高中生物222动物细胞融合与单克隆抗体课件

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体思考下列问题：1、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？一、动物细胞融合

细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合

受精作用细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法化学法仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核病毒颗粒细胞核1.概念：2.结果：3.原理：4.诱导方式指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程（细胞杂交）。形成单核的杂交细胞细胞膜的流动性物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒动物细胞融合植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理使用的酶诱导方法主要用途细胞膜的流动性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒获得杂种植株制备单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。浆细胞产生抗体。B淋巴细胞与抗体的关系：

１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体（浆细胞产生抗体）。２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？单克隆抗体由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。

特点：特异性强、灵敏度高

技术原理1）单个B淋巴细胞产生单一抗体（但不能无限增殖）2）肿瘤细胞能无限增殖（但不能分泌单一抗体）3）细胞融合技术杂交瘤细胞（既无限增殖又分泌单一抗体）4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞（获取大量单克隆抗体）

2.单克隆抗体制备过程思考：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体3.整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

筛选1抗原-抗体杂交法克隆化单克隆抗体

筛选22.诱导细胞融合的手段有哪些？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

筛选1抗原-抗体杂交法克隆化单克隆抗体

筛选23.若细胞两两融合后，有几种融合情况？注射抗原效应B细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基

筛选1抗原-抗体杂交法克隆化单克隆抗体

筛选24.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？（1）小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？（2）制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？

（3）在整个制备的过程中要经过几次筛选？思考：细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活细胞融合技术、细胞培养技术第一次筛选得到杂交瘤细胞，第二次筛选在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的前提下培养筛选出特异抗体的细胞群。3.单克隆抗体的应用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。1.动物细胞工程技术的基础是：（）A．动物细胞融合 B．胚胎移植C．动物细胞培养D．核移植Ｃ２．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的

B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同Ｂ３.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞