RP-HPLC 法测定中药茯苓皮中茯苓酸A 和3-表去氢土莫酸的含量[J].pdfRP-HPLC 法测定中药茯苓皮中茯苓酸A 和3-表去氢土莫酸的含量[J].pdf

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2009,VOL33,NO6271PROGRESSINPHARMACEUTICALSCIENCES研究与交流2009年第33卷第6期第271页接受日期20092012153通讯作者濮社班,副研究员;研究方向中药资源学;TEL025285391084;E2MAILPUSHEBAN1261COMDOI103969/JISSN10015094200906006RP2HPLC法测定中药茯苓皮中茯苓酸A和32表去氢土莫酸的含量夏烨1,杨春华3,4,刘静涵2,濮社班1311中国药科大学生药学教研室,江苏南京210038;21中国药科大学天然药物化学教研室,江苏南京210009;31中国药科大学分析测试中心,江苏南京210009;41中国药科大学教育部药物质量与安全预警重点实验室,江苏南京210009摘要目的建立一种可用于评价茯苓皮药材质量的含量测定方法。方法采用DIKMADIMONSALC18色谱柱250MM416MM,5ΜM,以011甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速110MLMIN1,检测波长243NM,柱温25℃,用梯度洗脱法同时测定茯苓皮药材中茯苓酸A和32表去氢土莫酸的含量。结果测得茯苓酸A和32表去氢土莫酸的线性范围分别为01073~01292GL1R019997和01027~01135GL1R019999;加样回收率分别为102163和98188。结论该法能快速、准确地测定茯苓皮中两个活性成分的含量,为茯苓皮的质量控制提供了一个较好的检测方法。关键词茯苓皮;茯苓酸A;32表去氢土莫酸;反相高效液相色谱中图分类号O657172;R284文献标识码B文章编号10015094200906027103SIMULTANEOUSDETERMINATIONOFPORICOICACIDAAND32EPIDEHYDROTUMULOSICACIDINPORIAPEELBYRP2HPLCXIAYE1,YANGCHUN2HUA3,4,LIUJING2HAN2,PUSHE2BAN111DEPARTMENTOFPHARMACOGNOSY,CHINAPHARMACEUTICALUNIVERSITY,NANJING210038,CHINA;21DEPARTMENTOFNATURALMEDICINALCHEMISTRY,CHINAPHARMACEUTICALUNIVERSITY,NANJING210009,CHINA;31CENTERFORINSTRUMENTALANALYSIS,CHINAPHARMACEUTICALUNIVERSITY,NANJING210009,CHINA;41KEYLABO2RATORYOFDRUGQUALITYCONTROLANDPHARMACOVIGILANCEAFFILIATEDTOMINISTRYOFEDUCATION,CHINAPHARMA2CEUTICALUNIVERSITY,NANJING210009,CHINAABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHAMETHODTOEVALUATETHEQUALITYOFPORIAPEELMETHODSASIMPLEGRADIENTRP2HPLCPROGRAMWASCARRIEDOUTTODETERMINETHECONTENTOFPORICOICACIDAAND32EPIDEHYDRO2TUMULOSICACIDSIMULTANEOUSLYADIKMADIMONSALC18COLUMN250MM416MM,5ΜMWASUSED,THEMOBILEPHASEWAS011FORMICACID2ACETONITRILE,ATAFLOWRATEOF1MLMIN1,WITHTHECOLUMNTEMPERA2TUREOF25℃,ANDTHEDETECTIONWAVELENGTHWAS243NM1RESULTSTHELINEARRANGEOFPORICOICACIDAAND32EPIDEHYDROTUMULOSICACIDWAS01073201292GL1R019997AND01027201135GL1R019999,RESPECTIVELYANDTHERECOVERIESOFTHETWOCOMPONENTSWERE102163AND98188,RESPEC2TIVELYCONCLUSIONTHEMETHODISRAPIDANDACCURATETODETERMINETHECONTENTOFPORICOICACIDAAND32EPIDEHYDROTUMULOSICACIDINPORIAPEELIT′SANEASYWAYWHICHALSOPROVIDESTHEGOODDETECTIONMEANSFORTHEQUALITYCONTROLOFPORIAPEEL研究与交流2009年第33卷第6期第272页2722009,VOL33,NO6PROGRESSINPHARMACEUTICALSCIENCESKEYWORDSPORIAPEEL;PORICOICACIDA;32EPIDEHYDROTUMULOSICACID;RP2HPLC茯苓皮为多孔菌科真菌茯苓PORIACOCOSSCHW1WOLF干燥菌核的外皮,性平,味甘、淡,归心、肺、脾、肾经1,具有利水渗湿、健脾胃、宁心安神的功效,主要有效成分为三萜酸类如茯苓酸和多糖等224。神农本草经将其列为上品,为历届药典所收载。中国药典2005年版尚未制定其含量测定项,目前仅有茯苓酸的含量测定5及药材指纹图谱研究627的文献报道。文献8210报道,茯苓酸A具有抗肿瘤作用和一定的细胞毒作用,32表去氢土莫酸能够被人体小肠的上皮细胞吸收且具有清除自由基的活性,两者均为茯苓皮药材所含的活性成分。本研究采用RP2HPLC法同时测定茯苓皮药材中这两种成分的含量,为茯苓皮药材的质量控制提供了一种更为有效的检测手段。仪器与试药AGILENT1100系列高效液相色谱仪,DAD检测器,CHEMSTATION工作站,AE240型天平METTLE公司。茯苓酸A和32表去氢土莫酸均从茯苓皮中分离制备得到,结构经UV、IR、MS和NMR确证;纯度经HPLC/DAD检测达9810以上。茯苓皮药材购自不同药店,经中国药科大学生药学教研室濮社班副研究员鉴定为中国药典规定的多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核的外皮。样本编号为20072021211,保存于中国药科大学分析测试中心。乙腈MERCK公司,色谱纯,甲醇、乙醇、甲酸南京化学试剂厂,均为分析纯。实验用水为乐百氏纯净水。方法与结果211色谱条件DIKMADIMONSALC18色谱柱250MM416MM,5ΜM。流动相A011甲酸水溶液,B乙腈。梯度条件为020MIN,B75~90;2025MIN,B90~95。流速110MLMIN1,检测波长243NM,柱温25℃,进样量10ΜL。212溶液的制备21211对照品溶液的制备分别精密称定茯苓酸A和32表去氢土莫酸对照品18125MG和6175MG,置同一50ML容量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,即得混合对照品溶液。21212供试品溶液的制备取茯苓皮样品约1G,精密称定,置50ML具塞锥形瓶中,加20ML甲醇加塞称定,于超声仪中提取30分钟,称定,用甲醇补足质量,过0145ΜM微孔滤膜,滤液密封备用。213标准曲线的绘制吸取茯苓酸A和32表去氢土莫酸混合对照品溶液2、4、6、8ML置10ML容量瓶中,以流动相定容至刻度,制成不同质量浓度的对照液。按“211”项下色谱条件,分别进样,以色谱峰峰面积Y为纵坐标,对照品质量浓度C为横坐标进行线性回归。得回归方程分别为Y215103C113105,R019997;Y20C111105,R019999。结果表明,茯苓酸A和32表去氢土莫酸分别在01073~01292GL1和01027~01135GL1范围内线性关系良好。214精密度试验取同一供试品溶液,按“211”项下色谱条件,连续进样6次。测得茯苓酸A和32表去氢土莫酸的峰面积的RSD分别为0173和018。结果表明,该法具有良好的精密度。215重复性试验取同一批药材6份,每份约1G,精密称定,制备成供试品溶液,按“211”项下色谱条件,进样,测得茯苓酸A和32表去氢土莫酸的峰面积的RSD分别为216和211。结果表明,该法重复性良好。216稳定性试验取同一样品溶液分别于0、2、4、6、8小时按“211”项下色谱条件,进样,测得茯苓酸A和32表去氢土莫酸的峰面积的RSD分别为114和118,表明供试品溶液在8小时内稳定性良好。217回收率试验取已知含量的茯苓皮样品3份,每份约1G,精密称定,依次加入含量分别为已知样品中茯苓酸A和32表去氢土莫酸含量80、100和120的茯苓酸A与32表去氢土莫酸混合对照品溶液,按“21212”项下方法制备,并按“211”项下色谱条件,进样测定。计算得茯苓酸A和32表去氢土莫酸的回收率分别102163RSD119和98188RSD112。218样品的含量测定分别取5份购自不同药店的茯苓皮样品,按2009,VOL33,NO6273PROGRESSINPHARMACEUTICALSCIENCES研究与交流2009年第33卷第6期第273页“21212”项下方法制备成样品溶液5份,按“211”项下色谱条件,每份进样3次;另取混合对照品溶液,进样3次,按外标法计算得茯苓酸A和32表去氢土莫酸的含量见表1。表1茯苓皮药材中茯苓酸A和32表去氢土莫酸的含量TABLE1CONTENTOFPORICOICACIDAAND32EPIDEHYDROTUMULOSICACIDINSAMPLESN3来源茯苓酸A32表去氢土莫酸国盛连锁药房010243010099御恩堂010317010112益丰大药房010326010122国盛药业010383010102先声药店010403010137219市售茯苓皮药材成分比较试验分别取5份购自不同药店的茯苓皮样品,按“21212”项下方法制备成样品溶液5份,按“211”项下色谱条件,每份进样1次;另取混合对照品溶液,进样1次。结果表明,来自不同药店的茯苓皮药材在成分上保持了较好的一致性见图1。1茯苓酸A;232表去氢土莫酸A1混合对照品;B1购自国盛连锁药房;C1购自御恩堂;D1购自益丰大药房;E1购自国盛药业;F1购自先声药店图1市售茯苓皮药材甲醇提取物的HPLC图FIGURE1HPLCSPECTRUMOFDIFFERENTPORIAPEELPURCHASEDFROMMARKET讨论三萜酸类成分是茯苓皮中的主要有效成分,具有多种生物活性。本实验采用高效液相色谱法,在25分钟内能直接测得茯苓皮中两个主要的三萜酸类成分茯苓酸A和32表去氢土莫酸的含量。该法操作简单,线性范围宽且杂质干扰小,稳定性和重复性好,具有快速、准确、灵敏度高的特点,是一种较为理想的测定方法。提取溶剂和提取方法的不同对于茯苓酸A和32表去氢土莫酸的提取能力也有所不同。本实验考察了70乙醇、无水乙醇、70甲醇和甲醇对茯苓皮中总三萜类的提取能力,结果表明,甲醇的提取效率最高。另外还考察了冷浸、超声和回流提取对两种三萜酸的提取能力,结果表明,超声提取的效果最好。本实验证明茯苓皮的甲醇提取物中主要含有茯苓酸A、32表去氢土莫酸以及保留时间在20MIN以后的一些弱极性组分,此外还证明了市售茯苓皮药材在成分上的一致性,为该味中药材可以开发成为质量可控的现代中药或中药提取物提供了依据。参考文献1凌一揆,颜正华中药学M上海上海科学技术出版社,19849512国家中医药管理局中华本草编委会中华本草上册M上海上海科学技术出版社,199955413仲兆金,刘浚茯苓有效成分三萜的研究进展J中成药,2001,2315814仲兆金,许先栋茯苓三萜化学成分及其光谱特征研究进展J中国药物化学杂志,1997,717127815段启,李霞兰,王少军,等HPLC法测定茯苓皮中茯苓酸J中草药,2006,372284228516胡燕,王明亮,邱国福,等高效液相色谱法测定茯苓皮的指纹图谱J分析科学学报,2006,226636264017王少军,段启,曹君,等茯苓皮中三萜酸类成分HPLC指纹图谱的方法学研究J中药新药与临床药理,2005,1615325518郑艳,杨秀伟茯苓三萜类化合物在人源CACO22细胞单层模型中的吸收研究J中国中药杂志,2008,331315962160119SEKIYAN,GOTOH,SHIMADAY,ETALINHIBITORYEFFECTSOFTRITERPENESISOLATEDFROMHOELENONFREERADICAL2INDUCEDLYSISOFREDBLOODCELLSJPHYTOTHERAPYRES,2003,1721602162110UKIYAM,AKIHISAT,TOKUDAH,ETALINHIBITIONOFTUMOR2PROMOTINGEFFECTSBYPORICOICACIDSGANDHANDOTHERLANOSTANE2TYPETRITERPENESANDCYTOTOXICACTIVITYOFPORICOICACIDSAANDGFROMPORIACOCOSJJNATPROD,2002,65446224651
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