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文档简介

呼吸道感染细菌,医学细菌学,Medical Bacteriology,目 录,1,2,3,4,5,结核分枝杆菌,非结合分枝杆菌,白喉棒状杆菌,流感嗜血杆菌,嗜肺军团菌,6,百日咳鲍特菌,7,麻风分枝杆菌,引言,呼吸道感染细菌是指以呼吸道为主要侵入途径并引起呼吸道疾病或呼吸道以外组织器官病变的细菌。常见呼吸道感染细菌有结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌以及非结核分枝杆菌、嗜肺军团菌、百日咳鲍特菌和流感嗜血杆菌等。,1.结核分枝杆菌,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis):俗称结核杆菌(tubercle bacillus),因菌体有分枝生长现象而得名,是人结核病的主要病原体。牛分枝杆菌(M. bovis)可引起牛或人结核病,但主要是人肺外结核病且发病率较低。,近年因耐药菌株流行,结核病发病率不断升高,成为主要的再发传染病 (re-emerging infectious disease)之一。,Global tuberculosis report 2014,1.结核分枝杆菌:形态与染色,结核分枝杆菌 菌体细长、微弯有分枝。革兰染色不易着色,常用齐-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法染色,菌体呈红色,即抗酸染色阳性。,肺泡盥洗液和痰液中结核分枝杆菌,1.结核分枝杆菌:细胞壁结构,细胞壁含大量脂质成分,从细胞膜向外依次为:肽聚糖层、阿拉伯半乳聚糖层、分枝菌酸及其相关糖脂层,阿拉伯甘露聚糖和表面蛋白分散插在其中。,A:细胞膜;B:肽聚糖;C:阿拉伯半乳聚糖;D:阿拉伯甘露聚糖;E:蛋白质;F:分枝菌酸;G:分枝菌酸相关糖脂,G+,G-,1.结核分枝杆菌:培养特性,专性需氧,最适pH6.5-6.8。营养要求高且生长缓慢,代时为14-18小时。罗氏培养基(Lowenstein-Jensen culture medium)常用,通常培养2-4周才出现表面干燥呈颗粒、结节或菜花状、乳白色或米黄色菌落,培养基中加入孔雀绿抑制杂菌生长。 液体培养基中呈现表面生长。,结核分枝杆菌纯培养物,结核分枝杆菌菌落,1.结核分枝杆菌:抵抗力与变异性,干燥、酸碱有强抵抗力,湿热、紫外线及脂溶剂敏感。1908年Calmette与Guerin二人将牛分枝杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230次传代而获得减毒活菌苗,即卡介苗(Bacille Calmette-Guerin,BCG),广泛用于预防接种。结核分枝杆菌易受抗生素、溶菌酶等作用转变为L型。对抗结核药物易产生耐药性,甚至多重耐药。,1.结核分枝杆菌:致病性与免疫性,无内、外毒素及侵袭性酶,其致病性与细菌在宿主体内顽强繁殖引起炎症、菌体成分与代谢产物毒性以及机体对菌体成分的病理性免疫反应有关。主要致病物质:细胞壁脂质。 磷脂:刺激巨噬细胞增殖并转化为类上皮细胞,形成结核结节;抑制细胞蛋白酶活性,使坏死的结核结节分解不完全,形成干酪样坏死。 分枝菌酸:与糖类结合形成糖脂,引起慢性肉芽肿,其中6,6-双分枝菌酸海藻糖(索状因子)还损伤线粒体膜、抑制细胞呼吸与磷酸化。 蜡质D:细胞壁主要成分,是分枝菌酸与肽糖脂的复合物,能引起迟发型超敏反应。 硫酸脑苷脂和硫酸多酰基化海藻糖:细胞壁糖脂,抑制吞噬泡与溶酶体融合,使细菌在吞噬泡中长期存活。,1.结核分枝杆菌:致病性与免疫性,其他致病物质 菌体蛋白:本身无毒性或致病性,但与蜡质D一起注入体内能诱发更强的迟发型超敏反应。 多糖:脂甘露聚糖和脂阿拉伯甘露聚糖可通过Toll样受体2(TLR2)产生大量致炎细胞因子和趋化因子,引起炎症及炎性细胞浸润。甘露聚糖帽化脂阿拉伯甘露聚糖能与巨噬细胞甘露糖受体结合,介导结核分枝杆菌内吞并抑制吞噬溶酶体形成。 分枝杆菌生长素:是脂溶性铁螯合及转运蛋白,铁是结核分枝杆菌生长必要的元素。,1.结核分枝杆菌:致病性与免疫性,肺结核 原发结核:无特异性免疫力的儿童和青少年多见,结核分枝杆菌在肺组织内大量生长繁殖,局部出现渗出性炎症病灶,称为原发灶。原发灶内结核分枝杆菌可经淋巴管扩散至肺门淋巴结,引起淋巴管炎和淋巴结肿大,X射线胸片显示哑铃状阴影,称为原发综合征。部分病人痊愈后原发灶中可存留少量结核分枝杆菌而处于潜伏感染状态,可引起原发后结核。极少数免疫力低下病人或患儿,结核分枝杆菌可经淋巴、血流扩散至全身,引起全身粟粒性结核或结核性脑膜炎。 原发后结核:成人多见,常继发于原发结核,也可由外源性感染引起,由于原发感染后机体已有特异性细胞免疫,故继发感染的病灶局限,主要表现为慢性肉芽肿性炎症、形成结核结节、发生纤维化或干酪样坏死。 肺外结核:发生于各种组织和器官。,1.结核分枝杆菌:致病性与免疫性,盆腹腔结核性肉芽肿,肺结核X线胸片,1.结核分枝杆菌:致病性与免疫性,结核分枝杆菌是胞内寄生菌,故抗结核分枝杆菌感染主要依赖于CTL等T淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞介导的特异性细胞免疫。结核分枝杆菌抗体无保护作用。 抗结核特异性细胞免疫与迟发型超敏反应可同时存在,但分别由不同的结核分枝杆菌抗原以及不同T淋巴细胞亚群介导。结核分枝杆菌蜡质D和菌体蛋白主要引起迟发型超敏反应,结核分枝杆菌核糖体RNA等引起特异性抗结核细胞免疫反应。,1.结核分枝杆菌:微生物学检查,直接涂片镜检:根据感染部位采集不同标本,痰、尿、粪等污染标本先用酸碱处理后离心集菌,再涂片抗酸染色镜检,发现抗酸阳性菌可为临床诊断提供一定依据,但不能确定是结核分枝杆菌。 分离培养与鉴定:预处理标本酸或碱中和后划种于罗氏平板上,37培养,疑似菌落抗酸染色镜检、生化反应及药物敏感试验。PCR:检测结核分枝杆菌16S rRNA基因片段。,1.结核分枝杆菌:微生物学检查,免疫学诊断 结核菌素皮肤试验:5个单位结核菌素纯蛋白衍生物注射于前臂皮内,48-72小时后局部皮肤红肿硬结大于5 mm为一般阳性,15 mm为强阳性。一般阳性提示已感染过结核分枝杆菌或卡介苗接种成功,对结核分枝杆菌有特异性免疫力和迟发型超敏反应。强阳性者提示可能有活动性感染,尤其是婴幼儿。阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌或未接种过卡介苗,但应排除以下可引起假阴性反应的情况:感染初期、严重结核病时机体免疫反应被抑制、细胞免疫功能降低下。该试验可用于判定卡介苗接种效果、婴幼儿结核病临床诊断参考、结核分枝杆菌感染流行病学调查以及非特异性细胞免疫功能测定指标之一。 干扰素释放试验:活动性结核辅助诊断。,1.结核分枝杆菌:防治原则,新生儿出生后接种卡介苗。目前抗结核一线药物有利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇和链霉素。药物治疗原则是早期、联合、规则、足量、全程用药,不仅可提高疗效,也能减少诱导细菌产生耐药性的机会。,2.非结核分枝杆菌,分枝杆菌属多为腐生菌,除结核分枝杆菌和牛型分枝杆菌外,非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分枝杆菌常可引起动物结核病,被称为结核分枝杆菌复合群。除结核分枝杆菌复合群及麻风分枝杆菌外,其他分枝杆菌称为非结核分枝杆菌,其中部分菌种可引起人肺结核样病变、颈淋巴结炎、皮肤创口脓肿、无痛性坏死溃疡。鸟-胞内分枝杆菌是艾滋病常见的条件致病菌。治疗药物与结核分枝杆菌相同,但易产生耐药性。,2.白喉棒状杆菌:形态与染色,白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)产生毒性强烈的白喉毒素(diphtheria toxin,DT),是人急性上呼吸道传染病白喉(diphtheria)的病原体。菌体一端或两端膨大呈棒状,常呈V、L形或栅状排列。革兰阳性,Albert染色法染色后可见菌体内异染颗粒。,革兰染色,Albert染色,2.白喉棒状杆菌:培养特性,需氧或兼性厌氧,在含有凝固血清的吕氏培养基上生长迅速,12-18小时即能形成菌落。分离培养时常用含0.03%0.04%亚碲酸钾血平板,白喉棒状杆菌能吸收亚碲酸盐并使其还原为元素碲,使菌落呈黑色,以此与其他棒状杆菌相区别,同时碲盐可抑制其他细菌生长。,亚碲酸钾血平板上菌落,吕氏血清平板上菌落,2.白喉棒状杆菌:致病性与免疫性,白喉棒状杆菌本身无DT编码基因(tox),被携带tox基因的-棒状杆菌噬菌体感染后,具备产生DT能力。DT由A与B两个亚单位组成(A1B1) ,B亚单位与靶细胞肝素结合性表皮生长因子受体结合,以受体介导内吞方式入胞形成内体,A亚单位能将腺苷二磷酸核糖(ADPR)从NAD转移至延长因子-2使之失活,蛋白合成受阻。,2.白喉棒状杆菌:致病性与免疫性,细菌定植于咽喉、鼻腔和扁桃体以及上呼吸道黏膜表面并分泌白喉毒素致病。局部组织炎性渗出及坏死细胞形成灰白色膜状物,称为假膜。假膜脱落阻塞呼吸道,成为白喉早期致死的主要原因。,细菌不进入血流,白喉毒素被吸收入血,与心肌、肝、肾、肾上腺和外周神经细胞表面受体结合,引起细胞变性与坏死、内脏出血和神经麻痹,白喉性心肌炎是白喉病人死亡的主要原因。,假膜,2.白喉棒状杆菌:致病性与免疫性,病后可获得牢固的免疫力。抗白喉免疫主要依赖抗毒素中和作用,白喉毒素B亚蛋白与抗体结合后,失去与受体结合的能力。新生儿可从母体被动获得抗毒素而有免疫力,随年龄增长该被动免疫逐渐消失。,2.白喉棒状杆菌:微生物学检查与防治原则,微生物学检查 直接涂片镜检:早期快速诊断在治疗中极为重要。 分离培养与鉴定:吕氏血清斜面37培养6-12小时后染色镜检,检出率高于直接涂片镜检。 Elek平板法:毒力鉴定。,防治原则 接种白百破三联疫苗。早期足量使用抗毒素,注射前应作皮肤试验,阳性者采用脱敏疗法。,3.其他呼吸道感染的细菌,流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)为革兰阴性小杆菌,广泛寄居于人上呼吸道,但可机会性感染引起婴幼儿脑膜炎和肺炎。我国约50%儿童化脓性脑膜炎、30%肺炎为该菌感染所致。主要致病物质为荚膜。 嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)为革兰阴性杆菌,引起军团病,分为流感样型、肺炎型和肺外感染型。主要致病物质为菌毛和

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