梅毒检测

梅毒实验室检测技术梅毒血清学试验检测技术进展梅毒实验室检测策略探讨主要内容梅毒实验室检测技术梅毒实验室检测的意义临床服务筛查、确定现症梅毒患者；判断疗效。梅毒筛查筛查梅毒感染者，尽早发现梅毒患者（保证安全用血预防经血传播病原体和抗体）流行病学监测掌握梅毒流行趋势；了解不同高危人群的梅毒感染率、发病率。概述梅毒病原体小而纤细的螺旋状微生物长520M，粗细2年），但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性越小发病机理入侵途径在性行为过程中，苍白螺旋体通过皮肤或黏膜微小损伤入侵机体，也能在妊娠过程中经胎盘传给胎儿。感染的播散感染后数小时，在临床症状出现之前，梅毒螺旋体经淋巴系统到达局部淋巴结，再经血流扩散至全身梅毒螺旋体在梅毒的任何时期均有可能侵犯中枢神经系统梅毒体液免疫IGM抗体感染梅毒后，首先产生IGM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出早期梅毒治疗39个月后，或晚期梅毒治疗2年后，大部分病人IGM抗体转阴再感染梅毒时，IGM抗体又重新出现IGM抗体出现是活动性梅毒表现IGM抗体不能通过胎盘胎儿在宫内感染梅毒螺旋体抗体后，在胚胎晚期69个月能合成IGM抗体新生儿或婴儿检出IGM抗体是诊断先天梅毒证据梅毒体液免疫IGG抗体感染梅毒第4周后产生IGG型抗梅毒螺旋体抗体IGG抗体可以持续存在梅毒治疗后，梅毒螺旋体抗原消失很长时间，IGG抗体仍可继续产生，甚至终生可以检出IGG抗体能通过胎盘新生儿出生后第3个月开始形成IGG抗体梅毒体液免疫反应素REAGIN梅毒螺旋体破坏人体组织，在体内释放一种抗原性心磷脂，能刺激机体产生反应素反应素是具有抗体性质的物质，能与从牛心中提取的心磷脂发生抗原抗体反应反应素一般在感染后57周产生或硬下疳出现后23周产生反应素在治疗后可以逐步消失检测反应素可以评价治疗效果概述梅毒的诊断梅毒的诊断必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析。梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义。常用梅毒实验室检测方法病原学检测血清学检测病原学检查原理一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法病原学检查的临床意义病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，14梅毒血清学检测方法梅毒实验室检查分类暗视野显微镜检查梅毒血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验脑脊液检查其它检查直接荧光抗体检查免疫荧光染色检查病理检查聚合酶链式反应（PCR）蛋白质印迹（WESTERNBLOT）暗视野显微镜检查苍白螺旋体可以通过普通光学显微镜观察到，暗视野中可以通过典型特点确定，包括螺旋外形，1014个螺旋，螺旋状运动方式，620微米长度。一期梅毒硬下疳的溃疡渗出物有大量的梅毒螺旋体二期梅毒肛周及外阴部的扁平湿疣表面分泌物中都有大量的梅毒螺旋体以玻片压片后，滴加生理盐水，在暗视野显微镜下可看到呈螺旋状、活动的螺旋体暗视野显微镜检查暗视野检测的优点可立即确诊（在一期和二期梅毒）快速检测暗视野检测的缺点需要有经验的专业镜检人员和专业设备（除特殊实验室外一般不具备）易与其他致病性和非致病性的螺旋菌混淆，一般不推荐用来检测口腔皮损，因为口腔中存在非致病性的螺旋菌必须立即镜检，因为螺旋体的运动性对确诊有重要价值，随着皮损愈合，暗视野检测的敏感性降低局部使用香皂，水以及抗生素软膏等会增加假阴性的可能性梅毒血清学试验一般硬下疳出现23周才开始出现，78周后全部阳性，故早期血清反应常是阴性非梅毒螺旋体抗原血清试验性病研究实验室试验VDRL不加热血清反应素玻片试验USR快速血浆反应素环状卡片试验RPR甲苯胺红试验TRUST这些实验检测非梅毒螺旋体抗体反应素IGM和IGG抗体非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清实验的滴度通常与病情活动相关，滴度改变四倍或者稀释度改变两倍（例如，从116到14或者18到132）具有临床意义。在同一患者进行连续的血清学检测需采用同一种方法（例如，VDRL或RPR），并在同一实验室进行。VDRL与RPR的结果均有效，但两者结果不能直接比较，因为RPR的滴度一般比VDRL的滴度稍高，TRUST结果与RPR相当，USR与VDRL相当。非梅毒螺旋体抗原检测通常在治疗后不阴转，很多病人在治疗后非梅毒螺旋体抗体在较长时间内保持低滴度，有时会维持终身，称为“血清固定”。非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体血清抗原实验的优点快速，费用低可以用血浆不用血清（RPR,TRUST）易于操作，可以在诊室或办公室进行结果定量可以用来评估治疗效果与再感染非梅毒螺旋体抗原血清实验的缺点对梅毒螺旋体无特异性，不能用于确证对某些梅毒不太敏感（早期梅毒，晚期潜伏梅毒，晚期梅毒）可发生假阳性反应前带现象，可造成假阴性结果。前带现象的发生是因为过多的抗体抑制了阳性反应，二期梅毒中发生较多。如果临床上高度疑似二期梅毒，实验室应116稀释血清并重复实验以排除前带现象。梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体颗粒凝集实验TPPA梅毒螺旋体血凝试验TPHA酶联免疫吸附试验ELISA酶联免疫实验EIA荧光螺旋体抗体吸收实验FTAABS直接检测梅毒螺旋体抗体检测结果即使在足量治疗后通常终身不阴转，梅毒螺旋体抗体滴度与病情活动关系不大，不能用来评估治疗效果梅毒螺旋体抗原血清试验敏感性和特异性均高，用作证实试验一旦阳性，则不管治疗与否或疾病是否活动，通常终身保持阳性只有在治愈的一期梅毒患者中，约1525在23年后螺旋体抗原血清试验可以转为阴性。主要作为确诊试验，不能用于观察疗效、复发和再感染梅毒血清试验抗体产生的时间顺序IGMFTAABS2周IGGTPHA/TPPA4周反应素RPR/TRUST57周梅毒血清试验抗体阴转时间IGMFTAABS阴转最快一期梅毒治疗后3个月100阴转二期梅毒治疗后9个月100阴转早期潜伏梅毒治疗后2年100阴转反应素RPR/TRUST阴转其次二期梅毒治疗后9个月273阴转早期潜伏梅毒治疗后2年384IGGTPHA/TPPA阴转可终生阳性梅毒血清试验反应的阳性曲线一期低二期高三期降低梅毒血清学试验的假阳性反应非梅毒螺旋体抗原试验和梅毒螺旋体抗原血清试验中均存在假阳性反应引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素技术性假阳性由于标本的保存、转送或操作技术不当引起。生物学假阳性非梅毒螺旋体抗原血清试验所用抗原也存在其它组织中，检测的梅毒病人体内的反应素，而其它疾病甚至极少数正常人也出现反应素，故而阳性反应发生率高，而梅毒螺旋体抗原血清试验检测的是梅毒螺旋体抗体，特异性高，发生假阳性率低。引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素急性生物学假阳性反应的疾病麻疹风疹水痘传染性单核细胞增多症传染性肝炎上呼吸道感染猩红热肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹其它如亚急性细菌性心内膜炎、活动性肺结核、斑疹伤寒、丝虫病、锥虫病、疟疾、鼠咬热、回归热、钩端螺旋体病等。引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素急性生物学假阳性反应的特点滴度低，一般低于18持续时间短，多在疾病消退后6日内转阴用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素慢性生物学假阳性反应的疾病系统性红斑狼疮盘状红斑狼疮干燥综合征类风湿性关节炎自家免疫性溶血性贫血桥本氏甲状腺炎风湿性心脏病慢性肾炎肝硬化系统性硬化症毒品瘾者孕妇老年麻风病引起非梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素慢性生物学假阳性反应的特点可持续6个月以上，甚至终身。滴度低，一般低于18用梅毒螺旋体抗原血清试验检测呈阴性梅毒螺旋体抗原血清试验假阳性发生率比非螺旋体抗原血清试验少假阳性发生的情况如系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合结缔组织病、硬皮病、肝硬化、自身免疫性溶血性贫血、麻风、结肠癌、生殖器疱疹、糖尿病、淋巴瘤、脑膜瘤、海洛因成瘾者、妊娠等其它螺旋体感染品它、雅司。引起梅毒螺旋体抗原血清学试验的假阳性反应的因素梅毒血清反应假阴性一期梅毒硬下疳一般硬下疳出现23周机体才开始出现抗梅毒螺旋体抗体及反应素，78周后全部阳性，故早期血清反应常是阴性。感染梅毒立即治疗或晚期梅毒由于血清反应素低，出现阴性。二期梅毒假阴性不到1的二期梅毒患者，其未稀释血清非梅毒螺旋体抗原血清试验呈阴性或弱阳性反应，而在高稀释度后反而为阳性，即前带现象，这是因为血清中反应素过多，造成抗原抗体比例不适，抑制了阳性反应的结果。合并HIV感染的梅毒患者其梅毒血清试验可呈阴性。技术操作或抗原敏感性的出现血清试验阴性。梅毒血清反应假阴性脑脊液CSF检查神经梅毒的实验诊断方法CSF检查对神经梅毒，尤其是无症状的神经梅毒的诊断、治疗及预后判断均有帮助。脑脊液检查指征对所有原因不明的神经系统异常的梅毒患者病程超过一年梅毒合并HIV感染先天梅毒患儿应检查脑脊液。脑脊液检查项目VDRL试验白细胞计数总蛋白测定胶体金试验等CSFVDRL试验是CSF的标准试验对神经梅毒特异性较高，偶尔也出现假阴性反应，如脊髓痨病人。试验阳性，对神经梅毒具有诊断意义如果CSFVDRL试验阴性，而临床考虑为神经梅毒，可使用CSF的梅毒螺旋体抗原试验如FTAABS/TPHA，其敏感性高，但特异性不如CSFVDRL神经梅毒患者CSFFTAABS均呈阳性，故CSFFTAABS为阴性，可排除神经梅毒感染脑脊液检查项目白细胞淋巴细胞计数正常人3106/L，如10106/L提示中枢神经系统有炎症。蛋白测定正常人总蛋白0104G/L神经梅毒可升高至1020G/L，白蛋白和球蛋白比例改变，球蛋白升高。脑脊液检查项目梅毒血清学检测分类1非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）2梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）两类方法。问题1为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对螺旋体表面的脂质作出免应答，在3周4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。抗体主要是IGM和IGG混合抗体。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。问题2临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法非梅毒螺旋体抗原血清学原理所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样方法包括（1）快速血浆反应素环状卡片试验RPR（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验VDRL等。基本成分是心磷脂卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似非梅毒螺旋体抗原血清学原理VDRL试验USRRPR/TRUSTVDRL试验抗原组成003心磷脂021卵磷脂090胆固醇抗原需新鲜配制不能保存待检血清需灭活目前主要用于脑脊液检查显微镜观测结果USR试验是VDRL试验的改良抗原组成同VDRL，另含（1）乙二胺四醋酸EDTA使抗原可长期保存，能维持一年；（2）含有氯化胆碱对血清能起到化学灭活的作用不必加热灭活（3）制成试剂盒使用方便RPR试验在USR试剂成分的基础上加入黑色碳颗粒作为沉淀的指示物用白色的硬纸片替代玻片血清不需要灭活不需要显微镜观测结果可作定量试验有现成的试剂盒携带方便操作简单价格便宜非梅毒螺旋体抗原血清学原理TRUST其原理和成分与RPR试验相同用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒其余的特点均与RPR相同非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1、仪器水平旋转仪。2、定性试验加样吸取005ML血清浆放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内加抗原将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原反应将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果3、定量试验稀释夜准备在圈内加入50UL生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。加样吸取50UL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。下同定性试验。RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断滴度出现凝集反应的血清最高稀释倍数。非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。一期梅毒1年后转为阴性二期梅毒2年后转为阴性。晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50病人血清反应仍为阳性。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。早期梅毒硬下疳出现1周2周后，血清可呈阳性。经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅毒血清反应假阳性。技术性假阳性反应由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。生物学假阳性反应是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点梅毒假阳性反应的处理技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点前带现象指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点耐血清性（血清固定）指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。问题3梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验TPPA梅毒螺旋体血球凝集试验TPHA梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）梅毒免疫层析法梅毒快速检测RT荧光螺旋体抗体吸收试验（FTAABS）化学发光免疫分析法（CLIA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）TPPA/TPHATPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。SHEEPREDCELLTPALLIDUMSENSITISEDCELLSENSITISEDCELLSPECIFICANTIBODYHEMAGGLUTINATIONTPPATPHA试验原理示意图TPPA试验检测流程试验前期准备微量振荡仪试剂检查25L移液器、吸头记号笔、废物缸有盖湿盒工作服一次性手套、口罩、帽子生物安全柜TPPA试验检测流程使用前将试剂盒从冰箱中取出，室温放臵30分钟。在96孔U型板上编上相应的待检样本的编号。按标签标明量（06ML向每瓶冻干致敏粒子（C液）和未致敏粒子（D液）各加入溶解用液（A液）复溶，臵室温不得少于30分钟。TPPA试验检测流程每份标本做4孔，加标本稀释液（B液）至U型反应板，第1孔100L，第24孔各25L。用移液器取血清25L至第1孔，反复混匀后取25L至第2孔，连续倍比稀释至第4孔，最后1孔混匀后弃去25L。第3孔加未致敏粒子D液25L，第4孔加致敏粒子C液25L将微量反应板臵震荡器震荡30秒。臵微量反应板于有盖湿盒内，37孵箱或室温（1530）静臵2小时后，观察结果。TPPA试验检测流程结果报告观察加D液的第3孔，不出现凝集为有效试验。阳性第3孔不出现凝集，第4孔出现14凝集反应。阴性第3、4孔均不产生凝集反应。FTAABS试验FTAABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用REITER螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。FTAABS试验示意图及结果TPELISA试验原理TPELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。本法可用于大规模血清检测。梅毒免疫层析快速检测方法梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验，它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义试验特异性强，很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有1的生物学假阳性发生。如系统性红斑狼疮患者血清可使FTAABS试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。麻风患者也可使特异试验呈阳性。梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义作为非梅毒螺旋体抗原血清试验如RPR等初筛阳性标本的确证试验。梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。非梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图早期晚期一期二期早期潜伏晚期潜伏三期治疗前治疗后阳性阴性梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图早期一期二期早期潜伏晚期晚期潜伏三期治疗前治疗后阳性阴性梅毒血清学试验结果的临床意义总汇RPRTPPATRUSTTPELISA临床意义VDRLTPRT_排除梅毒（一期梅毒的早期）现症梅毒梅毒孕妇所生的婴儿除外生物学假阳性早期梅毒经治疗后（早早期梅毒）先天梅毒的实验室诊断方法依据实验指标诊断查到螺旋体其抗心磷脂抗体滴度持续上升其抗心磷脂抗体滴度高于其母亲四倍检测抗梅毒的IGM特异性抗体阳性随访18个月观察抗体的变化梅毒检测知识要点1梅毒诊断标准WS2732007代替GB159741995，梅毒诊断标准及处理原则2梅毒血清学实验非梅毒螺旋体抗原实验，梅毒螺旋体抗原实验。检测的是抗原还是抗体3非梅毒螺旋体抗原实验阳性标示什么A现症感染梅毒检测知识要点B接受或未接受过治疗的近期感染。C生物学假阳性，一般人群假阳性率13，但滴度14。4梅毒螺旋体抗原实验阳性可表示A现症感染。B接受或未接受过治疗的近期感染。C既往感染。梅毒检测知识要点5梅毒诊断原则A必须根据病史；B临床症状；C体检；D实验室检测等E综合分析，慎重作出诊断。测试题关于梅毒螺旋体，下列哪种说法是正确的可以在体外培养增代时间3033小时直径03微米以上均正确测试题关于梅毒螺旋体，下列哪种说法是正确的可以在体外培养增代时间3033小时直径03微米以上均正确测试题感染梅毒螺旋体后机会产生抗体的时间的顺序依次是IGG、反应素、IGM反应素、IGG、IGMIGM、IGG、反应素IGM、反应素、IGG测试题感染梅毒螺旋体后机会产生抗体的时间的顺序依次是IGG、反应素、IG