川崎病患儿NKG2D表达变化初探

遵义医学院硕+学位论文遵义医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确说明并表示了谢意。学位论文作者签名岛-女 签字日期：刍年岁月细日遵义医学院学位论文版权使用授权书本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：遵义医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权遵义医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文，即：遵义医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位做作者躲瓠签字日期：，侈年r月h日II导师签名：而芬谆签字日期：wI；年r月如日遵义医学院硕十学位论文缩略词KDMCLSNKCTLCALMCULBP英文全称Kawasaki disease英文缩略词表 中文全称川崎病嘲丽mucocutaneous lymphnode syndrome 皮肤黏膜淋巴结综合征自然杀伤CD8+cytotoxic lymphoeytes CD8+细胞毒性T淋巴细胞coronary artery lesion 冠脉损伤mononuclear cells 单核巨噬细胞UL-1 6 bmding proteins 人巨细胞病毒蛋白ULl6的结合蛋白MICA major histocompatibility complex I MHC I相关分子APCRILTNF伍mRNAELISAIFN吖TGFpIGAPCRADAPITAMP13KSTAT5chain related molecules Apolymerase chain reactioninterleukintransforming growth factor pantigen presenting cellrheumatoid arthritisadaptor proteinactivation motifsphosphatidylinositol3-kinaseIll聚合酶连反应白细胞介素肿瘤坏死因子a信使RNA酶联免疫吸附干扰素-r转化生长因子p丙种球蛋白抗原提呈细胞风湿性关节炎转接蛋白免疫受体酪氨酸活化基序磷脂酰肌醇3激酶信号转导和转录活化遵义医学院硕士学位论文 英文缩略词表NFATSYKZAP70H60RaelHCNGPIIDDMSLEof trauscription 5 蛋白5nuclear factor of activated T cells T细胞核因子spleen tyrosine kinase(-chain-associated protein of 70000ahistocompatibility 60retinoicacid early transcripthuman cytomegalovirusglycosyl-phosphatidyl inositolinsulin dependent diabetessystemic lupus erythematosus脾酪氨酸激酶70000的链相关蛋白次要组织相容性抗原60视黄酸早期转录因子1人类巨细胞病毒糖基磷脂酰肌醇胰岛索依赖性糖尿病系统性红斑狼疮遵义医学院硕士学位论文 目录II目 录l、 论文：川崎病患儿NKG2D表达变化初探1英汉缩略词对照表中文摘要1英文摘要2前言4日日舌材料与方法5结果12讨论24结论26参考文献272、 综述：NKG2D及其配体研究进展313、 致谢494、 作者简介50V遵义医学院硕+学位论文 中文摘要曼皇曼曼曼鼍曼曼曼曼曼皇曼曼曼皇曼曼量曼曼鼍量量曼I|一 II III II 川崎病患儿NKG2D表达变化初探中文摘要目的l观察川崎病(1)患儿自然杀伤(NK)细胞和CDS+T细胞表面NKG2D表达，探讨导致KD患儿免疫功能紊乱的可能机制。方法：我院2011年7月2012年4月住院急性期KD患几46例，其中冠脉损伤患儿(CAL+)16例，非冠脉损伤患儿(CAL。)30例，同龄健康对照(NC)30例。KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IG)治疗前后直接取血备检。流式细胞术检测外周血NK细胞、CD8+T细胞表面激活性受体NKG2D及抑制性受体NKG2A表达，CDl4+单核细胞(MC)表面NKG2D配体MHC I相关分子A(MICA)与人巨细胞病毒蛋白ULl6的结合蛋白l(ULBP1)表达；采用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)检测CDl4+(MC)I兰i细胞介素113(IL18)、IL6、肿瘤坏死因子a(TNFa)mRNA表达；酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆IL7，IL12，IL-15，干扰素丫(IFNw)以及转化生长因子13(TGFp)等细胞因子浓度。结果：1急性期KD患儿NK细胞及CDS+T细胞表面NKG2D表达明显低于对照组(P005)，C心组比CAL组表达下调更为显著(P005)。2经IVIG治疗后，KD患儿(KDwm)NK细胞及CDS+T细胞表面NKG2D表达较治疗前有不同程度恢复。3急性期KD患儿CDl4+MC细胞炎症细胞因子IL1p、IL6、TNFa mRNA水平显著高于同年龄对照组(Po05)。4急性期KD患儿NKG2D表达调控性细胞因子IL7与IL15明显低于对照组(PO05)。结论：KD患儿NK细胞、CD8+T淋巴细胞NKG2D表达下调可能是导致KD患儿NK细胞和CDS+T淋巴细胞杀伤活性下降，MC异常活化，炎症细胞因子高表达的原因之一；IL7、IL15与IFNy等细胞因子浓度异常参与NKG2D表达下调：IVIG可能通过调控儿7等细胞因子产生间接调节NK细胞与CD8+T细胞NKG2D表达关键词： 川崎病；丙种球蛋白；Nl(G2D；炎症因子遵义医学院硕十学位论文 英文摘要Aberrantly Decreased Levels of NKG2D Expression in Childrenwith Kawasaki DiseaseAbstractobjective：The study is designed to investigate the changes of NKG2D expression onCD8+T cells and CD3CD56+NK cells in Kawasaki disease(1(D)Methods：46 children with KD admitted to the Shenzhen Children Hospital between June20 1 1 and April 20 1 2 were included in the studyPatients with KD were divided into theCoronary artery lesion(KDCAL+)group(11_l 6)and the KDCALgroup(n_30)according to the echocardiographic examination results30 age-matched healthy children(Nc)were enrolled into this studyBlood samples were obtained before treatment with 2g kgI day-I intravenous immunoglobulin(IVIG)and after IVIG treatedNKG2DNKG2Aexpression on CD3CD56+NK cells and CD8十T lymphocytes，and NKG2D ligands such asmajor histocompatibility complex I chain related molecules A(MICA)and UL-1 6 bindingproteins(ULBP1)expression on CDl4+mononuclear cells(MC)WeTanalyzed by flowcytometry in patients with KDReal-time polymerase chain reaction(PCR)Was used toevaluate the mRNA levels of interleukin(IL)一1 p，IL-6 and tumour necrosis factor(TNF)-ain CD 1 4+cellsPlasma cytokine【IL-7，IL-1 2，IL1 5，interferon(IFN)-丫and transforminggrowth factor(TGF)-fI】concentrations were measured by ELISAResults：1The levels of NKG2D on NK cells and CD8+T cells expression in acute phaseof KD were significantly lOWer than those in normal controls伊O05)，and the levels ofNKG2D expression in the patients with coronary artery lesion(KD-CAL+)Were lower thanthese in KDCALpatients2There were up-regulated tendency after treatment、)l，itll WIG3We found higher expression levels of proinflammatory cytokines from MC，such asIL-l p，IL-6，TNF-a in KD patients compared埘m the healthy controls妒o05)4Theconcentrations of IL7 and IL1 5 were significantly decreased in acute phase of KD(P005)，and to some extent elevated after therapy诵tll IVIG(p，005)，while antagonisticcytokines like IFN-丫Will8 increased in acute phase of KD005)，and reduced aftertherapy with IVIG妒30ram，年龄5岁以上者冠脉内径40ram，或已发生冠状动脉瘤的患儿。据此，将KD患儿分为冠脉损伤组(KDC心，n-16)和非冠脉损伤组(KDCAL。，n=30)。同年龄健康儿童(NC)30例，为同时期在儿童保健科体检儿童，其中男16例，女14例，平均年龄2岁(11岁至43岁)。所有全血标本取后均立即送检。实验获受试患儿家长知情同意，且通过医院医学伦理委员会批准。12主要实验试剂121流式细胞术标记抗体抗体：CD3FITC 同型对照：FITC Mouse IgGl Beckman Coulter公司CD8PC5 同型对照：PC5 Mouse IgGl Beckman Coulter公司CD 1 4PC5 同型对照：PC5 Mouse IgGl Beckman Coulter公司CD56PC5 同型对照：PC5 Mouse IgGl Beckman Coulter公司NKG2A-PE 同型