糖精钠的测定

实验七、甜味剂一糖精钠的测定一薄层色谱法GB/T5009.28-2003O_NaO糖精及其钠盐是使用较广的甜味剂之一，它的化学名是邻磺酰苯亚胺(0-sulfobenzolcacidimide)，分子式为CHSON,O_NaO7 5 3无臭或微有酸性芳香气，在水中溶解度极小，味极甜。糖精钠进入人体后不分解，不供给热能，无营养价值，随尿排除体外。我国《食品添加剂使用卫生标准》规定，糖精钠用于饮料、酱菜类、复合调味料、蜜饯、雪糕、配制酒、冰棒、糕点、饼干、面包等食品，最大使用量(以糖精计)为0.15g/kg；高糖果汁(果味)饮料按稀释倍数的80%加入，瓜子的最大使用量为1.2g/kg；话梅、陈皮等的最大使用量为5.0g/kg。测定糖精的方法较多，有薄层色谱法、纳氏比色法、硫代二苯胺比色法及紫外分光光度法等。一、紫外分光光度法原理样品经处理后，在酸性条件下用乙醚提取食品中的糖精钠，经薄层分离后，溶于碳酸氢钠溶液中，于波长270nm处测定吸光度，与标准液比较定量。试剂与仪器2%碳酸氢钠溶液4%氢氧化钠溶液6mol/LHCl溶液乙醚(不含过氧化物)10%硫酸铜无水硫酸钠0.02mol/L氢氧化钠硅胶GF254聚酰胺，200目糖精钠标准溶液：准确称取0.0851g经120°C干燥4h后的糖精钠，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇(95%)稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1mg糖精钠(CHCONNaSO.2H0)。64 2 2展开剂：苯-乙酸乙酯-乙酸(12:7:3)，硅胶薄层用。展开剂：正丁醇-浓氨水-无水乙醇(7:1:2)，聚酰胺薄层用显色剂：0.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调至PH值为8紫外光灯(波长253.7nm),紫外分光光度计薄层板10X20cm；展开槽微量注射器测定方法（1） 样品提取1） 饮料、冰棍、汽水类：取10ml均样置100ml分液漏斗中，加2ml6mol/L盐酸，用30、20、20ml乙醚提取三次。合并乙醚提取液，用5ml盐酸酸化的水洗涤一次，以洗去水溶性杂质，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发干乙醚。加20ml乙醇溶解残渣，密封保存，备用。2） 酱油、果汁、果酱、乳等称取20.0g或吸取20.0ml均样置100ml容量瓶中，加水至约60ml，加20ml10%硫酸铜溶液，混匀，再滴加4.4ml4%氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min后过滤，取滤液50ml置150ml分液漏斗中，以下同1）中后序操作。3） 固体果汁粉等：先称取20.0g磨碎的均样，置200ml容量瓶中，加100ml水，加温使其溶解，冷却后再按上述方法进行提取。4） 糕点、饼干等蛋白质、脂肪含量高的样品：均应采用透析法处理，使分子量较小的糖精钠渗入溶液中，以消除蛋白质、淀粉、脂肪等的干扰。称取捣碎、混匀的样品25.0g置透析玻璃纸内，置于大小合适的烧杯中。加50ml0.02mol/L氢氧化钠溶液于透析膜内，充分混合，使样品成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200ml0.02mol/L氢氧化钠的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。量取125ml透析液（相当于12.5g样品），加约0.4ml6mol/L盐酸，使成中性，加20ml10%硫酸铜混匀，加4.4ml4%氢氧化钠，混匀，静置30min，过滤。取120ml滤液置250ml分液漏斗中，以下同1）中后序操作。（2） 薄层板制备薄层板可以是硅胶GF或聚酰胺薄层板，使用时选用一种。254硅胶GF薄层板：称取1.4g硅胶GF，加4.5ml0.5%CMC-Na溶液于小研钵中研匀，倒254 254在玻璃板上，涂成0.25-0.30mm厚的薄层板，稍干后，在110°C下活化1h,取出后置于干燥器内备用。聚酰胺薄层板：称取1.6g聚酰胺，加0.4g可溶性淀粉，加约15ml水，研磨3-5分钟，使其均匀即涂成0.25-0.30mm厚的10*20cm薄层板，室温下干燥，在80C烘箱中干燥1h,置干燥器内备用。（3） 点样

在薄层板下端2cm处，用微量注射器点10虹和20卩L的样液二个点，同时点3.0,5.0,7.0,10.0虹糖精钠标准溶液，各点间距1.5cm条的右端1.5cm处。⑷展开'门.C板(!'门.C板(!1溶剂(dQ>■>弹点;■.■*!-1"鼻溶剂移动水平线原斑点将点好的薄层板放入盛有展开槽中，展开剂液层约0.5cm，并预先已达到饱和状态。展开至10cm，取出薄层板，挥发干。硅胶GF板可直接在波长254nm紫外线灯下观察糖精钠254的荧光斑点。把斑点连同硅胶GF或聚酰胺刮入小烧杯中，同时刮一块与样品条状大小相同254的空白薄层板，置于另一烧杯中做对照，各加5.0ml2%碳酸氢钠，于50°C水浴中加热助溶，移入10ml离心管中，离心分离(3000r/min)20min，取上清液备用。标准曲线绘制吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml糖精钠标准液A，分别置于100ml容量瓶中，各以2%碳酸氢钠溶液定容，于270nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。样品测定将经薄层分离的样品离心液及试剂空白液于270nm处测定吸光度，从标准曲线上查出相应浓度。结果计算如下：(C-C)XV1 0 3糖精钠(g/Kg或g/L)= WX(V/V)21式中：C：测定用样液中糖精钠含量mg/ml。1C：空白液中糖精钠含量mg/ml0：溶解样品残留物加入乙醇的体积ml。1：点样液的体积ml。V：溶解刮下的糖精钠时所用2%碳酸氢钠溶液体积ml。3W：样品残留物相当的原样品重量g或ml。注意事项样品提取时加入CuSO及NaOH用于沉淀蛋白质，防止用乙醚萃取发生乳化，其用量可根据样品4情况按比例增减。样品处理液酸化的目的是使糖精钠转化成糖精，以便用乙醚提取，因为糖精易溶于乙醚，而糖精钠难溶于乙醚。富含脂肪的样品，