NF-κB, S100B 在新生儿脑损伤中的早期诊断价值.docNF-κB, S100B 在新生儿脑损伤中的早期诊断价值.doc

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NFΚB、S100B在新生儿脑损伤中的早期诊断价值赵建美(南通大学附属医院儿科,江苏南通226001)摘要目的检测母妊娠期高血压疾病儿脐带组织核转录因子KB(NFKB)、S100B的表达及脐血S100B水平,探讨NFKB、S100B在母妊娠期高血压疾病儿脑损伤中的早期诊断价值。方法将97例母妊娠期高血压疾病所生新生儿纳入实验组,并据其生后第3~7天或纠正胎龄40周后3~7天的20项新生儿神经行为测定NBNA评分分为两组≤35分为脑损伤组,>35分为非脑损伤组;同时选取20例健康母亲所生正常新生儿作为对照组。回顾性分析其脐带组织NFKB、S100B的表达及脐血S100B水平。免疫组化法检测脐带组织NFKB、S100B表达;酶联免疫吸附法ELISA检测脐血S100B蛋白。对照组、非脑损伤组及脑损伤组间脐带组织NFKB、S100B和脐血S100B数值比较采用单因素方差分析;NFKB、S100B与NBNA间相关性分析用PEARSON相关系数表达。绘制ROC曲线并计算相应的曲线下面积,以评估NFKB、S100B对母妊娠高血压疾病儿脑损伤的早期诊断价值。结果1NFΚB在脐带组织存在表达,脑损伤组与非脑损伤组脐带组织NFΚB表达无显著性差异(P>005),但两组脐带组织NFΚB表达与正常对照组间均有显著性差异(P<005)。2S100B在脐带组织存在表达,脑损伤组、非脑损伤组及正常对照组间脐带组织S100B表达无显著性差异(P>005);脑损伤组脐血S100B蛋白水平较非脑损伤组显著增高,非脑损伤组脐血S100B蛋白水平也较正常对照组间显著增高(P<005)。3母妊娠高血压疾病儿脐血S100B蛋白水平与NBNA评分呈负相关,相关系数分别为0596P<001。4脐血S100B蛋白ROC曲线下面积为0992,以9504PG/ML作为S100B的最佳截取值时,诊断脑损伤的特异度94、灵敏度957。结论1NFΚB作为转录因子,参与了母妊娠高血压疾病儿缺氧缺血性脑损伤的发生、发展。2脐血S100B蛋白水平基本不受脐带组织S100B蛋白表达的影响,脐血S100B蛋白对早期诊断母妊娠高血压疾病儿缺氧缺血性脑损伤具有特异性价值。关键词妊娠高血压疾病;S100B;核转录因子KB;脑损伤SIGNIFICANCEOFNUCLEARFACTORKAPPAB,S100BPROTEINFOREARLYDIAGNOSISOFBRAINDAMAGEINNEONATESZHAOJIANMEIDEPARTMENTOFPEDIATRICS,AFFILIATEDHOSPITALOFNANTONGUNIVERSITY,JIANGSUNANTONG226001ABSTRACTOBJECTIVETOOBSERVETHESIGNIFICANCEOFNUCLEARFACTORKAPPAB基金项目南通大学附属医院院级课题作者简介赵建美1971,女,副教授,副主任医师,硕士生导师。EMAILZJMHEARTYAHOOCOMCN(NFKB),S100BPROTEININUMBILICALCORDANDS100BPROTEININCORDBLOODFOREARLYDIAGNOSISOFBRAINDAMAGEINNEONATESWHOSEMOTHERSHADHYPERTENSIVEDISORDERSCOMPLICATINGPREGNANCYMETHODS97NEONATESWHOSEMOTHERSHADHYPERTENSIVEDISORDERSCOMPLICATINGPREGNANCYWERESELECTEDASCASEGROUPANDTHEYWEREPERFORMEDNEONATALBEHAVIORALNEUROLOGICALASSESSMENTNBNAATTHEAGEOF37DAYSOFFULLTERMNEWBORNSORTHECORRECTEDAGEOFPRETERMINFANTSACCORDINGTONBNASCORES,THEYWEREDIVIDEDINTOBRAINDAMAGEGROUPNBNASCORES≤35ANDNONBRAINDAMAGEGROUPNBNASCORES>3520HEALTHYNEONATESWERESELECTEDINTOHEALTHYCONTROLGROUPATTHESAMETIMEIMMUNOHISTOCHEMISTRYWASUSEDTOMEASURETHEEXPRESSIONOFNFKBANDS100BINUMBILICALCORDANDENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYELISAWASUSEDTODETECTTHEUMBILICALCORDBLOODLEVELSOFS100BPROTEINTHECOMPARISONSOFTHEEXPRESSIONOFNFKB,S100BINTHEUMBILICALCORDANDTHECONCENTRATIONOFSERUMS100BINUMBILICALCORDBLOODAMONGHEALTHYCONTROLGROUP,NONBRAINDAMAGEGROUPANDBRAINDAMAGEGROUPWEREMADEBYONEWAYANOVATHECORRELATIONBETWEENS100BANDNBNAWASEXPRESSEDBYPEARSONCORRELATIONCOEFFICIENTTHEVALUEOFUMBILICALCORDSERUMS100BPROTEINTOEARLYDIAGNOSISOFBRAINDAMAGEINNEONATESWHOSEMOTHERSHADHYPERTENSIVEDISORDERSCOMPLICATINGPREGNANCYWEREEVALUATEDBYDRAWINGROCCURVEANDCALCULATINGTHECORRESPONDINGAREASUNDERTHEMRESPECTIVELYRESULTS1NFKBWASEXPRESSINGINTHEUMBILICALCORDTHEEXPRESSIONOFNFKBINBRAINDAMAGEGROUPHADNOSIGNIFICANTDIFFERENCETHANTHATINNONBRAINDAMAGEANDTHEEXPRESSIONOFNFKBINTHETWOGROUPSWEREBOTHSIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHATINHEALTHYCONTROLGROUPP<0052S100BWASPRESENTINUMBILICALCORDBUTNOSIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDINBRAINDAMAGEGROUP,NONBRAINDAMAGEGROUPANDHEALTHYCONTROLGROUPP>005THECORDBLOODLEVELSOFS100BPROTEININBRAINDAMAGEGROUPWERESIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHATINNONBRAINDAMAGEGROUP,ANDTHECORDBLOODLEVELSOFS100BPROTEININNONBRAINDAMAGEGROUPWEREALSOHIGHERTHANTHATINHEALTHYCONTROLGROUPP<0053INCASEGROUP,THEUMBILICALCORDSERUMS100BCONCENTRATIONWASNEGATIVELYCORRELATEDWITHTHEVALUEOFNBNASCORESANDTHECORRELATIONCOEFFICIENTWAS05964THECORRESPONDINGAREASUNDERROCCURVEOFTHEUMBILICALCORDSERUMS100BPROTEINCONCENTRATIONWAS982TAKINGTHECORDLEVEL9507PG/MLOFS100BPROTEINASTHEOPTIMALCUTOFFVALUE,THESENSITIVITYOFTHEUMBILICALCORDSERUMS100BPROTEINWAS992TODIAGNOSEBRAINDAMAGEINNEONATESWHOSEMOTHERSHADHYPERTENSIVEDISORDERCOMPLICATINGPREGNANCYANDTHESPECIFICITYOFWHICHWAS94CONCLUSIONS1NFKBISINVOLVEDINTHEMECHANISMOFHYPOXICISCHEMICBRAINDAMAGEINNEONATESWHOSEMOTHERHADHYPERTENSIVEDISORDERSCOMPLICATINGPREGNANCY2S100BPROTEININCORDBLOODCOULDNOTBEAFFECTEDBYTHEEXPRESSIONOFS100BINUMBILICALCORD,CORDBLOODLEVELSOFS100BPROTEINHAVETHEVALUEOFEARLYANDSPECIFICALLYDIAGNOSISOFBRAINDAMAGEINNEONATESWHOSEMOTHERSHADHYPERTENSIVEDISORDERSCOMPLICATINGPREGNANCYKEYWORDSHYPERTENSIVEDISORDERCOMPLICATINGPREGNANCY;S100BPROTEIN;NUCLEARFACTORKAPPAB;BRAINDAMAGE妊娠期高血压疾病(HYPERTENSIVEDISORDERCOMPLICATINGPREGNANCY,HDCP)是妊娠期最常见的合并症,发病率有逐年上升的趋势,对胎儿可造成不同程度的危害,尤其是中枢神经系统的损害,可直接影响胎儿的生存及远期预后。母妊娠期高血压疾病儿发生缺氧缺血性脑损伤(HYPOXICISCHEMICBRAINDAMAGE,HIBD)的几率显著增加,已得到广泛证实1。目前脑损伤的诊断主要依靠新生儿生后临床观察、新生儿神经行为测定(NEUONATALBEHAVIORALNEUROLOGICALASSESSMENT,NBNA)、影像学及电生理检查等,尚缺乏早期诊断的特异性生化指标。核转录因子KAPPABNUCLEARFACTORKAPPAB,NFΚB是目前发现的与炎症有关的重要转录因子之一,动物实验表明NFΚB可能通过促进巨噬细胞炎症蛋白表达参与大鼠脑缺血再灌注损伤时多核白细胞浸润过程2。同时,一些实验证明阻止NFΚB的活化能减轻神经功能缺损,减少中性粒细胞的渗出以及局灶脑缺血损伤所导致的NFΚB的移位。大量研究认为各种体液中S100B蛋白水平,可作为诊断HIBD的特异性生化指标3。但国外有研究发现S100B的表达不仅限于神经系统,胎盘、脐带组织也有表达4,5,认为血液等体液中S100B蛋白可能受这些组织分泌的影响,从而对S100B作为神经特异源性蛋白的脑损伤诊断价值产生了怀疑。本实验拟测定母妊娠高血压疾病新生儿脐血及脐带组织NFΚB、S100B的表达,对其生后7天或纠正胎龄40周后7天行新生儿神经行为测定(NBNA),再回顾性分析其脐血与脐带组织NFΚB、S100B表达变化与NBNA之间的关系,探讨NFΚB、S100B在母妊娠高血压疾病儿缺氧缺血性脑损伤中的作用及其相互关系,为临床早期诊断、早期干预提供理论基础。1材料与方法11一般资料111实验组将2009年9月至2010年9月本院或市妇幼保健医院产科母妊娠高血压疾病(根据乐杰主编的妇产科学妊娠期高血压疾病诊断标准6,其中母妊娠期高血压35例、母轻度子痫前期32例、母重度子痫前期30例)所生新生儿97例纳入实验组,其中男57例,女40例;足月儿78例,早产儿19例;胎龄3124~40周,平均孕周3743181周;体重175~39KG,平均323047KG;剖宫产60例,自然分娩37例;其母无感染、贫血、糖尿病等其它影响循环代谢的疾病。所有足月儿生后7天、早产儿纠正胎龄40周后7天采用鲍秀兰制定的新生儿神经行为神经NBNA20项评分标准7进行评分,NBNA>35分为非脑损伤组,NBNA≤35分为脑损伤组。112对照组同期随机收集20例健康母亲所生正常新生儿为对照组,其中男12例,女8例;足月儿17例,早产儿3例;胎龄32~40周,平均孕周3731191周;体重17~39KG,平均320044KG;剖宫产11例,自然分娩9例;其母孕期体健,无妊娠期高血压疾病、感染、贫血、糖尿病等影响循环代谢的疾病。所有新生儿生后7天、早产儿纠正胎龄40周后7天也行NBNA,其NBNA评分均>37分。12实验方法所有研究对象均在断脐后取脐静脉血2ML,并取近胎儿脐带根部的脐带组织约1CM,采血时避免溶血。所有血标本装入不加抗凝剂的试管中,室温放置,半小时内放入离心机4000R/MIN离心10MIN,留取上清液80C冰箱保存,一年后同批检测S100B蛋白水平。测定结果前冰冻标本在2~8C过夜缓融,检测前将标本恢复到室温20C~28C。血清S100B蛋白采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,操作步骤严格按说明书由专人完成。所有脐带组织放入4%多聚甲醛溶液中,固定48H后,依次进行酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡包埋。测定结果时取母妊娠期高血压疾病非脑损组及脑损伤组脐带各6根及6根正常脐带作正常对照,进行石蜡切片,厚度4M,石蜡切片脱蜡至水后,分别做NFΚB、S100B免疫组化标记,操作步骤严格按说明书由专人完成。13统计学处理各计量资料均采用STATA115统计软件包对数据进行统计学处理,实验组与对照组一般资料中胎龄与出生体重以均数标准差XS表示,数值比较及两两比较采用单因素方差分析;性别及生产方式比较采用Χ2检验。实验结果以均数标准差XS表示,脑损伤组、非脑损伤组与对照组脐带组织NFΚB、S100B和脐血S100B数值比较及组间两两比较采用单因素方差分析及DUNNETT’S检验;S100B、NBNA间相关性分析用PEARSON相关系数表达;绘制ROC曲线并计算相应的曲线下面积,分析脐血S100B的特异度、灵敏度。2结果21实验组(脑损伤组、非脑损伤组)与对照组间胎龄、出生体重、性别及分娩方式的比较母妊娠高血压疾病儿脑损伤组、非脑损伤组间胎龄、出生体重、性别比例及分娩方式间均无统计学差异P>005。表1、2表1脑损伤组、非脑损伤组与对照组间胎龄、出生体重比较组别例数胎龄出生体重对照组203731191323047非脑损伤组503746186322043脑损伤组473740177317045F00490186P>005>005注三组胎龄、出生体重比较无统计学差异(ANOVA检验,P>005)。表2脑损伤组、非脑损伤组与对照组间性别、生产方式比较组别例数性别生产方式男女剖宫产自然分娩对照组20128119非脑损伤组5030203020脑损伤组4727203017Χ2008048P>005>005注性别、出生体重在三组间两两比较均无统计学差异(卡方检验,P>005)。22实验组(脑损伤组、非脑损伤组)与对照组脐带NFKB水平比较脐带组织NFKB表达的光密度值在正常对照组为04470005,在母妊娠高血压疾病儿非脑损伤组为04550007、脑损伤组为04600006。脐带组织NFKB表达的强弱在母妊娠高血压疾病儿脑损伤组、非脑损伤组间无显著性差异P>005,非脑损伤组与正常对照组间有显著性差异P<005,脑损伤组与正常对照组间也有显著性差异P<005。(表3,图1)表3三组脐带组织NFKB阳性表达序号光密度值平均光密度值对照组10448204403045104470005404435045260447非脑损伤组10456204473044804550007404675045560459脑损伤组10460204693045004600006404555046260461F636P<005注与对照组比较P<005,与非脑损伤组比较P>005,与对照组比较P<005对照组非脑损伤组脑损伤组图1三组脐带组织NFKB的阳性表达免疫组化染色X40023实验组(脑损伤组、非脑损伤组)和对照组脐带组织S100B表达的比较经免疫组化染色,脐带组织S100B表达的光密度值在正常对照组为04120005,母妊娠高血压疾病儿非脑损伤组为04190009、脑损伤组为04210008。脐带组织S100B表达的强弱在母妊娠高血压疾病儿脑损伤组、非脑损伤组及正常对照组间无显著性差异P>005。(见表4,图2、3)表4三组脐带组织S100B阳性表达序号光密度值平均光密度值对照组10412204063040704120005404195041760413非脑损伤组10423204303041704190009404125042660406脑损伤组10425204313042004210008404165040860428F2175P>005注S100B在三组间两两比较均无统计学差异(P>005)对照组非脑损伤组脑损伤组图2三组脐带组织S100阳性表达免疫组化染色(400)00050101502025030350404505对照组非脑损伤组脑损伤组脐带组织S100B表达的光密度值图3三组脐带组织S100B表达的光密度值比较24实验组(脑损伤组、非脑损伤组)与对照组脐血S100B蛋白水平比较母妊娠期高血压疾病儿脑损伤组脐血S100B蛋白水平PG/ML较非脑损伤组显著增高160684469VS7637971(P<005),非脑损伤组脐血S100B蛋白水平与正常对照组间也有显著性差异7637971VS3105425(P<005)。(表5,图4)表5三组脐血S100B蛋白水平(PG/ML)组别例数脐血S100BPG/ML对照组203105425非脑损伤组507637971脑损伤组47160684469F17534P<005注与对照组比较P<005,与非脑损伤组比较P<005
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