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文档简介

白斑狗鱼嗜水气单胞菌败血症病原诊断规范2014-05-08发布2014-06-08实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局I前言 I1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 14试剂和材料 15设备和器械 26白斑狗鱼嗜水气单胞菌败血症初诊 27嗜水气单胞菌的分离与培养 28嗜水气单胞菌的鉴定 3916SrRNA基因DNA的序列测定和同源性分析试验 410结果判定 511综合判定 6附录A(规范性附录)培养基和试剂配制方法 7附录B(资料性附录)16SrRNA基因DNA参考序列(GenBank登录号：M59148.1) 本标准由新疆维吾尔自治区水产局归口。12 16SrRNA基因DNA序列扩增引物，P1:5'-GAGGAGGAAAGGTTGATGCC-3',P2:5'3中附录A3规定的方法配制)。28℃培养24h～48h。7.2.3挑取7.2.2中黄色无黑心的菌落划线接种于普通琼脂培养基28℃培养24h～48h;再挑取单菌落嗜水气单胞菌在普通琼脂培养基上28℃培养8.1.2细菌形态(革兰氏染色法)合并均匀涂布。自然干燥，火焰固定。加草酸铵结晶紫染液染1min～2min,流水冲洗。加革兰氏碘用1min～2min,流水冲洗。加95%酒精脱色30s,流水冲洗。加沙黄复红染液染50s～60s,流水冲洗。干459.4.1按每0.1g琼脂糖凝胶加0.1mL苯酚，将酚加入9.3.3含有目的条带胶块的离心管中。9.4.2经漩涡混匀器振荡1min～2min,将离心管在-70℃放置1h,使凝胶完全冻结。9.4.337℃水浴将冻结的凝胶融化后，在漩涡混匀器上振荡1min～2min,12000r/min离心5min。9.4.4取上层水相转入另一离心管中，加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇(25:24:1),混匀，12000r/min离心5min。9.4.5取上清液加入等体积的氯仿：异戊醇(24:1),混匀，12000r/min离心5min。9.4.6向收集的水溶液中加入1/10体积的3mol/L的乙酸钠和2倍体积的无水乙醇，置-20℃过夜或9.5.测序及序列比对生化鉴定项目结果生化鉴定项目结果+++纤维二糖吲哚试验+阿拉伯糖++甲基红(M.R)试验+水杨苷+十++明胶液化+++鸟氨酸脱羧试验++67A.1普通琼脂培养基蒸馏水82.5g2.5g1000mL9将0.121gTris碱(分子量121.1),0.0372g乙二胺四乙酸二钠(分子量372.24)加入80mL双蒸水中，加浓盐酸调节pH至8.0,加双蒸水定容至100mL,室温保存。A.121%的琼脂糖凝胶(含0.5μg/mLEB或相应浓度的EB替代品)A.13苯酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)将25体积的苯酚、24体积的氯仿和1体积的异戊醇混合即可，室温贮存于不透光的A.14氯仿：异戊醇(24:1)

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