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563巴氏杆菌病)诊断技术002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布5 /'r 563- 2002前言禽崔乱(名禽巴氏杆菌病(是由多杀性巴氏杆菌引起的家畜和野禽的接触传染性疫病本病呈现急性败血症变化,),:),为”类动物疫病,我国列为几类动物疫病。术标准在主要诊断技术方面与断试验和疫苗手册)(2000年版)也有以卜左异:(手册)Z. 7. 11条对具体操作程序未作详细描述,本标准则根据实践经验规定了具体操作程序;本标准末完全采用其他推荐性技术本标准的附录A、附录标准山农业部畜牧兽医局提出。本标准由个标准起i;Y:单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所本标准主要起草人:曲连东、吴东来。 563一2002禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术范围本标准规定、鹅等禽霖乱的诊断和检疫2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引片1而成为本标准的条款凡是注期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而鼓励根据卞标准达成协议的各方研究是否可使川这此文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适川十本标准789. 28- 1994食品卫生微生物学检验染色法、培养鹅和试刹3初步诊断根据典及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌. 确诊应依靠病原分离鉴定。3. ,些禽只突然死亡随后即出现另外禽只发热、火食、抑郁、流诞、腹泻、羽毛粗乱、呼吸困难,关竹、趾垫、腿鞘、胸什粘液囊、眼结膜、肉垂、喉肺、气囊、中耳、骨髓、脑膜等部位呈现纤维素性化脓性渗出、血,肝、脾肿大和局灶性坏死,肺炎、腹腔和心包液增多。慢性刑t:要是局灶部纤维素化脓性渗出、坏死和纤维化3. 3病料涂片检菌3. 出后将其新鲜切面在载玻片卜压印或涂抹成薄层;若取血液,用灭菌剪)3. 3固定将于燥好的抹片,涂抹而向上,滴加草酸铰结晶紫色液,染色2洗、加苹介氏碘溶液于抹片卜媒染2 洗卜加95洗,加稀释碳酸复红复染”、,水洗,吸f,镜检。本e 563 体大小为。. 2   . 5 个或成对存在,常有英膜3. 3. 6或2. 1规定进行,瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体4病原分离和鉴定4.,、心血;慢性病例一般采集局部病灶组织;对不新鲜或已被污染的样品,可自骨髓中采取病料。采病料时用烧红的刀片烧烙组织,动物接种如果病料污染严重,则可将。皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡,接种动物在24 血清的葡萄糖淀粉琼脂(鲜血琼脂培养基(35一37 18 m。一3 形,表面凸起呈奶滴状4. 仁长最适温度为3518 落白_径为1  燥,固定、染色、镜检同3. 3. 23. 3生化鉴定鉴定方法如下a)接种于葡萄糖、蔗糖、果糖、醛糖、纤维二掂、绵子糖、菊搪、赤奔糖、戊五醇,杨甘发醉管不发酵。糖发酵管按1 ,)接种丁蛋自陈水培养基中,可产生叫垛。试验按1994中3. 13规定的方法操作c)鲜血液琼脂上不产生溶血。操作方法按6规定进行d)麦康凯琼脂卜不生长。麦康凯琼脂按24规定配制。)能产法按2。规定进行)、氧化酶(方法按789. 28  1994中3. 18规定进行)法按789. 2815规定进行). (3半乳糖普酶(方法按789. 28一1994中3. 3规定进行)。f)维培(验为阴性。试验按999中3. 细菌经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡,接种动物在24 可以从肝脏、心血中分离到多杀性巴氏杆菌。r 563 化鉴定、动物接种试验可作出确切诊断5琼脂扩散试验(用于监测免疫效果和追溯性诊断)准阳性血清和标准阴性血清。%硫柳汞溶液、4的0. 01 磷酸盐缓冲(液和生理盐水、配制方法见附录“!01 l. r=:角瓶中,加人()洁净1二热灭菌直径为90 平皿倒置以防水分蒸发。放普通冰箱中保存备用(时间不超过2周)m。的打孔器按六角形图案打孔或川梅花形打孔器打孔。中心孔与外周孔即离为3 孔中的琼脂用8号乍头斜面向上从右侧边缘插人,轻轻向左侧方向将琼脂挑出,勿伤边缘,闭孔的底部,以防侧漏、3加样用微量移液器吸取用灭菌生理盐水(见第B. 3章)稀释的抗原悬液滴人中间孔标准阳性血清分别加人外周的1,4孔中,标准阴性血清(每批样品仅做一次)和受检血清按顺序分别加人外周的2,3,5,6孔中。每孔均以加满不溢出为度,每加一个样品应换一个吸头。止5 温箱中反应,分别在24 准阳性血清与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线标准阴性血清与抗原孔之间不出沉淀线,则试验可成立5. 阳性血清孔与中心孔之间的沉淀线一端在被检血清孔处向抗原孔方向弯曲,则此孔的被检样品判为弱阳性,判为阳性5. 中心孔之被检血清判为阴性5. 中心抗原孔之间沉淀线粗而混浊和标准阳性血清孔与中心孔之间的沉淀线交叉并检血清孔为非特异性反应,应重复试验若仍出现(规范性附录) 5写鸡血清葡萄糖淀粉琼脂培养基制备j    粉养琼脂(按  3%淀粉溶液葡萄糖鸡血7i ,冷却到,加人火菌的淀粉溶液、葡萄糖及鸡血清混匀后,倾注肉及液肉汤(按789. 28蛋1,1111磷酸氢几钾(,氯化钠脂灭菌加热熔化,使冷却到50 1规定配制)1 00()只5混匀后,倾r 563一2002附录B(规范性附录)溶液配制柳汞溶液的配制硫

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