实验室生物安全1

1、临床实验室生物安全 湖南省临床检验中心 -吕岳峰1一、有关法规、标准1、病原微生物实验室安全管理条例 2004年11月12日国务院发布2、医疗废物管理条例 2003年6月16日国务院发布 及 医疗卫生机构医疗废物管理办法 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T249- 2005，20051201实施3、实验室生物安全通用要求 中华人民共和国国家标准GB19489-2004，20041001实行4、人间传染的病原微生物名录 中华人民共和国卫生部制，200601115、艾滋病防治条例 (国务院令第457号，2006年3月1日起施行 ) 及全国艾滋病检测工作管理办法(卫生部2006年6月印发） 2病原

2、微生物实验室安全管理条例目的 加强病原微生物实验室安全管理，保护实验室工作人员、社会公众和环境对象 适应于从事病原微生物研究、教学、生产、诊断检测等所有实验室 方法 国家对病原微生物按照其对人类和动物及环境的危害程度实行分类管理，按照对病原微生物的防护水平对实验室实行分级管理标准 国家实行统一的实验室安全标准，实验室应符合国家标准的要求。3病原微生物实验室生物安全管理条例有关条例介绍第二条 对中华人民共和国境内的实验室及其从事实验活动的生物安全管理，适用本条例。 本条例所称病原微生物，是指能够使人或者动物致病的微生物。 本条例所称实验活动，是指实验室从事与病原微生物菌（毒）种、样本有关的研究、

3、教学、检测、诊断等活动。第四条 国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实行分级管理 第十八条 国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室分为一级、二级、三级、四级。 第二十一条 一级、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。第三十二条 实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。4 实验室的生物安全防护屏障生物安全防护水平（biosafety level,BSL） 是根据实验室使用的一级防护屏障和二级防护屏障不同而分的级别，实验室生物安全分为四级。一级防护屏障 是指生物安全柜和个人防护装备等构成的防护屏障。个人防护装备有实验服、隔离衣、连体衣

4、，塑料围裙、鞋帽、护目镜、口罩、面罩、防毒面具、手套等。 二级防护屏障 是指实验室的设施结构和通风系统等构成的防护屏障 如实验室的设施包括消防、应急供电、应急淋浴以及洗眼设施等。5一级生物安全防护实验室（低个体危害，低群体危害）实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。6二级生物安全防护实验室（中等个体危害，有限群体危害）实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。所谓“中等潜在危害”指一般性可致病细菌、病毒等微生物。7三级生物安全防护实验室 ( 高个体危害，低群体危害) 实验室结构和

5、设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗或感染后可以治愈。 艾滋病毒的研究（血清学实验室除外）应在三级生物安全防护实验室中进行。8四级生物安全防护实验室 （高个体危害，高群体危害） 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。9气溶胶（aerosol) 是固体或液体微粒稳定地悬浮于气体介质中形成的胶溶状态分散体系。 其中的微粒成份复杂，大小不一，其粒径在0.001-100m ，一般为0.001-10m。

6、按微粒的性质分 液体气溶胶-雾 固体气溶胶-常称气溶胶 按微粒的大小分 粒径10m的称为可吸入颗粒，因其重量轻，在空气中漂浮的时间长又称为飘尘，粒径10m的因重力作用而迅速下沉而成为降尘。10微生物气溶胶对人呼吸道的侵入情况粒子直径10m，一般被阻留在鼻腔内粒子直径5-10m，可到达支气管粒子直径5m，可进入细支气管和肺泡粒子直径越小，其到达的部位越深，小于1m的粒子在肺泡内沉积率最高，粒子直径0.4m可自由进出肺泡11二、实验室设计和建造的特殊要求主要介绍BSL-1、BSL-2BSL-1实验室（摘自实验室生物安全通用要求6.1） 1、无须特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物和啮齿动物

7、进入的设计。2、每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处。3、在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开设置。4、实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯。5、实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。6、实验室中的橱柜和实验台应牢固。橱柜、实验台彼此之间应保持一定距离，以便于清洁。7、实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。8、实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。9、应有适当的消毒设备。12BSL-2实验室（摘自实验室生物安全通用要求6.2）1、满足6.1要求。2、实验室门应带锁并可自动关闭。实验室的门应有可视窗。3、应有足够

8、的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。4、在实验室内应使用专门的工作服；应戴乳胶手套。5、在实验室工作区域外应有存放个人衣物的条件。6、在实验室所在的建筑物内应配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。7、应在实验室内配备生物安全柜。8、应设洗眼设施，必要时应有喷淋装置。9、应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。10、有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等配备备用电源。11、实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。13三、二级生物安全防护实验室日常工作要点实验室入口须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安

9、全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求以及对非工作人员进入实验室的劝阻等。禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物；接触微生物或含有微生物的物品、脱掉手套后和离开实验室前要洗手；用移液器吸取液体，禁止口吸；5、制定尖锐器具的安全操作规程；6、按照实验室安全规程操作，减少溅出和气溶胶的产生；7、每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒；14 二级生物安全防护实验室日常工作要点8、所有废弃物在运出实验室之前必须进行消毒,所有培养物应先灭活，如高压灭活。特殊情况下需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭防漏的容器内储存、运输及消毒灭菌；9、有条件时工作人员应接受必要的免疫

10、接种 (如卡介苗等)10、必要时收集从事高危性工作人员的基本血清本底，并根据需要定期收集血清样本检测报告，如有问题及时处理；11.工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年接受一次最新的培训；工作人员在实验室应按照规范要求操作；12、实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒；13、人员暴露于病菌时，及时处理并向实验室负责人汇报和记录。15四、实验室标识图例、制度与职业曝露预防16生物安全标示图例主要传染因子请勿17安全管理基本制度实验室内务管理制度尖锐器具安全使用制度实验室消毒防护制度实验室风险防范及控制标本采集运输制度废弃物处理制度工作人员防护制度差错事故处

11、理制度18尖锐器具安全使用除特殊情况外，禁止在实验室使用针、注射器及其他利器。尽可能使用塑料器材代替玻璃器材。尽可能应用一次性注射器，用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽、从注射器取下，禁止用手直接操作。用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒。尽可能使用无针注射器和其他安全装置。禁止用手处理破碎的玻璃器具。装有污染针、利器及破碎玻璃的容器在丢弃之前必须消毒。19职业暴露及其预防职业暴露 是指医务工作者、实验室工作人员及有关监管人员在从事诊断、治疗、护理、预防、检验、管理工作过程中，暴露于含有感染性的血液、体液和实验室培养液

12、等引起的危害。实验室意外和事故处理应急处理-重在应急，事后报告。必需配置应急药物和设施。职业暴露防治临床检查诊断主动被动免疫药物治疗观察20生物安全及职业暴露案例Lisa Black 感染时间：1997.10.18；职业：护士。感染情节：Black护理一位进展期HIV患者、检查患者血管时，发现输液带已空，输液管被血液阻塞。她不想再改变穿刺部位，将一注射器穿刺入输液管内抽吸。患者突然移动手臂使针头划出刺入 Black的手。暴露后3月检测阴性；9月HIV+；12月HCV；21员工职业健康预防接种：针对性健康档案：特别是工作人员血清留样实验室安全防护：个人、环境、标本个人防护设施职业暴露预防生物安全

13、培训22检验后的处理废弃物处置实验环境卫生清洁23何谓医疗废物及其处理的有关规定医疗废物-医疗卫生机构在医疗、预防、保健以及其他相关活动中产生的具有直接或间接感染性、毒性以及其他危害性的废物。有关规定：国务院医疗废物管理条例卫生部医疗卫生机构医疗废物管理办法实验室生物安全通用要求消毒技术规范（2002年版）24医疗废物分类感染性废物病理性废物损伤性废物药物性废物化学性废物25医疗废物处理原则集中处置其包装物要防渗漏、防锐器穿透，有明显标识和警示说明对医疗废物储存设备要定期消毒对医疗废物中的病原物培养基、标本和菌种、毒种及其保存液等高危废物，在交医疗废物集中处置前应先就地灭活.26实验环境卫生清

14、洁及时移走和处理标本、废弃物等视不同情况用紫外线、消毒液等多种方法消毒工作台、实验器具、地面等实验环境,保持卫生27五、生物安全设备分类一.超净工作台 二.生物安全柜281、超净台正压柜气流从顶部或底部经过过滤器后从操作区正面流向工作台面，被样品污染的气流排出柜外，没有循环气流。超净台保护样品不受污染，适用于普通实验室或1级生物安全水平中对人员和环境无保护要求的实验。 292、生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs） 1）生物安全柜是防止操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱形空气净化负压安全装置。适用于临床诊断、教学、研究、生产部门

15、开展有关内源性和外源性病原的工作，对可能因暴露而吸入该病原会引发严重的、可能致死的疾病的工作，应使用ClassII级或以上级别的生物安全柜。2）生物安全柜采用三面负压，即：整个装置的左右及后部墙体均为负压风道，使工作区与外部环境形成气幕及箱体双层隔离，同时工作区被负压包围，保证样品不发生泄漏。30一级生物安全柜负压柜，气流经操作人员向内进入工作台面，被污染的气流通过HEPA过滤器外排出柜外，没有循环气流。CLASS I级BSC只保护操作人员和环境，适用于生物安全水平中对实验样品无保护要求的实验。 31二级生物安全柜属于层流负压柜 由起保护操作人员作用向内进入柜体的气流和经过HEPA过滤、 流向

16、工作台面保护实验样品不受交叉污染的垂直层流气流及保护环境的经过HEPA过滤的外排气流构成生物安全柜的II级标准。CLASSII生物安全柜适用于1、2、3级BSL的实验。它们可以安全保护样品、人员和环境。32二级生物安全柜分类根据结构以及气流（主要是外排气流）分配的不同它又分A1 、A2型、B1型、B2型。A1 、A2型均为70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排除。B型生物安全柜均为连接排气系统的安全柜，其气流速度最小量至少为0.5m/s。B1型70%气体通过排气口HEPA过滤器排除，30%的气体通过供气口HEPA过滤器再循环至工作区。B2型为100%全排型安全

17、柜，无内部循环气流，可同时提供生物性和化学性的安全控制。33CLASS III生物安全柜（手套柜）是全封闭的、气密结构的通风柜通过与柜体联结的橡胶手套进行操作；柜内保持至少120Pa的负压；供气通过HEPA抽入；外排的气流经过双层HEPA过滤或经HEPA后再经燃烧处理。CLASS III 型BSC适用于符合BSL1、 BSL2、BSL3、BSL4的生物实验。343、生物安全柜使用要点1）位置 最为理想的是，生物安全柜应位于远离人员活动、物品流动以及可能会扰乱气流的地方。 2）操作者 实验人员受过专业训练，遵循其原理。如操作者在移动双臂进出安全柜时，需要小心维持前面开口处气流的完整性，双臂应该垂

18、直地缓慢进出前面的开口，手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕并且让里面的空气“扫过”手和双臂的表面后，才开始对物品进行处理。要在开始实验之前将所有必需的物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出前面开口的次数，摆放的物品呈一字横向排开。同时应注意正前方和背部的回风隔栅上均不能摆放物品，以免堵塞回风隔栅、影响正常风路。35 3）消毒 可使用紫外灯、消毒剂，按日常方法应用； 注意 生物安全柜在移动以及更换过滤器之前要采用甲醛蒸气熏蒸等方法清除污染。应该由有资质的专业人员来清除生物安全柜的污染。4）明火 应尽量避免使用明火。否则易造成危险。在对接种环进行灭菌时，可以使用电子灭菌器或电炉，或使用一次性塑料接种环。5）避免震动 避免将离心机、振荡器等仪器安装在柜内，以免仪器震动使积留在滤膜上的颗粒物质抖落，导致柜内洁净度降低；36 6）清理实验结束后，包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品、特别是培养基要移出安全柜。在每次使用前后，工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭，所用的消毒剂要能够杀死安全柜里可能发现的任何微生物。在每天实验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染。在使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应在关机前运行5min 以净化内部的气体。3738 检查内容