TNAIA 032-2021 枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱 质谱法

ICS01.040.65CCSB04

TB团 体 标 准T/NAIA032-2021枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物残留量测定 液相色谱-质谱/质谱法DeterminationofspinetoramanditsmetabolitesresiduesinwolfberryLiquidchromatography-massspectrometry2021-03-16发布 2021-04-01实施宁夏化学分析测试协会 发布前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。环境研究所、宁夏化学分析测试协会。开建荣、杨春霞、王彩艳、张艳、王晓静、李冬、姜瑞、张小飞。本文件为首次发布。枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法范围本文件规定了枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于枸杞中乙基多杀菌素及其代谢物的液相色谱-质谱/质谱法测定。规范性引用文件（有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法术语和定义下列术语和定义适用于本文件。乙基多杀菌素及其代谢物spinosynanditsmetabolites乙基多杀菌素是一种新型多杀菌素类杀虫剂，有两种本体分别为XDE-175-J和XDE-175-L，有两种代谢产物，分别为N-demethyl-XDE-175-J和N-formyl-XDE-175-J。原理试样用乙腈提取，用石墨化炭黑N-丙基乙二胺固相萃取用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。试剂与材料除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。乙腈（CH3CN）：色谱纯。甲醇（CH4O）：色谱纯。氯化钠（NaCl）：分析纯。N-丙基-乙二胺吸附剂（PSA）：40µm～63µm。石墨化炭黑（GCB）：120-400目。 农药标准品：N-formyl-XDE-175-J（TSN105647）、N-demethyl-XDE-175-J（批号TSN030175-0002）、XDE-175-J（CAS187166-40-198.1%）、XDE-175-L（批号ZZS-20-065-A8，纯度95.0%）。标准溶液配制乙基多杀菌素及其代谢物标准储备溶液：分别准确称取适量的乙基多杀菌素及其代谢（0.011000μg/mL-18℃下保存。乙基多杀菌素及其代谢物混合标准中间溶液：根据需要分别取适量乙基多杀菌素及其10μg/mL标准中间溶液，-18℃下保存。仪器与设备高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2 0.01g0.00001g。组织捣碎机。高速万能粉碎机：10000r/min。振荡器。离心机：4000r/min。涡旋混合器。离心管：50mL，塑料。滤膜：0.22μm，有机相。分析步骤试样的制备鲜、干枸杞样品于-18（可加少量的液氮（30g30s），分别置于样品瓶中，-18℃冷冻备用。样品提取与净化鲜果10.00g（0.01g）50mL20mL乙腈，在水浴恒405.0g1r/min52mL15mL（50mgPSA10涡旋0.22μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱测定。干果5.00g（0.0150mL10mL30min，加入20mL乙腈，在水浴恒温振荡器上震荡40min5.0g氯化钠，盖上盖子，振摇约1min，放入离心机，4000r/min5min2mL15mL离心管中（提前称好50mgPSA和10mgGCB）涡旋净化后过0.22μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱测定。测定液相色谱参考条件色谱柱：InertsilC8-3柱，150mm×2.1mm（i.d），5.0μm，或性能相当者。柱温：35℃。流速：0.4mL/min。d）流动相：乙腈+水（90+10）e）进样量：1.0μL。质谱参考条件见附录A。色谱测定与确证液和待测样液中农药的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件下，N-formyl-XDE-175-J、N-demethyl-XDE-175-J、XDE-175-J、XDE-175-L的保留时间分别1.742.843.393.69B1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性确证相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%20%至50%10%至20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表达用色谱数据处理或按式（1）计算试样中各农药的含量，计算结果需将空白值扣除。式中：

XACSV （1）ASmX——试样中农药的含量，单位为微克每千克（mg/kg）；A——试样中农药的峰面积；V——试样中加入的提取溶液体积，单位为毫升（mL）；CS——标准工作液中农药的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；AS——标准工作液中农药的峰面积；m——试样的质量，单位为克（g）。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（率），C的要求。在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（率），D的要求。定量限和回收率定量限本方法的定量限XDE-175-J为0.01mg/kg，N-demethyl-XDE-175-J为0.01mg/kg，XDE-175-L为0.01mg/kg，N-formyl-XDE-175-J为0.02mg/kg。回收率本方法的添加浓度和回收率范围见附录E。附录A（资料性）质谱分析参考条件a）电离方式：ESI+；b）检测方式：MRM；c）电喷雾电压：3.5kV；毛细管传输温度：300℃；碰撞压力：1.5f）鞘气：30arb；g）辅气：10arb。表A.1乙基多杀菌素及其代谢物的多反应离子监测分析参数名称保留时间/min定性离子对/m/z定量离子对/m/z滞留时间/s碰撞能量/eVXDE-175-J3.39748.4/142.0748.4/203.0748.1/142.00.10.13240N-demethyl-XDE-175-J2.64734.5/128.1734.5/128.1734.5/128.10.10.12222formyl-XDE-175-J1.74762.5/156.1762.5/156.1762.5/156.10.10.11212XDE-175-L3.69760.4/142.0760.4/203.1760.4/142.00.10.13434附录B（资料性）乙基多杀菌素及其代谢物标准溶液谱图RT:0.00-6.01100

2.55

3.313.323.343.28

NL:1.42E6TICMSBQ05-2802.5260 2.5140 2.49

2.572.592.60

3.263.253.23

3.363.383.39

3.5920010080604020

0.04

0.56

0.96

1.391.691.731.792.03

2.472.43

2.55

2.64 3.212.69

3.653.733.814.004.304.504.664.83

5.20

5.525.615.93

NL:1.10E6TICF:+cESISRMms2734.500[128.099-128.101]MSBQ05-2010080604020

0.07

0.400.600.721.051.161.451.621.842.032.14

2.812.993.183.293.473.763.904.124.224.454.625.005.123.32

5.475.61

NL:1.42E6TICF:+cESISRMms2748.400[141.999-142.001,202.999-203.001]MSBQ05-2010080604020

0.04

0.56

0.961.16

1.39

1.69

2.03

2.332.452.65

2.90

3.59

3.683.894.064.224.504.664.834.97

5.29

5.525.615.93

NL:4.38E5TICF:+cESISRMms2760.400[141.999-142.001,203.099-203.101]MSBQ05-20100806040200

0.09

0.44

0.770.95

1.39

1.841.73

2.182.39

2.62

2.903.093.28

3.964.104.304.47

4.804.945.095.24

5.63

5.86

NL:2.49E40.08 0.410.690.890.08 0.410.690.891.241.45 1.912.122.322.54 2.863.033.363.553.643.814.084.334.584.704.94 5.355.445.665.79[156.099-156.101]MSBQ05-20.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0Time(min)图B.1乙基多杀菌素及其代谢物标准溶液（浓度为0.1μg/mL）LC-MS/MS的多反应监测（MRM）色谱图附录C（规范性）实验室内重复性要求表C.1实验室内重复性要求被测组分含量mg/kg精密度%≤0.00136>0.001≤0.0132>0.01≤0.122>0.1≤118>114附录D（规范性）实验室间再现性要求表D.1实验室间再现性要求被测组分含量mg/kg精密度%≤0.00154>0.001≤0.0146>0.01≤0.134>0.1≤125>119附录E（资料性）乙基多杀菌素及其代谢物回收率范围表E.1乙基多杀菌素及其代谢物在枸杞鲜、干果中的添加浓度及回收率范围（%）名称（mg/kg）枸杞鲜果回收率范围（%）枸杞干果回收率范围（%）XDE-175-J0.0182.0～89.8106.3～116.50.180.7～89.1100.3～110.80.584.5～91.282.2～102.6283.4～91.084.4～101.5N-demethyl-XDE-175-J0.0181.9～86.4106.1～116.80.185.8～89.892.8～116.00.580.1～84.283.7～92.1280.1～80.981.1～89.5N-