培养基的制备实验报告材料

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试验4选择性培育基的配制

【目的】

了解选择性培育基的原理，并掌撮配制选择性培育基的方法和步骤。

【概述】

选择性培育基是一类依据某微生物的特别养分要求或对某化学、物理因素的抗性而设计的培育基，具有使混合苗样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。选择性培育基均含有增菌剂和选择剂Y样接种子这类培育基后，由于抑荫剂的选择性抑制作用.使所要分别的目的菌得到较好的繁殖，而其他菌被抑制。经过肯定的培育时间后.再将目的菌接种到鉴别培育基上，可以提高目的菌的分别阳性率。抑菌剂的种类许多，如孔雀绿、煌绿、亚硒酸钠、去氧胆酸钠、胆盐、四硫磺酸钠或抗生素等，但加人量需精确     ，有的可以水溶液无菌配制冷藏备用。以上成分的用量、加人方法均按各类配方进行。

马丁氏培育基常用于从自然环境中分别真菌，培育基中的去氧胆酸钠和链霉素不是微生物的养分成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅可防止霉菌菌丝扩散，还可抑制G一细菌生长，而链霉素对多数G一细菌具抑制生长作用，所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响，从而达到分别真菌的目的。

Ashby无氮培育基常用于从自然界环境中分别固氮菌。培育基中只含有基本的碳源和无机盐，没有氮源。一般的细菌不能在此培育基上生长，一些固氮的细菌可以利用空气中的氮气作为氮源，可以在此培育基上生长，从而达到分别固氮菌的目的。

【材料和器皿】

(1)试剂:蛋白胨，葡萄糖，甘露醇，孟加拉红，链霉素，去氧胆酸钠，KH2PO4，MgSO4·7H2O,NaC1，CaSO4·2H2O，CaCO3，琼脂。

(2)器皿:台秤，烧杯，共角烧瓶，量筒，漏斗，试管，玻棒，加压蒸汽灭菌锅等。

(3)其他:药匙，pH试纸，称量纸，记号笔，棉花塞，纱布，线绳，不锈钢试管帽，牛皮纸，报纸等。

【方法和步骤】

1.马丁氏培育基的配制

(l)培育基成分:

葡萄糖10g

蛋白胨5g

KH2PO41g

MgSO4·7H2O0.5g

0.1％孟加拉红溶液3.3ml

琼脂16g

蒸馏水1000ml

自然PH

2％去氧胆酸钠溶液20ml（预先灭菌，临用前加入）

链霉素溶液(10000U/ml)3.3ml（临用前加入）

(2)配制方法:

①称量:称取培育基各成分的所需量。

②溶化:在烧杯中加入约2/3所需水量，然后依次逐一加人并溶化培育基各成分，再按每1000ml培育基加人3.3ml的0.1%孟加拉红溶液。

③定容:待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。

④加琼脂:加人所需琼脂量，加热溶化，补足失水。

⑤分装，加塞，包扎。

⑥加压蒸汽灭菌;12I℃灭菌20min。

⑦临用前，加热溶化培育基，待冷至60℃左右，按每1000ml培育基以无菌操作加入20ml2%去氧胆酸钠溶液及3.3ml的链霉素溶液，快速混匀。

2.Ashby氏无氮培育基的配制

(l)培育基成分:

甘露醇10g

KH2PO40.2g

MgSO4·7H2O0.2g

NaCl0.2ml

CaSO4·2H2O0.1g

CaCO35g

琼脂15~20g

蒸馏水1000ml

pH7.2~7.4

(2)配制方法:

①称量:称取培育墓各成分的所需量。

②溶化:在烧杯中加人约2/3所需水量，依次逐一溶化培育基各成分。

③定容。

④调pH至7.2一7.4。

⑤加琼脂:加入所需琼脂量，加热溶化，补足失水。

⑥分装，加塞，包扎。:

⑦加压蒸汽灭菌;121℃(0.07MPa)灭菌20min。

【结果记录】

记录本试验配制培育基的时问、名称和数量。

【留意事项】

1.称药品用的牛角匙不要混用。

2.称完药品应准时盖紧瓶盖。

3.调pH时要当心