HPLC 检测止咳中药制剂中的沙丁胺醇.pdf

收稿日期20100908(007)第一作者程齐来，讲师，硕士研究生，主要从事生药学相关的教学与科研工作，TelE-mail:cql_57126.comHPLC检测止咳中药制剂中的沙丁胺醇程齐来，李洪亮，张道英(赣南医学院药学院，江西赣州341000)摘要目的:建立检测止咳中药制剂中非法掺入的化学止咳平喘药物沙丁胺醇方法。方法:选用AgilentC18(4.6mm150mm，5m)，以甲醇-磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH3.0)595为流动相。根据所检测到化合物的色谱保留时间，并与对照品比较，鉴别中药制剂中非法掺入的沙丁胺醇。结果:本实验建立的条件能够把中药制剂中添加的化学药物(沙丁胺醇)完全分离开来；对20个制剂样品用建立的分析技术进行了检测，经与相应的对照品比较，20个样品均未检测到沙丁胺醇。结论:该方法选择性强，灵敏度高，可作为中药制剂中非法加入掺入化学药物成分沙丁胺醇的有效检测手段。关键词HPLC；止咳中药制剂；沙丁胺醇中图分类号R284.1文献标识码A文章编号1005-9903(2011)02-0080-03DetectionofSalbutamolinsomeCoughPreparationsofTraditionalChineseMedicinebyHPLCCHENGQi-lai，LIHong-liang，ZHANGDao-ying(SchoolofPharmacy，GannanMedicalUniversity，Ganzhou341000，China)AbstractObjective:Todevelopaquantificationmethodforthedetectionofsalbutamol，acoughmedicine，adulteratedillegallyinsomecoughpreparationsoftraditionalChinesemedicine.Method:SalbutamolwasdetectedbyHPLConanAgilentEclipseXDB-C18column(4.6mm150mm，5m)withmethanol-potassiumdihydrogenphosphate(adjustpHto7.0withphosphoricacid)(595)asamobilephase.Accordingtothedetectedcompoundretentiontime，comparedwiththereferencesubstance，thechemicaldrugsalbutamolthatwasadulteratedillegallyintoTCMpreparationscouldbeidentified.Result:TheconditionsdevelopedinthisstudycouldentirelyseparatefromthecoughmedicinesalbutamoladdedintoTCMpreparations.Usingthismethodtodetect20kindsofpreparationsandcomparedwiththecorrespondingstandardsubstances，salbutamolwasnotdetectedin20kindsofsamples.Conclusion:Themethodisselective，sensitiveandcanbeusedasaneffectivemeanstodetectillegalTCMpreparation.KeywordsHPLC；coughTCMpreparation；salbutamol止咳中药用药历史悠久，疗效肯定，并且具有药源丰富、毒副作用小、价格低廉等优点，因此一直深受患者的喜爱。但近来发现市场上某些所谓“强效、速效”治疗咳嗽、哮喘的“纯中药制剂”，往往被非法掺入治疗哮喘化学药物成分沙丁胺醇、克伦特罗、氨溴索等化学药1，面对此类的违法行为，光凭肉眼很难识别，必须通过现代先进技术的检测才能识别，现有单一的薄层色谱法、紫外分光光度法，已很难满足检测的要求，尤其是干扰成分多且量少的情况2-5。虽然现有HPLC-MS可以解决此类问题，但仪器太昂贵，基层单位很难拥有，故本文作者根据实际需要，采用HPLC这种专属性强、灵敏度高且基层适用的检测技术，检测中药制剂中非法加入化学药物成分沙丁胺醇，作为初步筛查有很大的实际应用意义。08第17卷第2期2011年1月中国实验方剂学杂志ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeVol.17，No.2Jan.，20111材料Agilent1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；色谱纯甲醇(Fisher，美国)、超纯水。沙丁胺醇对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号0204-9701。样品:止咳中药制剂S1，S2，S3，S4，S5，S6，S7，S8，S9，S10，S11，S12，S13，S14，S15，S16，S17，S18，S19，S20，均为市售常用止咳中药。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm150mm，5m)；柱温25；流动相甲醇:磷酸溶液(磷酸二氢钠9.77g加水溶解并稀释至1000mL，用磷酸调节pH3.00.05)595(V/V)；流速1.0mLmin1；进样量20L；检测波长228nm。见图1。图1各样品中沙丁胺醇HPLCA.对照品；B.S1(0902032)供试品；C.S2(090207)供试品；D.S17(080102)供试品；E.S1(0902032)阳性对照；F.S2(090207)阳性对照；G.S17(080102)阳性对照；1.沙丁胺醇2.2对照品溶液的制备取精密称取沙丁胺醇对照品16.36mg，置25mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取3mL置25mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。2.3供试品溶液制备若供试品为片剂、丸剂、颗粒剂，研细，称取1次最大服用剂量，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷20mL，超声处理20min，滤过，弃去滤液，滤渣挥干，把滤渣及滤纸置具塞锥形瓶中加水20mL超声20min，滤过，并转移至25mL量瓶中稀释至刻度，摇匀，即得；若供试品为胶囊剂，取1次最大服用剂量内容物，研细，囊壳加水10mL加热使溶解，其溶液与胶囊内容物混合，置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷20mL，超声处理20min，滤过，弃去滤液，滤渣挥干，把滤渣及滤纸置具塞锥形瓶中加水20mL超声20min，滤过，并转移至25mL量瓶中稀释至刻度，摇匀，即得；若供试品为口服液，取供试品1次服用量，加三氯甲烷20mL萃取，弃去三氯甲烷层。水层加乙酸乙酯异丙醇(32)的混合液萃取2次，每次20mL，合并有机相，蒸干，加水使溶解，滤过，滤液置10mL量瓶中稀释至刻度，即得。2.4阳性对照溶液的制备精密称取沙丁胺醇对照品，加入处方中不含沙丁胺醇的止咳平喘类中成药中，混匀。按2.3的方法制备成每1mL中约含沙丁胺醇50g的溶液，即得。2.5线性关系试验精密称取沙丁胺醇适量，加水制成227.1mgL1的溶液，精密量取上述溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL置10mL量瓶，加水稀释至刻度，各进样20L以沙丁胺醇对照品的浓度(mgL1)为横坐标X，对照品的峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程和相关系数Y=9.331X0.3675，r=0.9992。试验结果表明沙丁胺醇在22.7113mgL1线性关系良好。2.6检出限试验取2.2项下对照品溶液(22.71mgL1)稀释若干倍，精密吸取对照品溶液20L，注入液相色谱仪，记录主峰高约为噪音峰高的3倍时的色谱图确认检出限。经实验，沙丁胺醇18程齐来，等:HPLC检测止咳中药制剂中的沙丁胺醇检出限为2.61mgL1。2.7精密度试验取2.2项下对照品溶液(22.71mgL1)，按色谱条件下方法，以20L的进样量分别注入色谱仪5次，记录色谱图，按沙丁胺醇面积计算，RSD0.1%(n=5)结果表明精密度良好。2.8回收率试验取样品S1，S2，S3的一次最大服用量各3份，精密称取沙丁胺醇对照品适量分别加入到上述样品中，照2.3项下方法制备供试品溶液，按色谱条件下方法，依法进行回收率试验，计算其平均回收率为94.3%，见表1。表1回收率实验样品添加对照品量/mg测得量/mg样品中含量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%11.411.39098.61.451.3801.441.39096.521.371.31095.61.351.31097.081.30094.231.461.34091.81.491.35090.651.30089.72.9重复性试验照2.3项下方法法制备5份供试品样品溶液，各进样5次，依法操作，RSD0.2%(n=5)结果表明该方法重复性良好。2.10样品测定取样品S1S20，照2.3项下方法制备成供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各20L，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，未呈现与对照品保留时间一致的色谱峰，检测结果所选20种中药止咳制剂未发现有非法添加沙丁胺醇化合物。3小结与讨论由于液体制剂杂质峰干扰较多，因此液体制剂提取过程采取先用混合溶剂萃取，除去部分杂质，再用甲醇萃取。以精密度试验中系统适应性实验的平均值为依据，理论板数按克仑特罗峰计算应不低于2500。检测波长取沙丁胺醇对照品加水制成10gmL1的溶液。以水为空白，置紫外可见分光光度计上，在400200nm的波长范围内进行扫描。从光谱图可知沙丁胺醇在278，228，204nm有最大吸收。为减少末端吸收的干扰，故选择228nm波长处作为检测波长。分别试验了0.01molL1磷酸二氢钠+甲醇，0.02molL1磷酸二氢钠+甲醇、甲醇+磷酸二氢钠(9.77g1000mL)溶液，经试验其中甲醇+磷酸二氢钠(9.77g1000mL)溶液峰形效果最好。分别试验了pH3.0，5.8，7.0的缓冲溶液对样品的保留及分离的影响。结果以pH3.0时分离度较好，杂质峰的保留时间明显减少，主峰峰形最佳。所以确定流动相的pH3.0。依据沙丁胺醇的溶解性质，选择水作为溶媒，经试验，溶解效果好，分析干扰少。本法具有操作简便，分离效果满意，结果准确可靠的特点，可作为止咳类中药制剂中违法添加沙丁胺醇的含量测定方法。参考文献1王猛，孙忠亲，宫瑞萍.HPLC测定喘舒片中盐酸克仑特罗含量J.中成药，2003，25(4):343.2董宇，孔璋，钟大放.液相色谱-质谱联用法检测中药降糖制剂中非法掺入的苯乙双胍和格列本脲J.沈阳药科大学学报，2005，22(1):19.3孙玉明，孙苓苓，钟大放.液相-质谱联用法检测某些中药制剂中的格列本脲J.药物分析杂志，2005，25(3):