氨苄西林与双黄连注射液单用及配伍时对大鼠CYP2D6 的影响.pdf

书书书药物研究氨苄西林与双黄连注射液单用及配伍时对大鼠的影响王欢，吴东媛，杜智敏（哈尔滨医科大学附属第二医院药学部药物研究所、黑龙江省高校重点实验室，）摘要目的通过氨苄西林和双黄连注射液的大鼠体内、外实验，观察两种药物分别给药及合用时对大鼠的影响。方法对照组和实验组大鼠分别经尾静脉注射给予氯化钠溶液、双黄连注射液、氨苄西林、双黄连注射液联合氨苄西林，均给药周。高效液相色谱法测定大鼠尿样及肝微粒体中探针药物右美沙芬的代谢率，观察氨苄西林、双黄连注射液分别单用及合用时对大鼠活性的影响。通过法测定其对大鼠肝微粒体蛋白表达的调控。结果实验组大鼠分别给予双黄连注射液、氨苄西林及双黄连注射液配伍氨苄西林时，尿样中右美沙芬代谢率与对照组差异无显著性（）；实验组大鼠肝微粒体中加入右美沙芬（），右美沙芬代谢率与对照组差异无显著性（）；各实验组与对照组蛋白表达差异无显著性。结论双黄连注射液、氨苄西林单用和两药配伍使用均不影响酶的活性，与同时使用经代谢的其他药物不会产生相互作用。关键词氨苄西林；双黄连注射液；肝微粒体中图分类号；文献标识码文章编号（）G21，（，），；（）（）；，；细胞色素（，）为肝脏中重要的相代谢酶，参与多种重要药物代谢。许多药物治疗浓度范围窄，低浓度时疗效不佳，而较高浓度时出现毒性作用，因而确定某种药物是否影响该亚型酶代谢具有非常重要的临床意义。氨苄收稿日期基金项目国家高技术研究发展计划（计划）资助项目（基金编号：）作者简介王欢（），女，黑龙江牡丹江人，在读硕士，主要研究方向：药物代谢与临床药学。电话：，：。通讯作者杜智敏（），女，博士，教授，博士生导师，主要从事心血管药物与药动学研究。：。西林属广谱抗菌药，而双黄连注射液也具有抗病毒及抗菌作用。据文献报道，双黄连注射液联合氨苄西林静脉滴注时其抗菌和抗病毒作用加强，两药配伍较两药单用疗效更好。笔者在本实验中通过高效液相色谱法（）测定双黄连注射液、氨苄西林及两药配伍时对大鼠尿液和肝微粒体重组系统中探针药物右美沙芬（，）及代谢物去甲右美沙芬（，）浓度的影响，探讨两种药物单用与配伍时对肝微粒体亚型酶活性的影响。实验材料动物雄性大鼠，体重（），由哈尔滨医科大学动物中心提供，批号：。试药，批号：；，批号：；医药导报年月第卷第期葡萄糖醛酸酶（批号：）；己烷磺酸钠（批号：）购于公司。内标丁丙诺啡（，），批号：，购于中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈为色谱纯。正丁醇、正己烷、磷酸二氢钾、氢氧化钠为国产分析纯。双黄连注射液购于哈尔滨医科大学附属第二医院门诊，哈药集团三精制药有限公司生产，批号：。氨苄西林购于哈尔滨医科大学附属第二医院门诊，哈药集团制药六厂生产，批号：。一抗，批号：（兔抗人）购自公司，二抗，批号：（山羊抗兔）购自公司。仪器色谱管理系统（自动进样器，泵，荧光检测器）；高速冷冻离心机（美国公司），柱（，大连依利特公司），型水浴恒温振荡器（江苏金坛市亿通电子有限公司）。方法动物模型的制作将大鼠随机分成组：对照组、双黄连组、氨苄西林组及双黄连氨苄西林配伍组，每组只，组大鼠分别自尾静脉注射给予氯化钠溶液，双黄连注射液，氨苄西林（溶于氯化钠溶液）、双黄连氨苄西林连续诱导周，第天时组大鼠均灌胃给予，并留置代谢笼收集尿液后，大鼠断头处死（处死前禁食）。取尿样和肝脏，分别置于和冰箱保存备用。尿样处理取尿样，加入葡萄糖醛酸酶和溶液，值醋酸钠缓冲液，混旋，置于水浴水解后加入提取液正己烷正丁醇（，）及氢氧化钠，混旋，离心，取出上层有机相置于具塞离心管中，加入盐酸混旋，离心，小心取下层水相，进样分析。肝微粒体的制备肝组织经剪碎、漂洗、吸干后称重，按（）加入值为匀浆缓冲液（内含，氯化钾），冰浴，用玻璃匀浆器制成肝匀浆，离心，取上清液离心，取沉淀重悬于蔗糖溶液中，分装，置于冰箱内保存，用方法测定肝微粒体的蛋白浓度。肝微粒体体外温育系统及样品处理温孵反应体系中包括肝微粒体蛋白浓度为，异柠檬酸钠，异柠檬酸脱氢酶，氯化镁，探针药物，以的磷酸盐缓冲液（值）定容至，反应前加入。该混合物在水浴中温育后加入冰冷的三氯醋酸终止反应。反应液中加入（），氢氧化钠，正己烷正丁醇（，），混悬振荡提取，离心，取上层有机相置于具塞离心管中，加入盐酸混旋，离心，取下层水相进样分析。测定探针药与代谢物的色谱条件色谱管理系统（自动进样器，泵，荧光检测器）；流动相：磷酸二氢钾己烷磺酸钠乙腈甲醇（，），值，流速，色谱柱：柱（，大连依利特公司），室温下测定，。尿样及肝微粒体温育系统中的和均采用以该色谱条件测定。的蛋白表达取各组大鼠肝微粒体，用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电转移至硝酸纤维素膜上。室温下在封闭液（含脱脂奶粉的）中封闭，加入的抗体（稀释）温育，用冲洗次（每次），加入二抗（稀释）孵育，冲洗次，化学发光法发光显迹，线胶片显影，凝胶的线照片用光密度分析仪对免疫特异性条带进行扫描分析。统计学方法体内尿样本中得出各实验组和对照组的代谢率和相应体外肝微粒体重组实验中得出的数据做统计分析。实验结果均以表示，比较各组间差异，用单因素方差分析检验。结果体内实验中双黄连注射液、氨苄西林及两药配伍时对活性的影响尿样品色谱图在“项所述和测定的色谱条件下，标准品中、和三者分离良好（见图），空白尿样中未出现和峰（图），并且和与尿液中的干扰成分可较好的分离，与内标也分离良好（图），其保留时间（）分别为（），（），（）。尿样色谱图见图。体内氨苄西林、双黄连及其配伍时对活性的影响称量每只大鼠的肝脏重量及体重，相对肝脏重（）大鼠肝脏重量体重。各组间大鼠相对肝脏重差异无显著性，说明氨苄西林、双黄连及其配伍时对大鼠相对肝脏重没有影响，结果见表。用法测定大鼠尿液中与的浓度比，的代谢率（）。各组代谢率差异无显著性（，），说明氨苄西林、双黄连注射液及其配伍时对大鼠的活性没有影响，结果见表。图种尿样的高效液相色谱图；表组大鼠尿液中代谢率及相对肝重测定结果组别剂量大鼠尿液中代谢率肝重：大鼠重（）双黄连注射液组氨苄西林组两药配伍组对照组体外实验中双黄连注射液、氨苄西林及两药配伍时对大鼠肝微粒体酶活性的影响肝微粒体体外重组系统色谱图在“”所述测定和的色谱条件下，标准品中、及干扰峰分离良好。图为空白肝微粒体体外重组系统中加入探针药及标准品所得到的高效液相色谱图。图肝微粒体体外重组系统色谱图；体外实验活性的变化法测定肝微粒体重组系统中及其代谢物浓度，代谢率，观察探针药物代谢率变化情况。结果显示实验组和对照组代谢率差异无显著性（，），结果见图。图组代谢率双黄连注射液、氨苄西林及其合用对大鼠蛋白表达的影响组大鼠肝微粒体对蛋白表达的结果见图。其他各组肝微粒体对蛋白表达略高于对照组，但各组间的表达均差异无显著性。图组大鼠肝微粒体蛋白表达测定结果讨论药物相互作用是产生药物不良反应的重要原因。其中药物代谢性相互作用占其发生率的。肝微粒体酶的细胞色素是肝微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族，在外源性物质和内源性物质的代谢中起着极其重要的作用，机体的药物代谢都要通过，其中含量占肝脏蛋白总量的，虽然含量不高，但参与代谢的药物却占总代谢药物的。的底物均为其竞争性抑制药，其中有研究报道较强的抑制药有余种，这些药物可抑制的活性，使抗心律失常药、受体阻滞药、抗高血压药、抗抑郁药以及抗精神病药中经代谢的药物消除减慢，血药浓度升高，不良反应发生率升高，甚至出现不良反应。氨苄西林与双黄连注射液均为临床常用的抗菌药物，且双黄连与氨苄西林钠配伍较两药单用疗效更好。但二者对亚型的影响笔者还未见报道。明确氨苄西林与双黄连注射液对的影响正是本研究的宗旨所在。本研究中用氨苄西林、双黄连及两药配伍作为受试医药导报年月第卷第期药物，动物实验中探针药物选用，测定代谢率，反映大鼠的活性。为作出全面判断，本实验从体内、体外及蛋白表达三个角度来测定酶的活性。本实验还简化了色谱条件，使尿样与肝微粒体中样本的测定都在同一配比的流动相下完成。体内、外实验结果一致，表明氨苄西林、双黄连及其配伍时对大鼠亚型均没有抑制或诱导作用。但氨苄西林与双黄连注射液对其他亚型酶有无诱导或抑制作用，还不明确，因而下一步将研究氨苄西林与双黄连注射液对，等其他亚型酶是否有影响，并运用和技术，深入到分子生物学角度去研究酶被诱导或抑制后其蛋白和基因的变化。参考文献，（），（）：杜智敏，朱波，张波双黄连注射液与注射用青霉素钠配伍的稳定性及体外抑菌实验哈尔滨医科大学学报，（）：于卫江，黄丽军，刘艳，等奥扎格雷钠对大鼠亚型酶的影响中国药理学通报，（）：，（）：，（）：闫淑莲，扈金萍，徐艳霞，等探针药物同时评价连翘对肝细胞色素的影响中国药学杂志，（）：，（）：郭阓，魏君丽双黄连雾化吸入防治头颈部肿瘤急性黏膜放射反应护理学杂志，（）：木瓜中等极性部位高效液相色谱指纹图谱研究陶君彦，张晓昱，黄志军，熊富良，张琼光，肖飞（华中科技大学生命科学与技术学院，武汉；武汉健民药业集团股份有限公司，武汉）摘要目的研究不同采收时间和不同炮制方法的木瓜药材中等极性部位指纹图谱，为木瓜的规范化种植与合理应用提供依据。方法以咖啡酸、绿原酸为参照物，采用高效液相色谱（）法测定分析各指纹图谱，色谱条件：（，）色谱柱；流动相：（）乙腈甲醇（），（）磷酸梯度洗脱，（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）；流速：；检测波长：。结果木瓜中等极性部位指纹图谱有较好的相关性，木瓜不同采