骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞间质转分化的影响

学校代码：10114 分 类 号： 硕 士 学 位 论 文 骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响 研 究 生： 王 凤 娇 指导教师： 马 宏 专业名称： 儿 科 学 研究方向： 小儿肾病学 学位类型： 科学学位 所在学院： 第一临床医学院 中国 山西 二O一三年三月 分类号： 单位代码：10114 密 级： 学 号：201010195 骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响 研 究 生： 王 凤 娇 指 导 教 师： 马 宏 申请学位门类级别： 科 学 学 位 专 业 名 称： 儿 科 学 研 究 方 向： 小 儿 肾 病 学 所 在 学 院： 第 一 临 床 医 学 院 二O一三年 三月 学位论文独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果： 1、交回学校授予的学位证书； 2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报； 3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。 4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名： 日期： 年 月 日 指导教师签名： 日期： 年 月 日 （本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用） 目 录 中文摘要1 英文摘要3 缩略词表5 前 言7 材料方法10 结 果16 讨 论20 结 论24 参考文献25 综 述27 附 图40 致 谢46 个人简历47 山西医科大学硕士学位论文 1 骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响 摘 要 目的：本实验旨在检测34周龄雄性SD大鼠单侧输尿管梗阻模型（UUO模型）肾组织中-肌动蛋白（-SMA）、E-钙黏蛋白（E-Cad）、转化生长因子-1（TGF-1）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）mRNA的表达，从而探讨骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化（EMT）的干预效应及相关机制。 方法：将54只3-4周龄的雄性SD大鼠随机等分为3组：假手术组18只、UUO模型组18只及UUO模型骨化三醇干预组18只，采用单侧输尿管结扎的方法制备大鼠肾间质纤维化模型（UUO模型）。于手术后第1天起，干预组给予骨化三醇0.1ug/(kgd)溶于0.2ml的花生油中灌胃，其余两组均给予等量花生油灌胃。灌胃分别满3天、7天、14天使每组各取6只大鼠并处死，取大鼠肾组织。利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组大鼠肾组织中-SMA、E-Cad、TGF-1、BMP-7 mRNA表达水平变化。 结果：1.采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型成功，结扎侧肾脏体积明显变大，皮质变薄。2. RT-PCR法检测各组各时间点肾组织中-SMA、E-Cad、TGF-1、BMP-7 mRNA表达结果：假手术组大鼠肾组织-SMA、TGF-1 mRNA表达表达甚微，E-Cad、BMP-7 mRNA表达非常丰富，各时间点组内差异无统计学意义（P0.05）；随着梗阻时间的延长，UUO模型组大鼠肾组织中-SMA 、TGF-1 mRNA表达进行性上调（P0.01），且较假手术组显著增加（P0.01），而UUO模型组中E-Cad、BMP-7 mRNA表达进行性下降（P0.01），且较假手术组明显减弱（P0.01）；与UUO模型组相比，UUO模型骨化三醇干预组各时间点-SMA、TGF-1 mRNA表达明显受抑，差异有统计学意义（P0.01），但仍显著高于假手术组（P0.01），而E-Cad、BMP-7 mRNA表达较UUO模型组明显增加，但仍显著低于假手术组（P0.05)； As the time going by, Compared to sham-operated group, E-Cad and BMP-7 mRNA 山西医科大学硕士学位论文 4 expressions in group B were increased sharply(P0.01), but which were restrained obviously in group C (P0.01)； On the contrary ,the expressions of a-SMA and TGF-1 mRNA in group B were reduced (P0.01), but which were down-regulated in group C (P0.01). Conclusion: The study demonstrated the expressions of -SMA、E-Cad、TGF-1、BMP-7 mRNA correlated with tubular epithelial myofibroblast transdifferentiation (EMT). And Calcitriol could restrain the progress of EMT in UUO rats, which may be associated with the up-regulated expression of BMP-7 mRNA and the increased expression of TGF-1 mRNA. Keywords: Calcitriol； Renal interstitial fibrosis； Tubular epithelial myofib- roblast transdifferentiation； Unilateral ureteral obstruction； Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction 山西医科大学硕士学位论文 5 缩 略 词 简 表 Ang Angiotensin 血管紧张素 BMP bone morphogenetic protein 骨形态发生蛋白 CKD chronic kidney disease 慢性肾脏疾病 Ct cycle threshold 循环阈值 ECM extracellular matrix 细胞外基质 EMT epithelial mesenchymal transition 上皮细胞-间质转分化 E-Cad E-cadherin E-钙粘蛋白 Fn fibronectin 纤维连接蛋白 FSP-1 fibroblast specific protein-1 成纤维细胞特异性蛋-1 PTH parathyroid hormone 甲状旁腺激素 RIF renal interstitial fibrosis 肾间质纤维化 RT-PCR re