DB54T 0331-2024 双须叶须鱼规范

ICS65.15054CCSB5254西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T0331—2024双须叶须鱼2024-04-09发布 2024-05-09实施西藏自治区市场监督管理局  发布DB54/T0331DB54/T0331—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1主要形态结构特征 1外部形态结构特征 1内部结构特征 3生长与繁殖 3生长 3繁殖 4遗传学特性 4细胞遗传学特性 4生化遗传学特征 5检测方法 5抽样 5性状测定 5年龄测定 5染色体检测 5血清乳酸脱氢酶（LDH）检测 5检测规则与结果判定 6附录A（资料性） 双须叶须鱼生长方程、体长与体重关系式 7体长和体重生长方程 7体长与体重关系式 7附录B（规范性） 同工酶各种试剂的配置 8凝胶制备 8加样指示剂 8电极缓冲液 8染色液的配置 8前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由西藏自治区农业农村厅提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。术有限公司。本文件的主要起草人：霍斌、杨鑫、邹雨婷、林少卿、覃剑晖、杨斐、谢从新、周贤君、程方方、DB54/T0331DB54/T0331—2024PAGEPAGE1双须叶须鱼范围本文件给出了双须叶须鱼(Ptychobarbusdipogon)及检测方法。本文件适用于双须叶须鱼的种质检测。规范性引用文件（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18654.11GB/T18654.22部分：抽样方法GB/T18654.33部分：性状测定GB/T18654.44GB/T18654.66部分：繁殖性能的测定GB/T18654.1212GB/T18654.1313术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1学名双须叶须鱼(Ptychobarbusdipogon)。3.2地方名花鱼。3.3分类位置硬骨鱼纲（Osteichthyes）（Cypriniformes）（Cyprinidae）（Schizothoracinae），叶须鱼属（Ptychobarbus）。主要形态结构特征外部形态结构特征外形下唇表面多皱纹，无中间叶，唇后沟连续，口角须1对，末端可伸达眼后缘垂直下方。胸腹部裸露无鳞后缘无锯齿；背鳍起点至吻端距离小于至尾鳍基部的距离。腹鳍起点与背鳍第5根~6根分枝鳍条相对。背部为青灰色，腹部银白色，体背侧、头部有黑色斑点。双须叶须鱼外形见图1。图1 双须叶须鱼外形图可数性状背鳍鳍式D.iii-8。臀鳍鳍式A.iii-5。第一鳃弓鳃耙数外侧鳃耙数：12枚～20枚；内侧鳃耙数：17枚～24枚。侧线鳞79 16−1979 10−12−v可量性状双须叶须鱼可量性状实测比例见表1。表1 双须叶须鱼可量性状比例值比例性状平均值（范围）比例性状平均值（范围）体长/体高5.4（5.3~5.7）头长/吻长3.1（2.9~3.4）体长/头长4.7（4.3~4.9）头长/眼径6.2（5.1~7.1）体长/尾柄长5.9（5.5~6.4）头长/眼间距3.1（2.8~3.4）体长/尾柄高12.1（11.2~13.5）尾柄长/尾柄高2.5（2.2~2.7）4.2 内部结构特征鳔两室。其后室长为前室长的2.8倍～3.6倍。下咽齿下咽齿2行，3·4/4·3。下咽骨狭长；咽齿细圆，顶端尖而弯曲。脊椎骨脊椎骨总数：50枚～52枚。腹膜腹膜黑色。生长与繁殖生长依据669尾样本估算的体长和体重实测值见表2。生长方程和体长与体重关系参见附录A.表2 双须叶须鱼不同年龄组的体长与体重年龄雄鱼雌鱼体长(平均±S.D)mm体重(平均±S.D)g体长(平均±S.D)mm体重(平均±S.D)g3172.0±7.166.1±18.8176.9±17.169.0±19.94247.5±20.8196.9±47.1196.8±23.1177.1±53.95289.0±20.3302.5±66.5270.5±27.2254.9±75.26314.0±21.4375.6±84.8308.8±23.4369.1±96.47329.9±16.8423.6±76.8351.0±17.0522.7±83.98352.2±14.4509.2±50.7391.4±16.2718.4±123.89363.3±11.1591.1±72.4407.0±11.5802.2±93.310385.6±31.1664.3±108.1433.0±36.1973.3±137.011392.5±5.6704.6±61.912457938.213405840.9144521034.515446.0±15.61016.1±44.8174651172.018508.5±64.41673.5±802.324538.61±16.51799.91±97.6繁殖成熟年龄雌鱼为8龄，雄鱼为6龄。产卵类型性腺一年成熟一次，一次产出。繁殖期3月至6月，4月至5月为繁殖高峰期。怀卵量群体的绝对繁殖力为4597.35±2034.7粒，相对繁殖力为8.54±l.35粒/g。遗传学特性细胞遗传学特性肾细胞染色体数：2n=444(440±)。核型公式：120m+132sm+126st+66t；臂数NF：696。染色体分裂相见图2。图2 双须叶须鱼肾细胞染色体分裂相图与核型图生化遗传学特征血液乳酸脱氢酶(LDH)同工酶酶带扫描图见图3。图3 双须叶须鱼血液组织乳酸脱氢酶酶带扫描图检测方法抽样按GB/T18654.2的规定执行。性状测定按GB/T18654.3的规定执行。年龄测定采用耳石鉴定年龄。方法按GB/T18654.4的规定执行。染色体检测按GB/T18654.12的规定执行。血清乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂及配置方法同工酶各种试剂的配制见附录A。样品的采集与制备血清制备，从尾静脉抽取2ml血，于4℃、1000r/min离心6min，取上清备用。制胶先将混匀的6.5%分离胶液倒入模板约3/436℃左右30min胶聚合好以后，倒掉上面的水，将混匀的3.0%浓缩胶倒入模板，插好梳子，置于36℃左右30min胶聚合好以后，置于冰箱中备用。点样点样量为20μL。吸取20μL样与2μL～3μL加样指示剂混匀，一起加到样孔中。电泳分离采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。分离胶浓度6.5%，浓缩胶浓度3.0%。电极缓冲液：pH为8.3的Tris—甘氨酸。280V（起始电流约18~24mA）电泳0.5h后，将电压调到220v，继续电泳5h～6h（酚蓝跑出胶后2h以上）。染色：电泳结束后，放入预先配好并在37℃恒温箱中保温的同工酶染色液中染色。检测规则与结果判定按GB/T18654.1的规定执行。附录 A（资料性）双须叶须鱼生长方程、体长与体重关系式体长和体重生长方程雌性和雄性群体的体长和体重生长方程分别见式（（（A.3）和（）：雌性：Lt=606.9[1-e-0.114(t+0.163)]… Wt=2538.4[1-e-0.114(t+0.163)]2.88 （A.2）雄性：Lt=496.3[1-e-0.162(t-0.018)] （A.3）Wt=1391.1[1-e-0.162(t-0.018)]2.86 （A.4）式中：Lt－tWt－t龄时鱼体体重，g；e－自然对数；t－鱼的年龄。体长与体重关系式体长与体重关系式见（A.5）和（A.6）：雌性：W=2.494×10-5L2.88 （A.5）雄性：W=2.790×10-5L2.86 （A.6）式中：W－鱼体体重，g；L－鱼体体长，mm附录 B（规范性）同工酶各种试剂的配置凝胶制备凝胶制备溶液配置各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表B.1。表B.1各种凝胶制备溶液配方溶 液配 制 方 法凝胶缓冲液取Tris56.75g加200mL蒸馏水，用浓盐酸调pH为8.9，加蒸馏水到250mL。4℃贮存。凝胶储液取丙烯酰胺33.3g，N，N′—亚甲基双丙烯酰胺0.9g，四甲基乙二胺（TEMED）338μL溶于蒸馏水中定容到150mL。4℃贮存。AP取过硫酸铵1.5mg溶解到100mL蒸馏水水中。4℃贮存。分离胶和浓缩胶的制备用6.5%分离胶和3.0%浓缩胶制成聚丙烯酰胺垂直板凝胶，该凝胶液配方见表B.2。表B.2凝胶制备配方6.5 %分离胶3.0 ％浓缩胶凝胶缓冲液,mL1.5凝胶缓冲液，mL0.5凝胶储液，mL7.3凝胶储液，mL1.2AP,mL1.5AP,mL0.5TEMED，μL－TEMED,μL4.0纯水，mL14.7纯水，mL6.8总体积，mL25总体积，mL9.0加样指示剂0.15％溴酚蓝-50％甘油：称取0.15g溴酚蓝溶于50mL蒸馏水，再加50mL甘油混匀。电极缓冲液取甘氨酸28.80g溶于800