRRSV的最佳质量浓度分别为3.125、0.391mg/mL,抑制PRRSV感染的最佳质量浓度分别为3.125、0.782mg/mL,直接灭活PRRSV的最佳质量浓度分别为1.563、0.782mg/mL鱼腥草粗提物质量浓度为0.782mg/mL时,阻断和抑制PRRSV感染的效果最好,但对PRRSV没有直接灭活作用.3种中药粗提物均有不同程度的体外抗PRRSV活性作用,其中板蓝根的效果最好.中图分类号S853.7文献标志码A文章编号10071032201004045905AntivirusactivityofthreeChineseherbsagainstporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinVitroZENGQiang1,HUANGLiangzong1,LIDan1,ZHUYanqiu2,XIEHaiyan2,GUWanjun11.CollegeofLifeScience,FoshanUniversity,Foshan,Guangdong528231,China2.CenterforAnimalDiseaseControlandPreventionofDongguan,Dongguan,Guangdong523107,ChinaAbstractAntiviralactivityofisatistinctoria,glycyrrhizaandhouttuyniacordataextractionagainstporcinereproductiveandrespiratorysyndromeviruswasestimatedinthemonolayerMarc145cell.Theresultshowedthatasforprecaution,inhibitionandthedirectkillingfunction,thebestconcentrationofisatistinctoriwere3.125,3.125and1.563mg/mLtheoptimumconcentrationofglycyrrhizawere0.391,0.782and0.782mg/mL,respectively.Theoptimumconcentrationofhouttuyniacordataforprecautionandinhibitionwas0.782mg/mL,whilewithonthedirectkillingfunction.ItindicatedthatallofthesethreeChinesetraditionalmedicineshaddifferentdegreesofantiviralactivityagainstPRRSVandtheisatistinctoriabehavedthebestinthesechinesetraditionalmedicines.invitro.Keywordsisatistinctoriaglycyrrhizhouttuyniacordataporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus猪繁殖与呼吸综合征病毒porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV感染主要损伤巨噬细胞,降低机体免疫力,引起继发感染,防治难度大.使用抗生素和抗病毒药易产生污染和毒副作用.目前主要靠接种疫苗来对该病进行预防,尚无有效的治疗药物1.弱毒疫苗免疫效果较好,但本身存在散毒危险23.灭活疫苗接种后,特异性抗体产生的滴度低,速度慢,只能提供部分免疫保护46.毋安雄等6发现国内主要厂家生产的猪PRRSV灭活苗免疫效果不理想,所以,提高疫苗免疫的保护抗体水平和细胞免疫是抗PRRSV感染的关键7.较多中药具有免疫调节作用和抗病毒作用,作为保健防病药物和添加剂,可改善和提高机体的免疫功能8,提高机体的抗病力和抵抗力1.抗病毒感染的单味中药具有抑制病毒增殖或灭活,阻止病毒吸附细胞的作用9.中国中药资源丰富,在治收稿日期2010033基金项目广东省科技计划项目2008A020100020广东省自然科学基金34064东莞市高等院校科研机构科技项目2007108101114作者简介曾强1970,男,广东翁源县人,硕士,兽医师,主要从事预防兽医研究通讯作者,guwanjun163.com460湖南农业大学学报自然科学版2010年8月疗病毒感染性疾病方面具有独特的优势101材料与方法.采用体外细胞培养的方法,在Marc145单层细胞上,对板蓝根、甘草和鱼腥草粗提物进行抗PRRSVPX株试验,旨在探明3种中药体外抗PRRSVPX株的作用效果.1.1材料板蓝根、甘草、鱼腥草均购自广州清平中药专业市场.PRRSVPX株、Marc145细胞由广东省农业科学院兽医研究所人畜共患病室保存.PRRSVPX株临用前于37℃解冻,用Marc145细胞维持液稀释成100TCID50细胞生长液含低糖DMEMGIBCO产品,加入10新生小牛血清GIBCO产品,每100mL营养液加入1mL10000IU青霉素和链霉素.细胞维持液含5新生小牛血清、MTT、34,6二甲基噻唑2x12,5乙苯基四唑溴盐购自Amresco公司、二甲基亚砜DMSO,分析纯,购自天津福晨化学试剂有限公司.备用.酶联免疫检测仪1681000XC为BioRAD公司产品.1.2方法1.2.13种中药粗提物的提取用常规水煎煮法粗提3种中药粗提物取板蓝根、甘草和鱼腥草各100g,煎煮3次第1次加8倍水浸泡,用武火加热,沸腾后用文火加热lh,6层纱布过滤得初滤液第2次将第1次过滤后的药渣加5倍水煎煮50min,过滤第3次将第2次过滤后的药渣加5倍水煎煮50min,过滤,合并3次滤液,水浴浓缩至含生药lg/mL,3000r/min离心20min,得上清液,用孔径0.22μm滤器过滤,除菌后分装,4℃冷藏备用.1.2.2PRRSVPX株的50组织培养感染剂量测定将Marc145细胞进行消化传代,每1mL细胞数调整至1106个,加入到96孔细胞培养板中0.1mL/孔,于5CO2培养箱中37℃培养11.待细胞长成单层后,接种稀释度10-8~10-1的病毒液0.1mL/孔,每个稀释度接种8孔,于5CO2培养箱中37℃培养120h,每天观察细胞病变CPE情况12.根据ReedMuench公式,计算50组织培养感染剂量TCID5013.TCID501.2.33种中药粗提物安全浓度的测定高于50病变累积阳性率-50/高于50病变累积阳性率-低于50病变累积阳性率.参照文献14,用细胞维持液将试验中药粗提物作连续的倍比稀释表1后,加到已长成Marc145细胞单层的细胞培养板上,每个稀释度重复8孔,另设细胞对照不加中药,置5CO2表13种中药粗提物的稀释倍数培养箱中37℃培养120h,每天观察细胞病变情况,以能长成或维持良好单层细胞的最高药物浓度作为药物的安全浓度,进行抗PRRSVPX株试验.Table1Dilutionof3Chineseherbalmedicine孔号药物质量浓度/mgmL-1稀释倍数150.0002225.0004312.500846.2501653.1253261.5636470.78212880.39125690.196512100.0981024110.04920481.2.43种中药粗提物抗PRRSVPX株试验以中药最大安全浓度为基准,用细胞维持液依倍比稀释成4个浓度,以如下3种方式研究3种中药粗提物抗PRRSVPX株的作用.1对PRRSVPX株的阻断作用.先加中药粗提物,后接病毒液.在细胞已基本长满的96孔细胞培养板上,加入从低浓度到高浓度稀释好的同一种中药粗提物,每孔100μL,每个浓度重复8孔.置5CO2培养箱中37℃培养4h后,加入100TCID50PRRSVPX株病毒液作用2h,再加入细胞生长液,每孔100μL,置5CO22对PRRSVPX株的抑制作用.先接PRRSVPX株病毒液,再加中药粗提物.用病毒液作用2h,再加药液作用4h,其他操作与1相同.培养箱中37℃培养72h.第36卷第4期曾强等3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用4613对PRRSVPX株的直接灭活作用.中药粗提物与PRRSVPX株病毒液体外作用2h后,加入到培养液中.在小试管中,将中药粗提物原液稀释成不同的浓度,盖上盖子,置5CO2培养箱中37℃培养2h将经处理的药液加入到已经长好细胞的细胞培养板孔中,置5CO2培养箱中37℃培养4h,加入含100TCID50病毒的培养基,每孔100μL,置5CO22结果与分析培养箱中37℃培养72h.上述3种作用方式试验均设置正常细胞对照组细胞对照,不加中药,不攻毒和PRRSVPX株接种对照组病毒对照,不加中药,攻毒.以上各组每天用显微镜观察CPE情况并记录,根据CPE和MTT试验结果判断药物的作用效果.MTT吸收法采用酶联免疫检测仪570nm/630nm双波长模式测定细胞OD值,以敏感波长与非敏感波长OD值之差作为中药粗提物抗PRRSVPX株感染细胞的指标,细胞OD值越大,抗PRRSVPX株效果越好.用SPSS11.5软件统计分析组间的差异性.2.1PRRSVPX株的TCID50由表2可知,病毒稀释度10测定结果-4的病变孔累积阳性率高于50,而10-6的低于50,50阳性率终点分布于两者之间,按公式计算得TCID5010-4.5,也就是说,病毒稀释度为10-4.5时,以0.1mL接种一组细胞孔后使50细胞感染,即50的细胞存在病变的可能,故该病毒感染的滴度为10-4.5表2PRRSVPX株不同稀释度TCID.50Table2测定结果TestedresultsofTCID50病毒稀释度atdifferentdilutedconcentrationofPRRSVPXstrains接种孔数/个阳性孔数/个病变孔数/个积累孔数/个病变率/阳性阴性阳性阴性108-1880360100108-2880280100108-3880200100108-455312380108-54447750108-633531220108-70080200108-800802802.23种中药粗提物的安全浓度天然药物毒性与其浓度呈正相关1517.从表3可知,试验药物浓度高于某一值时都会对Marc145细胞产生毒性作用,使细胞产生病变,且随着其浓度的增加,所产生的毒性作用愈强,细胞的病变愈严重.当板蓝根、甘草、鱼腥草的质量浓度由50mg/mL分别降至3.125、3.125、1.563mg/mL时,Marc145细胞基本不产生病变,即没有表现出毒性,故此质量浓度为最大安全浓度.通常情况下,药物与毒物只有量的差别,而无质的区别,中药也是如此,使用太多或超量使用也可引起毒副反应18表3中药粗提物对Marc145细胞作用的安全浓度,因此,进行抗病毒试验时,要从试验药物最大安全浓度开始稀释,以排除中药本身引起的细胞病变效应的干扰,保证试验结果的正确、可靠.Table3SafetyconcentrationofextractsofChineseherbalmedicinesonMarc145中药药物不同质量浓度mg/mL下的细胞病变情况细胞对照50.00025.00012.5006.2503.1251.5630.7820.3910.1960.0980.049板蓝根--------甘草--------鱼腥草-------细胞病变75~100记为,50~75记为,25~50记为,0~25记为基本无病变记为-.下同.2.33种中药粗提物对抗PRRSVPX株的阻断作用中药中的黄酮类、多糖及其衍生物、三萜类化合物及其衍生物如甘草甜素衍生物、生物碱及苷类等,都通过阻止病毒颗粒对宿主细胞的吸附而发挥抗病毒作用1920.由表4、表5可知,3种中药粗提物对抗PRRSVPX株均有不同程度的阻断作用.3.125mg/mL板蓝根、0.391mg/mL甘草、0.782mg/mL鱼腥草的阻断作用最好,与病毒对照差异显著P<0.05,对细胞保护效果好,与细胞对照差异不显著.这可能是先加药后接病毒,中药粗提物的462湖南农业大学学报自然科学版2010年8月某些有效活性成分增强了细胞膜的稳定性,阻止了病毒颗粒吸附靶细胞,使感染细胞受到保护,提高了抗病毒感染能力.表43种作用方式的各组细胞病变效应Table4CPEofcelltreatedbyprecaution,inhibitionanddirectkillingagainstPRRSVPX处理阻断作用抑制作用直接灭活作用板蓝根甘草鱼腥草板蓝根甘草鱼腥草板蓝根甘草鱼腥草A-1A2-A3A4-病毒对照细胞对照---------A1A4示不同质量浓度板蓝根分别为3.125,1.563,0.782,0.391mg/mL甘草分别为3.125,1.563,0.782,0.391mg/mL鱼腥草分别为1.563,0.782,0.391,0.196mg/mL中药粗提物处理.下同.表53种作用下测得各组细胞的OD值Table5ODvaluesofthecelltreatedbyprecaution,inhibitionanddirectkillingagainstPRRSVPX处理阻断作用OD值板蓝根甘草鱼腥草A0.285±0.018b10.213±0.037a0.257±0.013bA0.175±0.042c20.231±0.036ab0.265±0.011bA0.199±0.063c30.233±0.031ab0.248±0.022bA0.078±0.008d40.244±0.035b0.146±0.022c病毒对照0.127±0.020a0.188±0.018a0.186±0.013a细胞对照0.283±0.024b0.246±0.014b0.266±0.025b处理抑制作用OD值板蓝根甘草鱼腥草A0.234±0.029c10.205±0.016df0.228±0.019cdA0.201±0.021d20.226±0.037c0.241±0.034dA0.086±0.015a30.233±0.019c0.202±0.030cA0.076±0.010a40.226±0.028cf0.205±0.022c病毒对照0.065±0.009a0.183±0.028ad0.111±0.006a细胞对照0.331±0.036b0.419±0.032b0.399±0.040b处理直接灭活作用OD值板蓝根甘草鱼腥草A0.479±0.043b10.358±0.049a0.184±0.014aA0.491±0.052b20.351±0.020a0.164±0.011aA0.311±0.063c30.390±0.031c0.145±0.011cA0.389±0.028a40.372±0.020ac0.155±0.012c病毒对照0.409±0.039a0.336±0.030a0.177±0.018a细胞对照0.520±0.030b0.475±0.018b0.400±0.036b2.43种中药粗提物对PRRSVPX株的抑制作用中药中的多酚类物质,可以抑制流感病毒蛋白质和RNA的合成,也可以抑制流感病毒的吸附作用212.53种中药粗提物对PRRSVPX株的直接灭活作用.由表4、表5可知,3种中药粗提物对PRRSVPX株均有不同程度的抑制作用.板蓝根、甘草、鱼腥草分别在质量浓度3.125、0.782、0.782mg/mL时的抑制作用最强,与病毒对照和细胞对照差异显著P<0.05,对细胞有一定的保护效果.可见,3种中药抑制作用较其阻断作用效果差.这可能是接种病毒后,已侵入的病毒对细胞产生破坏,加入中药粗提物后,粗提物的有效成分干扰病毒的复制,从而抑制病毒增殖,产生抗病毒感染的抑制作用.板蓝根对疱疹病毒有杀灭作用,而非抑制作用10.甘草甜素对带状疱疹病毒具有直接杀灭作用22P<0.05板蓝根对细胞的保护效果最好,与细胞对照差异不显著鱼腥草对PRRSVPX株没有直接灭活作用,与病毒对照差异不显著,表明板蓝根、甘草可能含有促进抗病毒抗体生成的有效活性成分,但哪种成分占主要地位,是对单一靶点作用还是对不同部位协同作用,在临床上是否可以作为治疗药物等还有待研究..由表4、表5可知,1.563mg/mL板蓝根、0.782mg/mL甘草的直接灭活作用最好,与病毒对照差异显著3结论与讨论采用体外细胞培养的方法,测得板蓝根、甘草和鱼腥草粗提物对Marc145细胞的最大安全浓度分别为3.125、3.125、1.563mg/mL,病毒感染的滴度TCID50为10-4.5.3种单一味中药粗提物对第36卷第4期曾强等3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用463PRRSVPX株均有不同程度的阻断和抑制作用,3.125mg/mL板蓝根、0.391mg/mL甘草、0.782mg/mL鱼腥草的阻断作用最好,3.125mg/mL板蓝根、0.782mg/mL甘草、0.782mg/mL鱼腥草的抑制作用最好,1.563mg/mL板蓝根、0.782mg/mL甘草的直接灭活作用最好,与病毒对照差异显著P<0.05,鱼腥草对PRRSVPX株没有直接灭活作用.综合比较3种中药粗提物体外抗PRRSVPX株感染细胞的作用,板蓝根的效果最好.板蓝根、甘草、鱼腥草可作为抗PRRSVPX株的预防用药,但其效果有待进一步研究.参考文献1王学斌,魏战勇,崔保安,等.板蓝根、黄芪对猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外抑制作用J.畜牧与兽医,2006,3841114.2MengelingWL,LagerKM,VorwaldAC.SafetyandefficacyofvaccinationofpregnantgiltsagainstpocinereproductiveandrespiratorysyndromeJ.VetRes,1999,607796801.3BotnerA,NielsenJ,OleksiewiczMB,etal.HeterologouschallengewithporcinereproductiveandrespiratorysyndromePRRSvaccinevirusNoevidenceofrectivationofpreviouseuropeantypePRRSvirusinfectiousJ.VetMicrobiol,1999,683/4187195.4NielsenTL,NielsenJ,HaveP,etal.ExaminationofvirussheddinginsemenfromvaccinatedandfrompreviouslyinfectedboarsafterexperimentalchallengewithporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusJ.VetMicrobiol,1997,542101112.5NilubolD,PlattKB,HalburPG,etal.TheeffectofakilledporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusPRRSVvaccinetreatmentonvirussheddinginpreviouslyPRRSVinfectedpigsJ.VetMicrobiol,2004,1021/21118.6毋安雄,濮文正,蒋建一,等.4种猪生殖和呼吸综合征灭活疫苗免疫效果比较J.中国兽医杂志,2003,3991819.7张红英,崔保安,王学兵,等.2种植物多糖对PRRSV灭活苗免疫猪抗体及T淋巴细胞亚群的影响J.湖南农业大学学报自然科学版,2010,362210214.8秦华珍,时博,李世阳,等.南板蓝根和北板蓝根抗甲型流感病毒作用的比较研究J.中华中医药学刊,2009,271168169.9史利田.抗呼吸道病毒中药的实验研究述评J.中国中医基础医学杂志,1998,12454.10张其威,张楚瑜.抗病毒中药研究的最新进展J.中成药,2005,271116119.11颜其贵,郭万柱,陈斌,等.猪繁殖与呼吸综合征病毒CQ株的分离鉴定J.畜禽业,20061569.12王向阳,刘志苏,姜合作,等.金丝桃素体外抗巨细胞病毒效应的实验研究J.武汉大学学报医学版,20065302306.13殷震,刘景华.动物病毒学M.2版.北京科学出版社,1997189210.14BoernfundE,BabichH,MartinAlguacilN.ComparisonoftwoinvitrocyotoxicityassaysTheneutralredNRandtetrazoliumMTTtestsJ.Toxicologyinvitro,1988216.15刘家国,胡元亮,陈玉库,等.几种天然药物成分在体外CEF中最大安全浓度的测定J.动物医学进展,2002,2338892.16刘家国,胡元亮,陈玉库,等.天然复方药物在CEF上的安全浓度筛选及其抗IBDV感染的试验研究J.中兽医医药杂志,200251215.17胡元亮,孔祥峰,张宝康.10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响J.中国兽医学报,2003,236601603.18艾国良.中药饲料添加剂提高母猪繁殖性能的研究J.湖南农业大学学报自然科学版,2007,332196199.19许小琴,申海青,韦旭斌.中药抗病毒实验药理学研究现状与展望J.中兽医医药杂志,2004448.20付秀花,王恬,顾宏伟.中药的免疫增强作用J.畜牧与兽医,2002,3484042.21杨海燕,张传美,杜绍范,等.抗流感病毒中药研究进展J.辽宁畜牧兽医,2004339.22李铁民,梁再赋.甘草提取物及其衍生物的抗病毒研究现状J.中药,1994,2512655658.责任编辑王赛群英文编辑罗文翠3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用作者曾强,黄良宗,李丹,朱燕秋,谢海燕,顾万军,ZENGQiang,HUANGLiangzong,LIDan,ZHUYanqiu,XIEHaiyan,GUWanjun作者单位曾强,黄良宗,李丹,顾万军,ZENGQiang,HUANGLiangzong,LIDan,GUWanjun佛山科学技术学院,生命科学学院,广东,佛山,528231,朱燕秋,谢海燕,ZHUYanqiu,XIEHaiyan东莞市动物疫病预防控制中心,广东,东莞,523107刊名湖南农业大学学报(自然科学版)英文刊名JOURNALOFHUNANAGRICULTURALUNIVERSITYNATURALSCIENCES年,卷期2010,364被引用次数0次参考文献22条1.许小琴申海青韦旭斌中药抗病毒实验药理学研究现状与展望2004042.艾国良中药饲料添加剂提高母猪繁殖性能的研究期刊论文湖南农业大学学报自然科学版2007023.胡元亮孔祥峰张宝康10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响期刊论文中国兽医学报2003064.史利田抗呼吸道病毒中药的实验研究述评1998045.秦华珍时博李世阳南板蓝根和北板蓝根抗甲型流感病毒作用的比较研究2009016.张红英崔保安王学兵2种植物多糖对PRRSV灭活苗免疫猪抗体及T淋巴细胞亚群的影响期刊论文湖南农业大学学报自然科学版2010027.毋安雄濮文正蒋建一4种猪生殖和呼吸综合征灭活疫苗免疫效果比较2003098.NilubolDPlattKBHalburPGTheeffectofakilledporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusPRRSVvaccinetreatmentonvirussheddinginpreviouslyPRRSVinfectedpigs20041/29.NielsenTLNielsenJHavePExaminationofvirussheddinginsemenfromvaccinatedandfrompreviouslyinfectedboarsafterexperimentalchallengewithporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus19970210.BotnerANielsenJOleksiewiczMBHeterologouschallengewithporcinereproductiveandrespiratorysyndromePRRSvaccinevirusNoevidenceofrectivationofpreviouseuropeantypePRRSvirusinfectious19993/411.MengelingWLLagerKMVorwaldACSafetyandefficacyofvaccinationofpregnantgiltsagainstpocinereproductiveandrespiratorysyndrome19990712.李铁民梁再赋甘草提取物及其衍生物的抗病毒研究现状19941213.杨海燕张传美杜绍范抗流感病毒中药研究进展20040314.付秀花王恬顾宏伟中药的免疫增强作用20020815.刘家国胡元亮陈玉库天然复方药物在CEF上的安全浓度筛选及其抗IBDV感染的试验研究期刊论文中兽医医药杂志20020516.刘家国胡元亮陈玉库几种天然药物成分在体外CEF中最大安全浓度的测定期刊论文动物医学进展20020317.BoernfundEBabichHMartinAlguacilNComparisonoftwoinvitrocyotoxicityassaysTheneutralredNRandtetrazoliumMTTtests19880218.殷震刘景华动物病毒学199719.王向阳刘志苏姜合作金丝桃素体外抗巨细胞病毒效应的实验研究期刊论文武汉大学学报医学版20060520.颜其贵郭万柱陈斌猪繁殖与呼吸综合征病毒CQ株的分离鉴定期刊论文畜禽业20061521.张其威张楚瑜抗病毒中药研究的最新进展期刊论文中成药20050122.王学斌魏战勇崔保安板蓝根、黄芪对猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外抑制作用期刊论文畜牧与兽医200604相似文献10条1.期刊论文黎美霞4种中药制剂微生物物限度检查方法验证试验的探讨海峡药学2007,199目的建立一种可行的检验方法,对细菌、霉菌、控制菌检查方法的可靠性进行验证,以确保测定结果的科学可靠1.方法采用药典规定的常规法和培养基稀释法对银黄颗粒、蛇胆川贝液,复方甘草口服液、板蓝根颗粒进行5种菌株的回收率实验和控制菌检验方法验证.结果复方甘草口服液、板蓝根颗粒采用常规法回收率均>70,银黄颗粒常规法回收率<70,蛇胆川贝液细菌采用常规法回收率>70,白色念珠菌常规法回收率<70.采用培养基稀释法0.2ml/皿,银黄颗粒细菌霉菌、蛇胆川贝液霉菌回收率均可达70.控制菌检查常规法即可检出.结论复方甘草口服液、板蓝根颗粒采用常规法检验、银黄颗粒细菌霉菌采用培养基稀释法、蛇胆川贝液细菌采用常规法、霉菌采用培养基稀释法,4品种控制菌都采用常规法.2.期刊论文郑晓明.方锦霞.曾常青清喉消炎颗粒的薄层色谱鉴别广东药学院学报2008,245目的建立清喉消炎颗粒的薄层色谱鉴别方法.方法采用薄层色谱法对清喉消炎颗粒中的板蓝根、地胆草、甘草等药材进行了鉴别.结果薄层色谱法能清晰地鉴别清喉消炎颗粒中的板蓝根、地胆草、甘草,阴性无干扰.结论建立的薄层色谱法操作简单,斑点清晰,分离度好,重现性好,可作为清喉消炎颗粒的质量控制方法.3.期刊论文沈振华.单婷婷.刘海英抗感灵颗粒的薄层色谱鉴别研究时珍国医国药2006,179目的建立抗感灵颗粒的薄层色谱鉴别方法,为制定其质量控制标准提供试验依据.方法采用薄层色谱鉴别法鉴别处方中的主要药味.结果处方中的大青叶、板蓝根、甘草、连翘四味药的薄层色谱具有鉴别特征.结论薄层色谱鉴别方法简便可靠,专属性、重现性好,可作为抗感灵颗粒的质量控制指标.4.期刊论文蓝梅颗粒质量标准研究中药材2005,289目的建立蓝梅颗粒的质量标准.方法采用薄层色谱扫描法对蓝梅颗粒剂中齐墩果酸进行了含量测定,并对方中岗梅根、板蓝根、甘草进行定性鉴别.结果鉴别方法专属,阴性对照无干扰熊果酸在1.056μg~3.696μg范围内,点样量与斑点峰面积呈良好的线性关系,其回归方程为Y1935.3371025.735X,相关系数R0.999,平均回收率为93.9,RSD为2.0.5.学位论文张晓艳保护性耕作条件下土壤物理性状及土壤侵蚀研究2008在陇中黄土高原半干旱区连续7年的保护性耕作试验的基础上,于2007年在坡耕地上建立天然降雨径流小区,选取甘草、板蓝根、苜蓿等作物,在几种典型的保护性耕作措施下采集土壤样品、分析土壤物理性状并观测泥沙流失规律,以期找出该区较好的水土保持模式。本研究旨在为今后更好的做好黄土高原地区水土保持工作提供参考资料。本研究分为两个部分,第一部分是道地药材保护性耕作试验,试验设传统耕作下板蓝根与甘草间作TIL、春小麦与甘草间作TWL、免耕不覆盖下板蓝根与甘草间作NTIL、春小麦与甘草间作NTWT、免耕秸秆覆盖下板蓝根与甘草间作NTSIL、春小麦与甘草间作NTSWL6个处理。第二部分是粮草豆隔带种植保护性耕作试验,试验设传统耕作下春小麦与苜蓿间作TWL、马铃薯与苜蓿间作TPL、鹰嘴豆与苜蓿间作TCL、免耕秸秆覆盖下春小麦与苜蓿间作NTSWL、马铃薯与苜蓿间作NTSpL、鹰嘴豆与苜蓿间作NTSCL6个处理,得出以下结论1保护性耕作对土壤物理性状的影响①不同耕作措施对土壤容重的影响是不同的,免耕秸秆覆盖NTS,相对于传统耕作T,具有减小表层0~55cm土壤容重的作用。②NTS能显著提高0~5cm表层土壤的总孔隙度。③保护性耕作对表层土壤紧实度影响较大,NTS可以显著地降低0~5cm土壤紧实度。各处理土壤紧实度在空间上均呈现出增大减小增大减小的波动型变化趋势。④不同处理干筛团聚体结构组成中10~5mm,5~3mm和2~1mm三个粒级的团聚体含量相差不大,3~2mm团聚体的含量最低。泡水湿筛后,土壤团聚体的破坏率较高,高达92.34%。⑤NTS可以显著提高土壤表层饱和导水率。2保护性耕作对坡耕地土壤侵蚀的影响①保护性耕作具有良好的防止土壤侵蚀效应,道地药材保护性耕作各处理的水土流失总量为TWLNTWLNTSWLTILNTILNTSIL,粮草豆隔带种植保护性耕作各处理为TWLNTSWLTCLNTSCLTpLNTSpL。②2007年8与8日次降雨产沙产流情况与全年产沙产流趋势一致,2007年不同处理的水土流失总量主要产生在一两次降雨过程,8月份是坡耕地产沙产流的敏感期。③流失泥沙的养分含量中有机质、速速效P、速效K的流失总量最大,全N、全P的流失总量最小。NTS能显著的减少速效K、速效N、全N、全P的流失总量,各处理间流失泥沙的pH值变化不大,平均为8.37。④径流量、侵蚀量与降雨量的回归关系十分显著。6.期刊论文朱大胜.王凤.祁雪.李震利咽灵合剂薄层层析研究长春中医学院学报2003,194目的为完善质量标准,控制制剂质量提供检测方法.方法用薄层色谱法对利咽灵中的甘草、金银花、板蓝根进行定性鉴别.结果专属行强,分离度佳,重现性好,阴性对照无干扰.结论可作为该药的定性鉴别方法.7.期刊论文尹光红.冯万红板蓝根、黄芪、甘草ABT生根粉浸种试验北京农业科学2002,201ABT生根粉是一种复合型植物生长调节剂,本试验主要研究ABT生根粉对中药材板蓝根、黄芪、甘草的产量和品质的影响,摸索提高产量和品质的新途径,并对ABT生根粉8号和6号进行比较,筛选出根类药材最适宜的生根粉型号.8.期刊论文板蓝根将持续走强/甘草畅销不衰农机具之友200129.期刊论文何轶.鲁静.林瑞超板蓝根化学成分研究中草药2003,349目的分离鉴定板蓝根中的化学成分.方法用硅胶、ODS等柱色谱分离纯化,以核磁、质谱、紫外、红外光谱及理化常数鉴定结构.结果分离鉴定了5个化合物,为新橙皮苷I、甲酸铵Ⅱ、异甘草素Ⅲ、甘草素Ⅳ和腺苷V.结论其中新橙皮苷、甘草素和异甘草素为首次从十字花科中分离得到甲酸铵为首次从该植物中分离得到.10.期刊论文张曦.周志生正交实验优选复方板蓝根冲剂的处方组成和提取工艺海峡药学2004,164目的根据有效成分的性质,优选我院复方板蓝根冲剂的处方组成和提取工艺.方法采用薄层层析分离出处方的有效成分靛玉红和氨基酸,在靛玉红含量和含氮量为指标,作正交实验,为我院复方板蓝根冲剂选择最佳处方组成,为提取工艺的优选提供实验依据.结果我院复方板蓝根冲剂的最佳处方组成板蓝根、大青叶、甘草优于市售板蓝根冲剂的处方组成板蓝根、大青叶最佳提取工艺为将大青叶用70乙醇回流加热提取,滤过药渣与板蓝根、甘草用70℃温水各浸提12h、10h,滤过,合并2部分滤液,回收乙醇,低温减压浓缩成流浸膏.结论改进工艺法制出的成品可获得靛蓝、靛玉红及氨基酸等成分的理想含量,并较好地利用了凝集素,为确保制剂质量,建议我院复方板蓝根冲剂的传统生产方法予以改进.本文链接http//d.wanfangdata.com.cn/Periodical_hunannydx201004023.aspx授权使用易法银wfser20,授权号733246ddd1054611a16c9f0f012d6f8f下载时间2011年6月27日
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