超滤去除清开灵注射液中热原的研究木.pdf

北京中医药大学学报第32卷第11期2009年11月776JournalofBeijingUnivemiUofTraditionalChineseMPdieineV0132No1tNov，2009中药制剂超滤去除清开灵注射液中热原的研究木姜翠莲1史新元2王耀1周海燕1乔延江2(1北京中医药大学药厂北京101300；2北京中医药大学中药学院)摘要：目的选择适用于清开灵注射液除热原的超滤膜。方法采用鲎试剂凝胶法，在对超滤膜除细菌内毒素性能初步筛选后，确定一种膜孔径用于清开灵注射液除热原。用含有热原的清开灵注射液通过选定的膜过滤，以热原检查法检查热原，验证超滤膜的除热原效果，并以指标性成分黄芩苷的转移率和膜通量对膜工艺条件进行筛选。结果用灵敏度006EUmL的鲎试剂检查，饮用水通过10KD和30KD的膜后符合注射用水内毒素标准要求，6批产品超滤前热原检查，3只家兔升温总和最低104，最高240，经过30KD膜超滤后升温总和最低043，最高088，明显低于1。0；药液温度为40、泵转速250rrain、操作压力为0。100。15MPa时超滤通量最大，效率最高。结论选择30KD的超滤膜能有效去除清开灵注射液中的热原，药液温度、泵转速对膜通量有显著影响，超滤后黄芩苷的转移率为9715，指标性成分含量符合清开灵质量标准。关键词：超滤；清开灵注射液；细菌内毒素；热原中图分类号：R283RemoveofpyrogenbyultrafiltrationfromQingkailingInjection+JIANGCui1ianl，SHIXinyuan2，WANGYa01，ZHOUHaiyahl，QIAOYan-jian92(1PharmaceuticalFactory，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing101300；2SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofChineseMedicine)Abstract：ObjectiveToselecttheuhrafihrationnlembraneforremovingpyrogenfromQingkailingInjectionMethodsThetachypleusamebodytelysate(仉地)一gelmethodwasusedtodetermineaporesizeofultrafiltrationIiKjlnbraneforremovingpyrogenfromQine；kailingInjectionafterinitialscreeningofthecapabilityofthemembraneineliminationofbacterialendotoxinThepyrogenwagdetectedbypyrogentesttoverifytheeffectofpyrogeneliminationofthemembranewhenQingkailingInjectionp酬throughTheprocessingconditionofthemembraneWagscreenedbasedonthen旨ns裔rateandmembranefluxofbaicalin(indexconstituent)Results7n地withthesensitivityof006EUmLwasusedinthemembraneexaminationr111ed而nkwaterwaschangedtomeetthestandardofinjectionwaterafterpassingthroughthemembralleof10KDand30KDInthepyrogenexaminationof6batchesofQingkailingInjectionbeforeuhrafihrationtheminimumSHillofelevatedtemperatureWag104andinaximulnwag240ocinthreerabbitsAfteruhrafiltrationbythemembraneof30KDtheminimumsamofelevatedtemperatureWag043andmaximulnwag088whichWagsignificandylowerthan10矾enthetemperatureofQingkamngInjectionwas40pumpspeedWag250rmin，andworkingpressureWag0104)15MPa，theuhrafiltraionfluxWagthehighestwithmaximumefficientConclusionTheuhrafiltrationmembraneof30KDCanbeusedtoeliminatepyrogenfromQi,O,ilingInjectioneffectivelyThetemperatureandpmnpspeedhaveinfluencesonmembranefluxsignificantlyThetransferrateofbaicalinis9715afteruhrafiltration，whichindicatesthatthecontentofindexconstituentmeetstheqllalitystandardofQingkailingInjectionKeywords：ultrafihration；QingkailingInjection；bacterialendotoxin；pymgen姜翠莲，女，硕士，副主任药师#通讯作者：乔延江，男，博士，教授，博士生导师，研究方向：中药质量控制北京中医药大学校级课题万方数据第11期姜翠莲等超滤去除清开灵注射液中热原的研究777清开灵注射液属小容量注射剂，采用流通蒸气灭菌，其F0值小于8，达不到无菌保证的要求。因此，必须加强生产过程控制，使细菌和热原的污染降低，提高最终产品的无菌保证水平。现有的除热原方法为活性炭法，操作复杂，不利于清洁生产。超滤法除热原因其操作简单，药液无需反复加热等优点，已在制药工业中得到广泛应用1。本文采用鲎试剂凝胶试验法和热原检查法，对不同孔径的超滤膜去除细菌内毒素效果和除热原效果进行了评价，并对超滤工艺条件进行了研究，为合理使用超滤法除热原提供了依据。1材料11仪器超滤组件(中国科学院生态环境研究中心提供)：蠕动泵、储液槽、压力表等，超滤膜孔径分别为10KD(千道尔顿)、30KD、50KD，过滤面积为016m2；202A台式电热干燥箱(中国天津泰斯特仪器有限公司)；电子恒温水浴箱(中国天津泰斯特仪器有限公司)；旋涡混合器(天津药典标准仪器厂)。Ag-ilent1100series高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，包括：四元泵、真空脱气泵、自动进样器、柱温箱、DAD二极管阵列检测器、HP数据处理工作站。WRY2000微机热原测温仪(上海达亿实业有限公司)；肛门体温计(精度为01)、烘箱、婴儿秤、注射器、兔子固定架。12药品与试剂鲎试剂(标示灵敏度入025EUmL，规格：O1mL支，批号：050932)，厦门市鲎试剂实验厂生产；鲎试剂(入006EUmL，规格：01mL支，批号：20061120)，湛江安度斯生物有限公司生产；细菌内毒素工作标准品(批号：200610，规格100EU支)，购自中国药品生物制品鉴定所；细菌内毒素检查用水(规格：10mL支，批号：W200609，内毒素含量小于0005EUmL)，购自中国药品生物制品检定所。黄芩苷对照品(批号：110715-200212)，购自中国药品生物制品鉴定所；甲醇、甲酸(北京化学试剂厂，分析纯)，纯化水；75乙醇；甘油；含热原的清开灵注射液(批号：1913、2009、2010、2313、2615、2702)，由北京中医药大学药厂提供。13动物大耳白兔，体重1730kg，合格证号为SXCK(京)2007-0002，由北京医科大学实验动物室提供。2方法21超滤组件去除细菌内毒素性能的评价211鲎试剂灵敏度(入)复核按中国药典一部附录细菌内毒素检查法3j附录79进行。212样品制备与检测分别采用膜孔径为10、30、50KD的超滤组件，饮用水冲洗23min以除去制膜时残留的溶剂，再用2氢氧化钠溶液循环冲冼45rain，用超滤水冲洗至出水pH值为中性，然后连接到饮用水上，控制进口压力不超过010MPa，30min后用已消毒的三角瓶取超滤水和饮用水。分别检测其内毒素。22超滤组件去除热原性能的评价221样品制备按212方法将超滤组件消毒处理后，将含热原的八混液通过30KD的超滤膜，控制进口压力在O10015MPa范围内，用已消毒的三角瓶取超滤液，检测其热原。222热原检查按中华人民共和国药典一部附录热原检查法31附录66进行。23膜分离工艺条件筛选231样品制备按处方配比取水牛角、珍珠母水解液、板蓝根提取液、栀子提取液、猪去氧胆酸和牛胆酸混合液，经过醇处理后，加入银黄液适量，配成八混液，混匀，调pH75，045斗m的微孔滤膜过滤后，通过30KD超滤膜。以通量最大、黄芩苷转移率最高为原则，对泵转速、操作压力、药液温度3个因素，在3个水平下采用k(3)4正交表进行条件优选。232黄芩苷含量测定分别测定超滤前后黄芩苷含量，计算有效成分转移率。黄芩苷色谱条件：色谱柱为AgilentZorbaxsBC18色谱柱(46mm250mm，5岬)；流动相：甲醇一01甲酸(60：40)；流速10mLmin；检测波长280am；柱温30。233膜平均通量测定在超滤开始、中间、结束前各测定1次透过液通量，取平均值，单位为L(n12h)。2。34指标性成分测定按清开灵注射液质量标准对超滤后药液的含量进行测定。万方数据778北京中医药大学学报第32卷3结果31超滤组件去除细菌内毒素的结果311鲎试剂灵敏度(入)复核结果灵敏度入为025EUmL复核结果：最大浓度05EUmL(2入)管均为阳性(n=4)，最低浓度0。06EUmL(025入)管均为阴性(疗=4)，阴性对照管为阴性(7,=2)，复核值k为025EUmL，在05入一2入之间，说明鲎试剂(厦门市鲎试剂实验厂)标示灵敏度符合要求，可用于实验。灵敏度入为006EUmL复核结果：最大浓度012EUmL(2入)管均为阳性(n=4)，最低浓度0015EUmL(025入)管均为阴性(rt=4)，阴性对照管为阴性(n=2)，复核值x。为006EUmL，在05入一2入之间，说明鲎试剂(湛江安度斯生物有限公司)标示灵敏度符合要求，可用于实验。312样品检测结果超滤前饮用水细菌内毒素不合格；经过不同孔径的膜过滤后，细菌内毒素025EUmL，符合注射用水内毒素标准要求，说明10、30、50KD3种孔径的超滤膜均能去除细菌内毒素，但50KD的超滤膜效果稍差，用灵敏度006EUmL的鲎试剂检查有阳性结果出现，说明除热原效果不可靠，可能存在风险。10KD和30KD的膜除热原效果可靠，从膜通量考虑，最终选择30KD的膜用于清开灵注射液除热原。32超滤膜组件去除热原的结果结果见表1。表1超滤前后各批号产品升温情况()由表1可知，6批产品经过超滤后升温总和最低043，最高088，明显低于内控标准10，说明经过30KD聚砜共混膜超滤后能有效去除清开灵注射液中的热原，最终达到产品热原合格。33膜分离工艺条件筛选结果3。31除热原膜过滤最佳操作条件k(3)4正交试验因素水平及结果见表2、表3、表4、表5，由直观分析和方差分析结果可知：影响膜通量的因素由大到小分别是药液温度(c)、泵转速(A)、操作压力(B)，在O10015MPa范围内压力对实验结果影响不大，而药液温度和泵转速对通量有明显影响；最佳试验条件为c，A，即药液温度为40、泵转速为250rmin，操作压力为010015MPa时，超滤通量最好，效率最高；药液温度、泵转速和操作时的压力对黄芩苷的转移率影响不大。表2正交试验的因素水平表4以平均膜通量为指标时的方差分析表5以黄芩苷转移率为指标时的方差分析综合考虑膜通量和黄芩苷转移率的影响因素，实际操作时工艺条件选择药液温度为40、泵转速为250rmin，操作压力为010一O15MPa。(下转第785页)万方数据第11期王少杰等温肾利湿、活血降浊法治疗慢性肾衰竭187例临床观察785摄，但若加重瘀浊内阻，则得不偿失。所以，我们将炭类药与活血药配伍运用，止血不留瘀，活血不破血。通过对患者用药前后PLT、PT、APrT指标的观察，证实本方剂对患者的出凝血系统无明显影响，未造成患者血液循环障碍。炭类药与活血药的应用比例应视患者情况而定。研究表明，大黄确能延缓CRF的发展，并能明显改善患者的营养状态怿J，增加Scr、Bun肠道排泄，起到保护肾单位的效果。但大黄药性寒凉，恐有伤阳之弊。临床应用大黄治疗CRF，建议辨证用药，若患者有便秘、尿黄、口疮、口干、咽痛等热象时，可加用大黄615g，若无上述表现，建议不用此药。总之，中草药治疗CRF疗效肯定，前景广阔，目前对于某些单味药的药理有了较深入的研究，为临床应用提供了可靠依据。但我们建议，应用中药治疗CRF，切不可拘泥于现代药理研究结果，单纯辨病论治，应以辨病、辨证相结合为要务。参考文献：1王海燕，郑法雷刘玉春，等原发性肾小球疾病分型与治疗及诊断标准专题座谈会纪要J中华内科杂志，1993，32(2)：1311342郑筱萸中药新药临床研究指导原则M北京：中国医药科技出版社，2002：1631683王永钧，刘文军，谢恬，等活性炭治疗56肾切除所致慢性肾衰大鼠模型的实验研究J中国现代应用药学，1997，14(5)：11144徐大基单味中药治疗慢性肾功能衰竭的研究概况J新中医，1999，31(10)：58595俞雨生，黎磊石，章旭中药大黄治疗慢性肾衰的远期疗效观察J肾脏病与透析肾移植杂志，1995，4(1)：3335(收稿日期：20094)4-29)+-+-卜+-+-+一f-叶-+一+-+-卜+-+_一+-+-一。卜_+斗-+-+-+-呻-+-+-+一(