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1、建立人鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤模型方法的比较(一)作者：文庆莲 ,吴敬波 ,范娟 ,郎锦义【关键词】鼻咽癌皮下移植瘤模型0 引言鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一,很多体内实验研究都需要建立裸鼠移植瘤模型 ,寻找一种简单、 高效的造模方法 ,将为鼻咽癌的研究带来方便。本研究即选用了几种常用的皮下移植瘤的造模方法,比较其成瘤率 ,组织学变化 ,增殖动力学变化 ,既往相关报道较少， 其结果将为广大研究者提供参考，现报道如下。1 材料与方法1.1 实验动物及克隆株免疫功能缺陷型Balb/C 裸鼠，鼠龄 4 周，体重 2025g，雌雄各半 ,人鼻咽癌高分化细胞系 (CNE I)，均由四川大学华西医学中心提供。

2、1.2 几种不同的移植瘤模型的建立方法初代移植瘤接种方法 :指数生长期 CNE I 细胞消化后，调整细胞浓度至 7 106/ml，取 0.2ml 接种于裸鼠双侧腋下，共 3 只。初代移植瘤生长至1cm 1cm 1cm时，选择接种成功的 2 只裸鼠，采用脊髓离断法处死动物，无菌剥离瘤体，除去包膜，用 0.9%生理盐水洗涤 2 次，剪成2mm 2mm 2mm大小瘤块。1.2.1 细胞悬液接种法同初代移植瘤接种法，接种8 只。1.2.2 新鲜组织块接种法将剥离的瘤体剪成2mm 2mm 2mm 大小的瘤块，用套管针接种于裸鼠的右前腋下，接种标本在离体后5 分钟内完成，接种 8 只。1.2.3 冻存组织

3、块接种法将剥离的瘤体剪成2mm 2mm 2mm大小瘤块，按常规方法处理后无菌包装冻存于-70液氮罐内，冻存2 周后按组织块复苏法复苏，用套管针将其接种于裸鼠的右前腋下，接种标本在复苏后5min内完成，接种8 只。1.2.4 细胞匀浆接种法将剥离的瘤体剪碎，加入生理盐水2ml，先后用300 目和 500 目铜网各过滤一次， 制备成单细胞悬液， 进行活细胞计数后接种于裸鼠的右前腋下，每只接种 0.2ml(约含 1.4 106个活细胞 )，接种 8只。1.3 观察指标1.3.1 移植瘤生长曲线自接种日起 ,每周测量 1 次肿瘤长径 (b),短径 (a),按公式 V=1/2a2b 计算肿瘤体积 ,共观察 6 周,绘制生长曲线图 ,根据生长曲线计算各种方法的成瘤率 (接种成功率 / 接种只数 )，成瘤潜伏时间 (接种日至长出肉眼可见的肿瘤时间)，肿瘤体积倍增时间 (TD=0.1*t/logDt logDo,Do为第一次测得的肿瘤直径 ,Dt 为经过 t 时间后肿瘤直径。1.3.2 组织学方法第 6 周后处死裸鼠 ,剥离肿瘤 ,先对剥离的肿瘤行大体观察 ,然后用 10%福尔马林固定 ,石蜡包埋切片 HE染色 ,光镜下观察。1.3.3 细胞周期动力学检测采用介绍的方法制备单细胞悬液

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