HPLC 法测定苦参碱氯化钠注射液中苦参碱含量.pdf

HPLC法测定苦参碱氯化钠注射液中苦参碱含量韩春英，王津津1，许华英(德州德药制药有限公司，山东德州253015；1德州市立医院，山东德州253012)151摘要：目的建立HPLC法测定苦参碱氯化钠注射液中苦参碱的含量。方法用C18色谱拄(250mm46ram，5_m)，以0025m01L。磷酸溶液(用三乙胺调节PH值至3O)一乙腈(95：5)为流动相，流速1mLmin，检测波长220nm。结果苦参碱浓度在401zo肛gmL-1范围内呈良好的线性关系，r=09998。平均回收率为998lRSD为055(雅=9)。结论本法操作简便、结果准确可靠，可用于苦参碱氯化钠注射液质量控制。关键词：苦参碱氯化钠注射液苦参碱含量测定高效液相色谱法中图分类号：R9272文献标识码：A文章编号：16727738(2008)030151一02DeterminationofmatrineinMatrineSodiumChlorideInjectionbyHPLCHANChunying，WANGJin-jinl，XUHuaying(DezhouDeyaoPharmaceuticalCoLtd，Dezhou253015；1DezhouMunicipalHospital，Dezhou253012)ABSTRACT：OBJECTlVEToestablishanHPLCmethodfordeterminationofmatrineinMatrineSodiumChlorideInjec-tionMETHODSC18(250mm46mm，5ptm)columnwasusedMobilephaseof0025mo】L一1phosphoricacid(adjustedtopH30withtriethylamine)一acetonitrile(95；5)withflowratelmLmin，detectionwavelengthwas220nrmRESULTSThecalibrationcurvewaslinearintherangeof40120pgmL一，r209998Theaveragerecoveryofmatrinewas9981andRSDwas055(疗=9)CONCLUSIONThismethodwassimpleandconvenientintheoperationItwasalsoproposedtObeusedforthequalitycontr01ofMatrineSodiumChlorideInjectionKEYWoRDS：MatrineSodiumChlorideIniection；matrine；determination；HPLC苦参碱系从豆科槐属植物苦豆子果实或地上部分提取的一种生物碱，属于四环的喹嗪啶类，因其具有抗病毒、抗炎、免疫及抗肿瘤等作用1，而制成各种剂型广泛应用于临床。其中苦参碱氯化钠注射液收载于国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第一册中，其含量测定方法采用氯仿提取后滴定，操作过程繁琐，重现性较差。本文改用高效液相色谱法对其含量测定进行了研究，方法简便、结果准确可靠。1仪器与试剂、试药11仪器LC一10ATVP高效液相色谱仪(岛津)，ANASTAR工作站；UV一】700紫外一可见分光光度计(岛津)。12试剂乙腈为色谱纯；永为纯化水；磷酸、三乙胺均为分析纯。13试药苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：805200005)；苦参碱氯化钠注射液(批号：051201，051202，051203)，由德州德药制药有限公司提供。2实验部分21含量测定方法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0025molL_1磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3o)一乙腈(95：5)为流动相；检测波长为220nm；流速为lmLminl；理论板数按苦参碱峰计算应不低于1000。测定法：精密量取本品适量，加流动相稀释制成每1mL中含苦参碱80pg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20pL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取苦参碱对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中苦参碱的含量。22线性关系考察取苦参碱对照品20rag，精密称定，置100mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作储备液，精密量取储备液2、3、4、5、6mL，分别置lOmL量瓶中用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液各20“L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，进行线性回归，得线性方程为A=685394C+122446，r=09998，可见苦参碱在浓度40120ugmL1范围内与峰面积呈良好的线性关系23精密度试验精密量取22项下制备的第3点(取储备液4mL制备对照品)溶液20止注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样6次，以苦参碱峰面积来考察精密度，其RSD为027(行=6)。24重复性试验取051201批样品，分别制备6份供试品溶液，依法测定，对苦参碱峰面积进行考察，结果RSD为063(，t=6)。25回收率试验取苦参碱原料适量，按苦参碱氯化钠注射液处方配成含苦参碱80、100、120的样品溶液各3份各精密量取10mL，分别置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，按照21含量测定方法操作，结果见表1。万方数据152裹1回收率试验结果26辅料干扰实验精密称取处方量的糖料，加水制成空白样品。精密量取10mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20ttL注人液相色谱仪，记录色谱图，结果表明辅料对苦参碱的含量测定无影响(见图1)。图1空白辅料的HPLC图谱27稳定性试验取含量测定项下的供试品溶液室温放置，分别在0、2、4、6、8、12、24h精密量取20t-tL注入液相色谱仪，记录色谱图，求得峰面积的RSD为036，结果表明含量测定用溶液在24h内稳定。28样品含量测定281对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品适量，用流动相溶解并稀释成每lmL中含苦参碱80Ftg的溶液。282供试品溶液的制备：精密量取样品10mL置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液。精密量取上述溶液各20ttL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算苦参碱含量(见图2、3)。图2对照品的HPLC图谱图3样品的HPLC图谱同时按国家标准测定样品中苦参碱含量结果见表2。衰2样品中苦参碱含量3讨论31流动相的选择参考苦参碱质量标准中有关物质检查项，选择乙腈一磷酸水溶液体系为流动相。二者比例对分离有很大影响，乙腈浓度大于lo时苦参碱保留时间太短，与其它杂质峰不能有效分离，影响检测准确度；浓度过小时保留时间延长，经多次试验，最后确定0025molL-1磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3o)一乙腈(95t5)为最佳流动搁，此条件下的谱图峰形及分离效果良好。32检测波长的选择称取苦参碱适量用流动相溶解并稀释成约10ugmL-1的溶液，在UVl901型紫外可见分光光度计上，于400200nm波长范围内进行扫描，结果发现苦参碱在206nm处有最大吸收，220nm在其吸收峰上，考虑到末端吸收的干扰和检测所需的灵敏度选择220nm为检测波长。33原方法采甩三氯甲烷提取4次，水浴蒸干后进行滴定。由于步骤繁琐，误差较大、重现性差，不易操作。本文建立的方法操作简便，结果准确可用于苦参碱氰化钠注射液的质量控制。参考文献rl-李丹王平全张楠森，等苦参碱类生物碱的研究进展及临床应用中草药，1996，27(5)：308311简讯山东省食品药品监督管理局积极推进兴奋剂专项治理工作为深入贯彻落实全国奥运药品安全保障和兴奋荆治理余议精神，切实做好我省奥运药品安全保障工作，省局及时召开会议对全省