急性白血病患儿MTHFR基因多态性的相关研究

遵义医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：关节询询 签字日期：哆年厂月加El遵义医学院学位论文版权使用授权书本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：遵义医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权遵义医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文，即：遵义医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位论文作者签名：欤户扬翻签字日期：伽哆年f-月7o El导师签名；麟签字日期：刃膨年5-月矽Et遵义医学院硕士学位论文 英文缩略表英文缩略词表缩略词 英文全称aGVHD acute graft-versushost diseaseAL acute leukemiaALL acute lymphoblastic leukemiaallo-HSCT alloge?elc he麟响Poietic Stem ceutransDlantaUonAN几 acute myeloid leukaemiaAS-PCR allele specific-PCRASO allele-specific oligonucleotidcGVHD chronic graft-versus-host diseaseC confidence intervalsCLL chronic lymphoblastic leukemiaCML chronic myelogenous leukaemiacSNPs co攀ng栽gion single nucleotidepoWmommsmDFS diseasefree survivalDGGE denatured gradient gel electrophoresisEFS eventfree survivalGVHD graft-versus-host diseaseHD-MTX highdose methotrexateHRhigh-riskHSCT hematopoietic stem cell transplantationMR medium-riskMTHFR methyrlenetetrahydrofolate reductaseM盯X methotrexateNCICTC瑚!：Ijioml canc盯n妇tu。te-comInon toxicityD足oddsratioORF open reading frameOS overall survivalPCR polymerase chain reactionfw|J|rIIIII螋IllllI IllllY234。08312。中文全称急性移植物抗宿主病急性白血病急性淋巴细胞白血病异基因造血干细胞移植急性髓细胞白血病等位基因特异性PCR等位基因特异性寡核苷酸探针杂交慢性移植物抗宿主病可信区间慢性淋巴细胞白血病慢性粒细胞白血病基因编码区单核苷酸多态性无病生存变性梯度凝胶电泳无事件生存率移植物抗宿主病大剂量甲氨蝶呤高危造血干细胞移植中危亚甲基四氢叶酸还原酶甲氨蝶呤国立癌症研究所常规毒性判定标准比值比开放阅读框总生存聚合酶链式反应III遵义医学院硕士学位论文 英文缩略词表RFLPRTSAMSNPSRSSCPSTRIVrestriction fragment length polymorphismreverse transcriptaseS-adenosyl-Lmethioninesingle nucleotide polymorphismstandard-risktingle-strand conformation polymorphismshort tandem repeats限制性片段长度多态性逆转录S腺苷甲硫氨酸单核苷酸多态性标危单链构象多态性短串联重复序列遵义医学院硕士学位论文 目录目 录1论文：急性白血病患儿亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的相关研究I英文缩略词表III中文摘要1英文摘要3前言。6刚看一材料和方法。8结果20讨论42结论47参考文献482综述：亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与白血病的相关性研究进展533致 谢704作者简介7lV遵义医学院硕士学位论文 中文摘要急性白血病患儿亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性的相关研究中文摘要目的：通过检测急性白血病(acute leukemia，AL)儿童和对照组儿童中亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahyrdrofolate reductase，MTHFR)基因多态性，了解其等位基因频率和基因型分布特点，探讨基因多态性与AL、急性淋巴性白血病(acutelymphoblastic leukemia，ALL)和急性髓细胞白血病(acute myeloid leukaemia，触儿)易感性的关系；回顾性分析ALL患者使用大剂量甲氨蝶呤(high-dose methotrexate，HDmX)化疗期间的临床资料，探讨MTHFR基因多态性对ALL儿童使用HDMTX化疗后毒副反应的影响。方法：从109例AL(87例ALL和22例AML)儿童的骨髓及120例正常儿童的外周血中提取总RNA，逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chainreaction,RT-PCR)制备eDNA，采用变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gelelectrophoretis，DGOE)结合DNA测序技术，对全部标本进行MTHFR基因编码区单核苷酸多态性(coding-region single nucleotide polymorphism,cSNPs)筛查与鉴定。用X 2检验或FisherS精确概率法比较各组间MTHFR各基因型及等位基因频率分布的差异，采用非条件Logistic回归模型计算比值比(odds ratio，OR)及95可信区间(confidence intervals,C)，用经年龄、性别校正的OR和95(7表示各基因型与AL、ALL和AML发病风险的相关性。按照美国国立癌症研究所常规毒性判定标准(nationalcancelinstitutecommon toxicity criteria，NCICTC)对52例化疗组患儿HD-MTX化疗后的不良反应进行统一评价，采用上述统计方法分析MTHFR各单核苷酸多态性(tingle nucleotide polymorphism,SNP)对HDMTX化疗后发生毒副反应影响的差异。结果：1全部229例标本中MTHFR 677T等位基因总频率为319，在对照组、AL组、ALL组和AML组T等位基因频率分别为308、33、345和273，等位基因分布频率在AL组、ALL组和AML组分别与对照组之间的分布差异无统计学意义(尸005 o但各基因型的分布差异有统计学意义(尸值分别为0015，0044和0038)。在AL组和AML组中，677CT杂合突变型相对于野生型677CC其疾病发病风险分别1遵义医学院硕士学位论文 中文摘要降低了2倍和39倍(D足=0492，95CI=0267-0906，P=0023；OR=0257，95CI=0076-0868，P=-0029)，差异有统计学意义。2MTHFR 1298 C等位基因总频率为168，在对照组、AL组、ALL组和AML组等位基因频率分别为154、183、19和159，等位基因分布频率及各基因型在AL组、ALL组和AbfL组分别与对照组之间的分布差异无统计学意义(尸005)，A1298C基因多态性与儿童AL、ALL、AlVlL的易感性无显著相关(P005)。3MTHFR 1793位点A等位基因总频率为79，在对照组、AL组、ALL组和AML组等位基因频率分别为71、87、92和68，等位基因分布频率及各基因型在AL组、ALL组和AML组分别与对照组之间的分布差异无统计学意义(胗005)，G1793A基因多态性对白血病发病的风险不存在显著相关性(胗O05)。4本次研究汉族儿童的MTHFR 1793A等位基因频率分布与伊朗人、德国犹太人、非裔美国人、奥地利人及巴西人的差异具有统计学意义(氏005)。1793各基因型与国外的伊朗、德国犹太人、奥地利及巴西人群的差异具有统计学意义(氏005)。5MTHFR的此3个eSNP位点各基因型在标危(standard-risk，SR)、中危(medium-risk，MR)和高危(high-risk，HR)各临床分组中分布差异无统计学意义(黔005)。相对于从野生型，1298 AC基因型个体发生血小板减少的风险提高了1372倍(锨=1372，95C，-1183-159364，P=-0036)。而C677T和G1793A各基因型发生各类化疗毒副反应差异无统计学意义(尸005)。6C677T、A1298C和G1793A位点各基因型在标危+中危(SR+MR)组(MTX应用剂量均为209m2)和高危(胍)组(MTX应用剂量为509m2)两组问分布差异无统计学意义(黔005)。但血小板减少和血红蛋白降低发生的差异具有统计学意义(PO05)，and MTHFR 1 298 gen variants have no significantinfluence on susceptibil埘to each disease3The 1 793A allele frequency in the study was 79，and were 71，87，92and 68among controls，AL，ALL and AML，respectively，no significant difference WaS observedin MTHFR GI 793A genotypes or A allele frequency between the patients and controlsTheMTHFR polymorphisms GI 793A do not significantly contribute to an inherited geneticsusceptibility to AL，ALL and AML4The 1 793A allele frequency in the study significantly different from those reported inIran,Ashkenazi Jewish,African-American,Austrian and Brazilian(p005)And thepolymorphisms in the study significantly different from those reported in Irart,AshkenaziJewish,Austrian and Brazilian(尸O05)5No statistically significant differences were observed in genotypc polymorphism ofMTHFR C677T,A1 298C and GI 793A among standard-risk(SR)group，medium-riskgroup and high-risk(HR)groupPatients carrying MTHFR 1 298 AC had a higher risk ofdeveloping thrombocytopenia when compared with galTiers of the 1 298 CC genotype(OR=I 372，950,6=-11 83-1 59364，P=-0036)There was rio significant influence ofMTHFR C677T or G 1 793A genotype on toxicity4遵义医学院硕士学位论文 英文摘要6No significant differences were observed in the three SNPs genotypes between the SRand MR group(Doses ofM盯X is 209m2)and HR group(Doses of N盯X is 209m2)However,There were significant differences in the Hemoglobin and thrombocytopeniaNO significant relation was found genotype polymorphisms ofMTHFR C677T,A1 298Cand G1 793AThere WaS no influence ofthree SNPs genotypes on toxicity between SRgroup and MR group，which received 209mzConclusion：1C677T polymorphism