全国流行性脑脊髓膜炎防治指南(试行)

附件：全国流行性脑脊髓膜炎防治指南（试行）（eisrias，）通过呼吸道传播所引起的化脓性脑膜炎，常在冬病。根据Nm群特异性抗荚的，将Nm分为13个血清其以、、C三见行的以上染Nm主及，管Nm界。于8年1949年91967年和1977发生5次全国性，以197年高达403/10万，病死为5.49，自15年开展规流脑A群接之000年以在0.2／10。我国以ABC年B和C群了C群Nm引起的部行。处身》（以下简称《传染病防治法《突发公共卫生事件应急条例《医疫防隔。一报监测1（一）疫告。执行职务的医护人员和检疫人员、疾病预防控制人员、乡村医生构。各级医疗机构及其执行职务的人员发现任何临床诊断为流脑的有在农在。在2逐。（测病：1、医疗机构要尽可能在使用抗生素治疗前采集病人脑脊液、血展。2、市县级疾病预防控制机构要收集流脑病例的脑脊液或急性期例到县级疾病预防控制机构在发现流脑首例病例后应在病例密切接触者预集1—0人级。、发现首例病例后，对病例所在县（市、区）的医疗机构开展。中、人m要样标2本并的菌株一型防控。，现或在镇1现或以上病在县现或情：（1）当地疾病预防控制机构要立即开展主动监测和病例搜索工级、。（2）发生疫情的学校，应实施晨检制度，监测每位学生的健康状况报。（3）发生疫情的建筑工地，应设立务工人员进出登记制度，掌。、各级疾病预防控制机构要定期开展流脑疫情报告情况检查和。。测查流高例流现病时由及合料果暴预病。，3首。了病的病程接人员综分势做初定或调疗构作索和观。暴露的家庭成员的流脑发生概率为—％，难以发现病例之间的必状做。警级实测人疫时。三疫防血清抗体水展A群流脑糖、A+C群接种，有将A群、A+C群流糖。动在管的。预防接种工作严格按照预防接种技术管理规程及国家对流脑疫4。目前，根据我国荐A群与A+C：1、A后—8月种2针第2第1针接种于3个3岁第3针，与第2针接时少于1年。、＋C流多疫苗：接为2。（2岁以上者已接种过1针A种A+C群流脑种A于3；（）2岁以者种2次或2次上A群流脑糖苗接种C流与种A后1间隔于1。（种A+C接。施作》者取适的防施医脑医。原。各。理当取避需的5隔。医疗机构要按照监测要求在对病人进行抗生素治疗前采集脑脊。。理任人取下：1、医学观察：对密切接触者进行医学观察随访，时间至少为7天（自最后接触之日算起，期间内可不限制其活动，但要告知其尽其战高、所在乡生。2、预防服药：发生流脑流行时，可对密切接触者采取的应急预防。各地可以根据当地往年流脑细菌耐药性的相关情况选择当地预防服的类目。（）接种当《病治》的定人结果接。流多疫接对为－发；＋为岁行对儿接种。护6地和周围环境开展湿式清洁，必要时用1％漂白粉澄清液或其它含氯制剂消。负人交叉染播。防在两县或多县交界地区，由该市卫生行政部门负责协调处理该区域疫。各级疾控机构要及时将有关疫情信息向相邻省市县疾病预防控。与1、坚持预防为主的方针，在流行季节前，各地可通过各种媒体众淡室。2、在卫生部门与各有关部门参与或监督下，托儿机构、中小学空。3、发生流脑疫情后，卫生行政部门要根据国家有关规定适时公严行群。4、各级卫生行政部门和卫生监督部门要会同有关部门加强对辖区内学校现。7附件1 表病编号： □调单位：调： 调查：采： 采集：

年 月日 □□年 月日 □□室填： 填日期： 年月日 □□基况1患者姓名：2性别：男 ⑵女 □3出生日期：年月日□□4如无出生日期，年龄：岁月□5职业：：6户籍地：7家庭现住址： 省 ） ） 乡、）居）8居住情况：居9家长姓名：

（、）口他祥□联系：1告单位：1病地点：1诊医疗机构：1治医疗机构：1断医疗机构：1院日期： 年1亡日期： 年

报告： 年月发病： 年月初诊： 年月住院： 年月诊断： 年月月 日月 日

日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□17流脑疫苗免疫史：无 有 详 □1接种次数：次详□□1据 接卡⑵接证⑶忆 □17多糖疫苗接种时间：第针：：：

年月日□□□□□□□□年月日□□□□□□□□年 月 日□□□□□□□□17多糖疫苗接种时间：第一针：二：18同类（流脑）病人接触史

年 月 日□□□□□□□□年 月 日□□□□□□□□18地点近期是否有同（流脑病人：有无详 □18前一周与同（流脑病人接触史：有无详 □18接触接触方式：⑴同住护⑶同校⑷位它 □18内同类（流脑）病人： ⑴有无详 □18边（同宿舍、同班、同校）有同类（流脑）病人，根据情况填写下表：者名 性别 年龄 与者关系 病况临现1主要症状：1.病： 急缓⑶详 □81.热：1.呼吸道感染症状：

有无⑶详 □有无⑶详 □1.痛： 烈微无⑷详 □1.心：1.吐：1.风：1.厥：

有否⑶详 □有否⑶详 □有否⑶详 □有否详 □1.志：1.10.症状：2主要体征：2.温： ℃2.部唇周色泽2.肤出血点

楚⑵睡躁⑷昏迷详 □白绀常 □多少无⑷不详 □2.有其部位是：肢干⑶它：□2.肤瘀点瘀斑多少无详□2.项强直：2.识障碍：2.弓反张：2.卤隆起：2.征：2.征：2.体征：3诊疗情况3.1离

⑴有⑵否详 □⑴有⑵无详 □⑴有⑵无详 □⑴有⑵无详 □⑴有⑵无详 □有⑵无详 □⑴有 ⑵无 详 □3.2离隔离地点⑴医疗机构家⑶其：□3.3生素类药物：有无详□3.使用药物名称：□3.使用效果：效效显⑶无效□3.6愈转⑶好转化亡□实检果1血常规： ⑴有 无 □1.检验日期：□□□□□□□□1.液白细胞总数个/；1.性粒细胞 ％2脑脊液常规：⑴有 无 □2.脊液标本采集日期： 年 月 日2.验日期：

□□□□□□□□□□□□□□□□2.观 晰 混浊 □2.脊液蛋白质（正常值<0.4L⑴常高 □2.细胞个μL正常值0-μ)常多□2.萄糖2.化物3病原培养:3液

mmL少⑶高□mmo常⑵少高□⑴有 无 □⑴有 无 □NmNmNm3.1.培养结果性群性查□3.1.特异抗原检查⑴性群⑵阴性⑶查□3.1.特异DNA性血群阴性⑶查□3.液或出血点有无□NmNmNm3.采集日期： 年 月 日NmNmNm3.2.培养结果 性群NmNmNm

□□□□□□□□性查 □3.2.特异抗原检查阳性群性查□3.2.4异DNA查性群阴性⑶查□9Nm3.3.⑴有无 □3.采集日期：年月日□□□□□□□□Nm3.3.培养结果 ⑴阳性群 ⑵性⑶未查 □3.4. 有无□3.采集日期： 年 月 日NmNm3.4.特异抗原检查阳性群NmNm

□□□□□□□□⑵性⑶查 □3.4.特异DNAPCR性群 ⑵性⑶查 □血清学检测：Nm4.一份血清：有无 □4.1.1采集日期： 年月日□□□□□□□□4.1.特异抗体滴度∶XNmNm4.1清分群⑴群⑵群□4.二份血清：⑴有⑵无□4.2.1采集日期：年月日□□□□□□□□Nm4.2.2特异抗体滴度∶X4.2清分群⑴群⑵群□5药敏结果：⑴有无□5.1群感药品：⑴ ⑵ ⑶⑷ ⑸5.2群感药品：⑴ ⑵ ⑶ ⑷⑷ ⑸病类1最终病例诊断结果 似⑵床断⑶诊 □密记表名

性年别龄

业 住 址

触况 疫苗住同单位邻居接史

注表报期： 年 月 日 □□□□□□□□10填表说明1请您用圆珠笔或钢笔填写。2凡是数字，都填写阿拉伯数字如：、、、、„„。3请将所选择答案的序号写在题后的“□”内。4第－位为县级国标码，－位为县级单位的病例顺序编号。5调查日期：所有日期需填写到日，填写公历时间。6第1项中初诊单位如果是正规医疗机构，应详细填写医疗机构名称，如果是个体，细。11附件2 流行性脑脊髓膜炎的样品采集和运送适宜的检测样品为脑脊液血液皮肤粘膜出血点挤出液血清及鼻咽拭子等病例的脑脊液血液皮肤粘膜出血点挤出液中检出脑膜炎奈瑟菌可直接作为确诊依据。一、样品采集：咽拭子：用长柄棉拭子采咽后壁两侧分泌物立即接种于卵黄双抗培养基（E或巧克力血平板，也可将咽拭子放入液体双抗增菌管内，增菌8-12小时以后分离培养。2：采集3-毫升脑脊液，可直接接种于巧克力或E板，也可。3血3-毫升，立即加于5毫升的葡萄；．淤血点：选病人皮肤上的新鲜淤斑或淤血点，消毒后用针头挑破，挤出组织液，用无菌棉签蘸取先接种含双抗的葡萄糖增菌肉汤管中增菌8-时后分离培养或直接接种E板再涂片染色直接镜检制成涂片干后革兰染色，直接镜检；涂片也可做免疫荧光检查。．血清：采集病人发病早期和恢复期（1-周内）双份血清，检测血清中特异性抗体呈倍或倍以上升高。二、样品的处理和运送．及时处理样品：脑膜炎奈瑟菌比较脆弱，采集样品后，应尽可能地做到床边接种，若无可能则应再最短的时间内送至实验室进行接种培养。2．早期采集样品：应尽可能采集病人用药前的早期样品，这可以明显提高病原的捡出水平。3．保温运送：脑膜炎奈瑟菌对温度较为敏感，温度过低或过高均可导致菌株死亡。在运送样品或培养物时，应保持样品处于20℃36℃之间，切记不能低。要求每份血液标本不少于3毫升分离血清后低温(<2保存待检测流脑抗体测定和或细菌分离与鉴定。12附件－A流行性脑脊髓膜炎病原学诊断方法A1病原体脑膜炎奈瑟氏菌Neissmingｉs分离从疑似流脑患者采集C急性期血液分离N。A1.标本的采集A1.1.C无菌操作，吸出CSFm即放到无菌试管内离心(20003000rmim灭菌过的毛细管吸取沉淀物直接接种到1％羊血巧克力色琼脂上(C清液部分供检测N特异抗原，亦可将其置于－2℃待测，％二氧化碳环境3℃培养2～7每日检查细菌生长的情况及时分离纯培养物。A1.1.血液：采取病人急性期静脉血液6m，无菌操作，向盛有30m增菌用葡萄糖肉汤的三角瓶内注入4m血液余下的2m血液离心后吸出血清，供检测N特异抗原和抗体，亦可将其置于一2℃待测，％二氧化碳环境，培养2～7每日进行观察、。A1.接种和菌种鉴定A1.2.细菌形态N应为革兰阴性，呈卵圆形或肾形，0.μ6μm。。A1.2.菌落N接种于巧克力色琼脂平皿上％二氧化碳3℃培养2，其菌落直径约1m，表面突起、光滑、湿润、圆整、略带灰白色、半透明、不溶中。A1.2.生长及抗原特性绝大多数N菌株分解葡萄糖和麦芽糖产酸不产气。。Nm新分离菌株具有下列主要抗原：血清群特异性荚膜多糖，主要外膜蛋白－OMP(血清型特异的23O亚型特异的类O及与类OMP)铁调节蛋白，脂寡糖(L蛋白、菌毛抗原等，根据群特异性荚膜多糖的结构与组成成分，N可分为1个血清群(A、、、2、、、、W135、、Z)其中90以上的病例是由、和群N引起的。根据23OMP可将群与群N分成2个血清型但差不多半数菌株目前尚不能分型在可分型菌株中，以1、和型，P1P1P1.、21.P1.型多见；13对于群N现有与2两个血清型，以P1P1型多见。N还可以分成1个L疫型，其中群以L0L多见，群中以L，，复合型多见。N群特异性荚膜多糖、型和亚型的OPL抗原成分对流脑发病与流行及其菌苗的研究均具有重要价值。14附件－B 流行性脑脊髓膜炎血清学诊断方法B1玻片凝集试验B1.1的应用玻片凝集试验对N病原菌株或带菌者菌株进行血清学分群。B1.2料B1.2.1的N菌株纯培养物。B1.2.诊断血清：多价I包含、、、D群，多价Ⅱ〔包含188(Y)18992，9E)［包含319(811(K)群］及1群单价血清，共计1种。B1.2洁净载玻片。B1.2生理盐水。B1.试验方法B1.3先将诊断血清按说明书稀释成所需的浓度，滴一滴在洁净的玻片上。B1.3用白金耳刮取菌苔少许在玻片上沾取少量血清在一旁研磨均匀再与清匀。B1.3轻轻摇动玻片数次，在～2m出现明显凝集者，即为阳性。B1.3检查从病人分离的疑似N时，先试群血清，若不与其发生凝集，则试用或群血清，仍不凝集时，则试用多价Ⅱ或多价Ⅲ血清。若发生凝集，再似N对现有诊断血清皆不凝集者则送研究单位进一步鉴定。B1.3.5片上与各群诊断血清盐水或正常兔血清皆发生凝集者即定为自凝菌。B2酶联免疫吸附试验(EL试剂盒说明书进行操作。B3杀菌力试验B3.1的应用微量杀菌力试验(T测定病人急性期和恢复期血清中对N的杀菌抗体水平。此方法也可用于健康人群的血清抗体测定。B3.2料B3.2靶菌：对补体的自然杀菌作用具有耐受性，但对杀菌抗体反应敏感的Nm群29群和C群N)15B3.2.2稀释液：Dulbe缓冲盐水液：氯化钠(NaCl)80氯化钾(KCl)0.2，磷酸氢二钠(Na2HPO4)115g磷酸二氢钾(KH2PO4)02蒸馏水800L液：氯化钙(CaCl2)0.1，蒸馏水100m；C水100m。上述三液分别灭菌121℃，15m，置℃备用。需用时按液份，液和C液各1份的比例混合，p为7.。使用时每100m稀释液加灭活兔血清1m万古霉素50μg多粘菌素2500单位或硫酸抗敌霉素500单位。稀释液盛于小瓶中，置℃备用，可存放2周。B3.2.滴定板底部“U”形的9孔有机玻璃微滴板并备用同样大小的普通玻璃作盖板将它们平放在80的烤箱内烤2后备用试验完毕以约8℃的热水泡板1杀死靶菌，再以自来水冲洗干净，并用棉棒拭净不洁净的孔。最后以蒸馏水冲洗一次，37烤干后同上于80干烤。滴定板使用一段时间后或遇到杂菌污染较严重时可用热水杀死靶菌并冲洗干净；在比较稀的硫酸重铬酸钾清洁液内浸泡4h冲洗干净后同上处理备用。B3.2.兔补体：可以购买成品。B3.2.氯化三苯四氮唑(TriphlrazCloriTT)脂培养基(TC脂)B3.2.5.1C脂配方：牛肉膏0.％，氯化钠0.％，日本蛋白胨3.％，可溶性淀粉0.2％，以蒸调pH77.，琼脂0.％。B3.2.5.TC脂制作上述培养基成分熔化后按每10m或20m分装于大试管121℃灭菌15min冷却后置℃备用。临用前将培养基加热熔化，每10m培养基加50葡萄糖注射液0.1mL1％TC溶液(℃避光保存)0.1mL混匀放在4℃水溶液中待用。B3.2.5.阳性参考血清用N免疫兔制备的诊断血清，未加防腐剂，经预试测定其杀菌抗体滴度较高(1∶320以上)。B3.杀菌抗体测定步骤B3.3.靶菌液的制备16B3.3.1.1开启B或群N菌种接种到巧克力色琼脂平皿上3℃二氧化碳孵箱或烛缸培养1～20挑取～个菌落涂于另一平皿同上培养10～15。B3.3.1.用N诊断血清和生理盐水进行玻片凝集及显微镜检查以核实菌种。B3.3.1.菌种被确证以后取其菌苔混匀于2菌脱脂牛奶管中制成浓菌液，分装若干支小试管，每管约0.2置—20以下保存，N可存活～6个月。B3.3.1.需用靶菌时，取出一支上述牛奶菌种管，熔化后立即转种并放在℃冰箱内保存，供每日分离靶菌制作菌悬液，可备用周。在测定抗体的过程中，。B3.3.1.从所分离的靶菌平皿上挑取～个典型菌落，涂抹转种1/巧克力色琼脂平皿，3℃烛缸培养～6，刮取菌苔，于盛有3.5右稀释液的试管壁上用白金耳将其充分研磨，制成轻度混浊的均匀菌悬液，其光密度值相当于0.。B3.3.1.取出上述菌悬液2到0.5比色杯内在波长为540分光光度计上测其光密度值。B3.3.1.稀释液用量按(B1)计算：＝OD×10—0.1„„„„„„„„„„„(B1)式中——稀释液用量，mLO——光密度值。按照(B1计算稀释液用量然后往里加入0.1m靶菌悬液此时相当于光密度值为0.1的靶菌液作了10倍稀释吹吸均匀后由其开始再连续作10倍稀释至10－稀释度，以菌液的最终浓度为每毫升400个菌落形成单位为宜。B3.3.1.稀释好的靶菌悬液在1内用完。B3.3.杀菌抗体的测定B3.3.2.1在微滴板每孔内加1滴相当于25的稀释液。B3.3.2.2移液器从每排第一孔内加25经5630m活的待检血清吹吸～10次后吸出25至下一孔如此作连续倍比稀释至最后一孔每份血清分别用一支移液枪头。B3.3.2低温冰箱内取出补体，于3℃温水中摇动将其速溶，每孔加一滴。后17即刻使用。B3.3.2.4一滴稀释成合适浓度的靶菌菌液微滴板置微型振荡器上中速振荡5min在3℃培养25出后重复上述振荡。B3.3.2.5滴已熔化冷至45左右的T脂后，微滴板置37烛缸内培养1～2观察结果。B3.3.2.6验需做下列对照：阳性参考血清对照；4孔补体对照稀释液、补体、菌液各一滴，检查补体自然杀菌活性；孔细菌生长对照稀释液、灭活补体和靶菌菌液各滴。每次检测时至少每块微滴板中应有一组上述三种对照试验。B3.3.2.7滴完靶菌菌液之后应将该菌液两滴分别滴加到一个巧克力色琼脂平皿的一端，沿着划好的两条线倾斜下流，于37烛缸内同时培养，次日检查每滴靶菌的菌落数及其纯度。B3.3.2.8果时先检查上述三种对照试验的结果补体的和细菌生长对照的各孔应出现众多的红色点状小菌落阳性参考血清应达到原来确定的杀菌滴度若所试各孔中红色点状菌落数目明显地少于补体对照孔或不出现红色点状菌落时则判断为杀菌阳性如果所试孔中的菌落数目接近补体对照孔的一半或更多时，则判断为杀菌阴性。B3.3.2.9色点状菌落数目的多少，以符号“＋”记录试验结果。若补体，，＋。当所试各孔与其比较，菌落数减少30以下，记为“＋＋＋；减少50左右记“＋＋减少70左右记“＋每孔少于1个菌落则记“±。菌。18附件－C 流行性脑脊髓膜炎胶乳凝集试验C1目的应用胶乳凝集试验测定病人C急性期血清和尿中N群特异抗原，辅助流脑临床诊断。C2材料可购买成品胶乳检测试剂，按照说明书进行操作。C3.2胶乳凝集试验检测疑似流脑病人标本内N群特异性抗原。C3.2.1标本的处理：CSF心(3000，/minn)清，沉淀部分作细菌培养；急性期血液(2离血清，置5℃将其灭活30性期尿液5mL20水乙醇，置℃～2，离心(3000，15m，弃上清，收集沉淀部分加0.2将其溶解，同前离心，小心地吸取上清液待测，不要。C3.2在上述病人标本中只要有一种标本与抗任何一群N的I致敏的Lx有N相应群特异的抗原，即可辅助临。附件－D 定对于不能用血清学分群的脑膜炎奈瑟菌疑似菌株或无法进行脑膜炎奈瑟菌分离培养的脑脊液血液血清标本可采用ＰＣＲ方法进行ＤＮＡ扩增辅助检测鉴定。3.1的基因：唾液酸转移酶基因si因：可以作为P增的目的片段来区分Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ等五个常见流脑血清群Cror：可作为流脑奈瑟菌属的特异性基因。3.2聚核苷酸引物序列crgAF:5’-gctggcgccgctggcaa,R:a’ttc-3-cttctgcagatt’cggcgtgccgt-3Orf-2(A’F:5cgcaataggtgtatataRtc5t’c-3,-cgtaatagtttc’tatgccttctt-3SiaD(B)F:5-ggatcatttcagtgttttcR:5a-3-gcatgctggagg’ataagcattaa-3SiaD(C)F:tcaaatgagtttgc’aatagaaggt-3-caatcacgatttgcccaattgac-3SiaD(Y)F:5-ctcaaagc，aaggctttggR:5’3-ctgaagcgttttcattataattgctaa-3SiaD(W135)F:5-cagaaag’gagggatttcc’ta-3-cacaaccattttcattatagttactgt-33.3品处理可采用目前市售的ＤＮＡ提取试剂盒提取样品ＤＮＡ也可采取直接煮沸方法，将样品煮沸３０分钟，离心，取上清作为扩增样品。3.4增及检测条件92，540，2。3个循环，反应产物用1.5琼2%脂糖凝胶检测，电压6Vcm19别 业2女) ）A+C;别 业2女) ）A+C;岁) 3.AAC编号（位，前位为国标为）

类名(;龄见（1.A;+2.接种次数4未种;祥）

最后一次接种日期月日年)A群

抗体滴度（：）B群 C群

养果（1.A;2.B;注3.C;4.Y;5.W-135;Y群6其他;分）监群测库中。编号：为位，前位为国标码，后三位为对象编号。性别：、男；、女职业编码：1幼托儿童;散居儿童;3.（大中小学）;4.;5.员及保姆;6.食品业;7.服务;8.人员;9.;;;;船）民;职员;人员;及待业;及不详20附件4 表 ：集日菌 菌种来源种期编原菌株离分分标检号编来（病离离本定号人密接/地 日 名 结

体色及态

生化反应 长验