工艺技术-环氧乙烷灭菌工艺验证实施指南(doc 106页)

目 录 第一章 验证的目的和意义1 一、 验证的目的1 二、 验证的理由2 三、 验证的分类3 四、 验证的范围4 五、 验证的程序5 六、 验证的组织机构5 七、 验证方案的制定6 八、 验证的实施7 九、 验证结果的审批8 第二章 环氧乙烷灭菌验证的基本概念9 一、 生物9 二、 细菌9 三、 产品初始污染菌要求9 四、 消毒11 五、 灭菌11 六、 生物指示物11 七、 化学指示物12 八、 环氧乙烷12 九、 环氧乙烷灭菌机理13 十、 环氧乙烷残留量14 十一、灭菌周期14 十二、环氧乙烷灭菌验证14 十三、D 值14 十四、参数放行14 十五、产品放行14 十六、半周期法14 第三章 环氧乙烷灭菌验证的内容、方法、步骤 16 一、验证前准备 16 二、安装验证 18 三、运行验证 19 四、物理性能验证 20 五、微生物性能验证 21 附录：验证相关表单目录 32 第一章 验证的目的和意义 一、验证的目的 每个生产企业在为生存和市场竞争的需要中，都应考虑采用以低的成本费用生产出满足规定 要求，并有一定质量水准的产品的方法。验证是通过检查和提供客观证据表明规定要求已经满足 的认可（GB/T6583-1994 idt ISO8402:1994） ，是企业优化生产工艺的一个好的途径。验证的目的 就是为生产过程制订必要的参数，使其处于受控状态，以达到预期的要求。 传统的质量管理是建立在质量检验基础上的，而现代的质量管理是建立在质量保证基础上的。 批量生产的产品通过抽样检验是不能保证每件产品全部达到技术要求的，由此，质量保证的理念 开始逐步引起人们的重视。 “把质量建立在生产过程中” ，以及提前对原材料、过程中产品进行控 制，这些都喻示人们首先要对原材料和生产工艺进行验证，以确保最终产品的质量。 目前，世界上大多数国家都在医疗器械行业中实行质量保证体系规范，在 ISO9001或 ISO13485标准的要素中都提出了相关的基本要求。对无菌医疗器械生产企业来说，在硬件方面， 涉及到环境、厂房、设备、人员等内容，在软件方面涉及到工艺、卫生、检验、验证、管理等内 容。其目的是为了有效控制生产过程，保证产品质量，满足顾客要求。 当一个新建或改建无菌医疗器械洁净厂房完工后，或完成一项新产品的设计开发后，或编制 一项新的工艺方案后，或确定选用新的材料后，下一步工作就是需要进行验证和确认： 1. 厂房是否达到了设计要求； 2. 设备的安装布局是否满足无菌医疗器械的生产； 3. 研制开发的新产品是否满足法律法规和预期用途，是否进行了风险分析并将风险降低到 可接受的范围； 4. 编制的工艺能否保证产品质量； 5. 选用的新材料是否对环境或人体产生新的危害。 对所有医疗器械生产企业来说，验证的主要目的可概括为： 1. 为产品质量提供了可靠的保证； 2. 为降低产品风险，提高安全性，满足预期用途提供了充分的证据； 3. 为减少生产过程中的不合格品，提高经济效益打下了坚实的基础； 4. 为减少顾客投诉，创立企业品牌，扩大市场占有率提供了可行的机会； 5. 为符合法律法规要求，接受政府部门的监督检查，接受第二方或第三方质量认证提供了 可证实性的文件资料。 二、验证的理由 1、由于政府规范的要求 医疗器械的发展经历了一个从粗放型到规范化的管理过程。世界各国为了维护消费者的利益 和提高本国医疗器械在国际市场的竞争能力，根据医疗器械生产和质量管理的特殊要求，结合本 国国情，相继制定或修订了医疗器械质量管理规范。 在美国，联邦法律授权国家食品药物管理局（FDA）于 1978年发布了世界上第一个现行医 疗器械质量体系规范 。 在欧洲，欧盟委员会公布了 93/42/EEC医疗器械指令 ，90/385/EEC有源植入性医疗器械 指令和 IVD实验室用诊断医疗器械指令三个医疗器械的指令。 在日本，厚生省药务局颁发了医疗用具质量体系 。 在我国，相继颁布并实施了无菌医疗器械生产管理规范和医疗器械监督管理条例 。 八十年代后期开始对一次性无菌医疗器械产品实施许可证管理。这标志我国医疗器械也同样进入 依法管理的新阶段。 企业在市场经济环境下，为了建立质量保证体系，使生产的产品符合法律法规的要求，就必 须对产品、工艺和系统进行必要的验证。 2、由于质量保证的要求 没有工艺验证就不可能很好地理解和控制好工艺，也不可能树立起对所生产的产品在质量方 面的信心。验证可以确定一个好的生产过程，制订一个好的生产工艺，可以稳定产品质量，降低 产品质量的风险，并且提供采取纠正或预防措施的机会。工艺验证是质量保证的基础。 3、由于降低生产成本的要求 经验和普通常识都指出一个验证过的工艺是一个比较有效的工艺，可以减少返工，降低不合 格，减少损失。在坚持质量标准的同时，追求低成本高效率的工艺优化是验证的自然结果。 实际上一个工厂在一定程度上都验证过自己的工艺，他们不可能使用那些连自己也没有把握 可以生产合格产品的机器和（或）工艺。 三、验证的分类 医疗器械的验证以形式的不同可以分成系统验证、工艺验证、能力验证；以验证的目的不同 可以分成设计验证、预期型验证、同步验证、再验证。 1、系统验证是企业通过验证优化产品加工的过程。如以无菌形式提供的医疗器械产品应以 最短的加工过程和达到十万级洁净度的生产条件来保证无菌产品对初始污染菌的要求或灭菌前的 产品要求，在建造生产厂房时就应按验证过的加工过程来进行生产布局，减少产品在生产过程被 污染的机会，生产不同的产品所选用的生产设备是否满足规定要求。由此可见，系统验证是全厂 性的，是贯穿从建厂初期到产品生产全过程的。系统验证可以由企业内部组织进行，也可以请企 业外专家来帮助进行。国家已明确规定了加工过程和生产条件的，企业通过验证可以来检验是否 满足国家规定的条件。 2、工艺验证是系统验证在局部的验证，是针对一个工序、一个工艺而进行的验证。生产工 艺通过验证得到优化，并且明确受控的条件，提高生产效率、稳定产品质量。工艺验证是质量保 证体系中不可缺少的一个部分，是高效率生产的基础。工艺验证可以从整个产品结构来考虑，从 人的因素来考虑，也可以从设备条件和管理因素来考虑。灭菌工艺的验证是无菌医疗器械生产中 的最重要的工艺验证。 3、能力验证也称过程能力验证。过程能力是指一个过程在质量上可能达到的水平，也可理 解为在人、机、料、法、环等因素均处于受控的正常工作状态下的作业能力。企业通过对过程能 力的验证，可以合理的安排生产计划。对设备生产能力的验证可以挖掘设备的潜力，合理使用设 备，合理安排设备的使用范围和保养、合理编制维修计划。对人员生产能力的验证，可以调动人 的积极性，合理分工，安排生产任务，并可适时安排培训。在企业，一台高精度注塑机与一台已 使用多年的普通注塑机其过程能力是不相同的；一名经验丰富的老工人与一名刚进厂的新工人的 过程能力也是不相同的。 过程能力通常用 6倍标准差（6）来表示过程能力的大小，对于单侧控制则用 3表示。过 程能力可以用过程能力指数（Cp）来衡量。过程能力不应与生产能力相混淆。 4、设计验证是在设计的适当阶段，为确保设计输出满足设计输入的要求而进行的验证。设 计验证的方法有设计评审，变换方法进行计算，以验证原来的计算分析结果的正确性，或进行模 型或样机试验。医疗器械在设计阶段还需要对产品的安全性和使用的可靠性在模拟过程的实验加 以验证。风险分析，在动物体外和体内的试验，生物学评价，临床研究和评价均可作为验证的一 部分。 5、预期型验证是对生产前的工艺、过程、材料等进行的验证，是一般在产品没有历史资料 和外来资料借鉴的情况下，根据预先计划好的大纲建立起某个工艺做了书面证据。这时的预期型 验证可以认为是确保产品安全生产的先决条件。 6、同步验证是指在生产过程中进行的验证。如工艺在实际贯彻过程中，通过获得的相关资 料来证实某项工艺已经达到预期的规定要求，如果与预期型验证的数据进行比较，可以获得工艺 的重现性和有效性的证据。 无菌医疗器械生产中所采用的 EO灭菌工艺就必须进行灭菌的同步验证，以证明制订的工艺 能确保产品合格，确 保 灭 菌 效 果 的 有 效 性 。 7、再验证是指对已经验证过的过程、工艺、材料、设备等在运行一定时间后的验证，或验 证过的系统的参数改变时针对改变部分进行的验证确认。在验证可以采用审阅分析历史数据，对 过程重新确认。GB18279-2000医疗器械环氧乙烷灭菌确认与常规控制标准中就规定了对验 证过的灭菌过程至少每年要进行一次再验证，确认已验证过的系统是安全的，工艺是可行的、有 效的。 验证的目的是识别出重要的工艺参数，确定这些参数的合格范围并提出控制这些参数的方法。 没有中间过程的控制，验证是没有什么意义的。为了使验证过的工艺发挥出应有的作用，要求各 方面的人员严格遵循操作规程，不要随意改动系统和工艺参数。 四、验证的范围 就无菌医疗器械生产方面的考虑，根据 YY0036的规定，一般需要验证的有原料、运输、机械 加工、配件清洗、人工组装、过程控制、包装、灭菌、产品检测等。 ，除此之外，需要验证的还有 厂房条件、设备、制水、周围环境、人员卫生等。凡是与无菌医疗器械生产有关联的、能影响产 品质量的因素、都应开展验证工作。无菌医疗器械生产过程的验证工作面大量广，涉及到物理学、 化学、机械工程学、生物学、医学、高分子材料学等多方面的专业基础知识，是一个庞大的系统 工程。 五、验证的程序 验证工作在无菌医疗器械生产企业中是一项全厂性的、综合性的、经常性的工作。生产企业 必须对验证及验证结果最终负责。因此各部门应密切配合开展工作。验证的一般程序为： 1、 成立验证工作小组； 2、 调查收集有关文献资料； 3、 组织学习相关标准规范要求； 4、 咨询有关专家（必要时） ； 5、 起草编制验证方案； 6、 验证实施与协调； 7、 汇总验证数据，形成验证报告； 8、 验证文档的管理。 六、验证的组织机构 由于验证工作在企业不是由某一个部门可以单独完成的，因此验证工作需要由企业的管理层 作出决策，着手策划，并且配备资源，一般是专门设立验证工作小组，可以由质量、生产、技术、 采购、安全、设备等部门参加，当然根据不同的验证，验证工作小组也可以是其中几个部门或是 吸收其他部门人员参加。 参与验证工作小组的人员应有较高的文化素质，有较强的责任心，有解决问题的能力，有人 际间交流的能力和口头及书面沟通的能力。在技术方面有发现问题和解决问题的能力是验证的基 础。参加验证的人员应经过必要的培训。 在验证过程中，参与部门的主要职责为： 技术部门：制定验证计划，确定待验证的工艺条件，标准，检验和试验的方法，起草编制验 证方案和必要的人员培训方案。并对验证工作提供技术性指导。 质量部门：组织验证计划和方案的实施，确定抽样方案、负责检测、评价，确认出具验证结 果报告。 生产部门：参与验证方案制定，协同组织实施验证方案，收集验证资料，会签验证报告。 设备部门：培训操作人员，安装调试设备，确认验证方案中对设备验证要求。 生产车间：负责验证工作的现场实施，安排验证过程 所 必 需 物 质 资 源 及 人 力 资 源 ， 为 开 展 好 验 证 提 供 必 要 的 环 境 条 件 。 验证的计划和方案应经授权人审核，管理者批准。各职能部门在验证过程中的相互配合是至 关重要的，只有通力合作，才能保证验证工作的正常开展。才能获得正确、完整的验证数据。 七、验证方案的制订 验证过程一般有方案的制订，计划书的编制，方案的实施，结果的评价四个步骤。一般来说 验证过程需要对几组方案进行检查或试验，从中选择满足指标、符合要求的结果，将方案转化成 生产工艺文件或用来确定生产条件。好的验证是要有一个以上的试验方案，记录的参数适合于进 行比较，适合于判断，选定的方案重复性好。 当验证项目确认后，验证方案一般包含计划的安排，验证方法的选用，检验和试验方法的确 认，验证结果的评价等四个方面，基本内容如下： 1、计划安排； 1) 成立验证小组 2) 收集文献资料 3) 确定验证范围 4) 编制技术要求 5) 确定验证步骤 6) 方案审批 2、验证方法选用； 1) 方法设计 2) 选用分析 3) 确认 3、检验方法确认； 1) 方法选用 2) 过程出证 3) 仪器选用 4) 仪器校准 5) 确认试验 6) 再确认 4、验证结果； 1) 评价过程分析 2) 结果评价 3) 结果确认 4) 结果批准。 对于无菌医疗器械来说，涉及到多方面验证项目，其中各项目的验证目的、验证方法不同， 因此，在编制验证方案时，要考虑到不同的验证方法和具体的操作步骤。编制好的验证方案要经 授权人审批后实施。 当验证方案确定后，就要编制一份验证计划书。验证方案书的内容必须包括对验证对象（如 设备、工艺过程、检测方法等）用流程式文字作简单明了的描述，一般的验证方案书可按下列内 容和要求进行编写： 1) 验证项目名称； 2) 验证目的； 3) 验证小组的构成； 4) 验证依据； 5) 验证项目； 6) 验证条件； 7) 验证方法； 8) 确认出证； 9) 结果评价。 八、验证的实施 在验证计划经过各方协商后，应按照计划的规定去做好准备工作，首先，要检查一下实施验 证的一些必需条件，资源是否具备，例如各种标准器、检验化验仪器、试剂、记录仪器、测量仪 器等等。这些工具都必须在验证前准备完善。另外，验证过程中所需要的各种记录表格，也应准 备完毕，不得随意代用。在验证方案实施前，还应对所有使用的仪器仪表进行校准检定，以确保 验证的数据正确无误。 在验证实施过程中所有参加验证工作的人员，必须要对验证方案进行认真的学习，掌握了解 所规定的验证方法和要求，及有关的参数引用文件的规定。严格按验证方案的规定去进行操作， 检查并记录各种运行状态，确认有关数据。若可能会出现对验证方案进行补充和修改的情况，可 以另外起草一份补充方案，并说明修改或补充的内容和理由，待整个验证工作结束后，再重新改 写。补充方案应经原方案批准人审批。 九、验证结果的审批 验证工作结束以后，验证人员应将验证结果整理汇总，形成一份验证试验报告。在准备验证 报告时，可按照验证方案的内容和项目进行描述，评价验证最终结果是否符合设定的工艺参数或 标准，对偏离或不符合规定的结果应予以说明，必要时可重新进行验证。验证报告应包括或参照 以下内容： 1) 灭菌产品的说明（包括、包装、灭菌柜内的装载图） ； 2) 灭菌器的技术条件； 3) 设施验证数据； 4) 所有性能的物理记录和生物记录； 5) 所有仪表记录仪等在进行性能验证时的校准说明； 6) 复审和重新验证的方案（如需要） ； 7) 验证方案； 8) 所用程序的文件资料； 9) 所有人员的培训记录与证书（复印件） ； 10) 文件化操作规程，包括过程界限； 11) 程序维持与校核。 验证报告在获得最终批准之前，所有参加验证方案会签的人员应对其内容进行审核确认，授 权人正式签字批准后，形成正式文件，并将验证结果通报有关职能部门，作为制定工艺文件或作 业指导书的一个重要依据。 验证结束后，有关的资料应由职能部门负责整理归档，便于今后的验证工作或新的项目实施 验证时参考。 验证文件、资料的保管按性质可分为两大类：厂房、设备性的验证资料应作为长期保存，生 产过程工艺性的验证资料可根据企业情况制订保存期限。 第二章 环氧乙烷灭菌验证基本概念 一微生物 微生物是存在于自然界中的一群形体微小、构造简单、肉眼直接看不见，必须借助光学显微 镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍、甚至几万倍才能观察到的低等生物。微生物一般由单细胞 构成也有简单的多细胞，具有一定的形态、结构、生理功能，并能在适宜的环境中快速地生长和 繁殖。 微生物的种类繁多，至少十万种以上，按其结构.组成等差异可分成三大类: 1、非细胞型微生物：体积微小,能通过滤菌器,只能在活细胞内生长繁殖。病毒属此类。 2、原核细胞型微生物：仅有原始核，无核仁和核膜，缺乏完整的细胞器。如：细菌衣原体， 支原体，螺旋体和放线菌。 3、真核细胞型微生物：细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，胞浆内有完整的细 胞器。真菌属此类。 由于病毒、细菌、真菌等形态结构、生理活动、代谢产物等不尽相同，它们又可各自进一步 分类。必须指出，细菌形态保证在分类中仅仅是初步的鉴定依据，一般需按其生理特征，抗原构 造和 DNA硷基组成等鉴定。 二、细菌 细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物。细菌形态微小、结构简单，无典型的细胞核，只有 核质（染色体） ，无核膜和核仁，不进行有丝分裂，除核蛋白体外无其他细胞器。 细菌在一定环境下有相对恒定的形态结构。细菌的结构与其生理功能、致病、免疫等特性有 关。细菌个体很小须用显微镜放大数百倍才能看见。一般以微米 （1m=1/1000 mm）作为测量其大小的单位，不同种类的细菌大小不一，同一种细菌也可受菌龄 和环境因素的影响，其大小有所差异。 细菌的外形有球形、杆形、螺形三种基本形态，分别称为球菌、杆菌和螺旋菌。 三、产品初始污染菌要求 指灭菌前，附着在包装材料和医疗用品上的全部活的微生物之和。 灭菌产品管道类内腔10 cfu /件次，外部100 cfu /件次；非管道类100 cfu /件次； 敷料类100 cfu /g；消毒产品1000 cfu /件次或重量（g） 。 应当指出，初始污染菌是产品从原料、加工、外协件、组装、过程检验、车间与员工卫生状 况、传递、包装等环节中被污染的，它提供微生物污染信息，了解微生物污染水平，有利于分析 污染微生物分类，用以提高产品安全卫生水平。初始污染菌的检验是方法结果，没有一个方法能 检出产品存活全部微生物。 二种检测方法比较 项 目 GB15980 EN 1174-1 洗涤剂 培养基 校正因子 无菌生理蓝水 营养琼脂 无 含蛋白胨，表面活性剂 胰酪大豆琼脂 有 初始污染菌的检测，灭菌产品分别检验管道内腔与外部染菌数。对一次性使用医疗器具如输 液器、输血器、注射器等，检验管道内初始污染菌尤为重要。 附：GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准附录 C： 初始污染菌数检测： C1采样方法 C11 对可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器、注射针、透析器 及各类导管等，按中华人民共和国药典（1990 年版）规定执行。 C12 对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品可用浸有生理盐水的棉拭子涂抹采样， 被采表面5 m 3时，体积每增加 1 m3时，增加 1个测点； c)灭菌器柜室可用体积10 m 3时，至少 20个。 3）启动加热/循环系统，在到达灭菌工艺所需温度（如 50）时，记录所有传感器的温度值。 4）标准要求所有温度传感器间温度的最大偏差3。 5）空载灭菌室箱壁温度均匀性验证的温度传感器分布须有示意图表示。 6、灭菌室空间温度均匀性试验 验证灭菌室空间温度均匀性是否符合要求。 1）在空灭菌室内放置规定数量的温度传感器，温度探头应放置于能代表温度变化最大的部位， 如靠近柜室不受热的位置或柜门，和靠近蒸汽或气体入口的位置。其余的温度探头应均匀分布于 整个灭菌器中。 2）温度传感器的数量应能提供空柜室内表面和空间的整个温度分布，探头数量要根据灭菌器 的设计和灭菌过程技术规范确定。根据经验，通常进行这类温度测量宜采用以下传感器数量： a)灭菌器柜室可用体积5 m 3时，至少 10个，均匀分布； b)灭菌器柜室可用体积5 m 3时，体积每增加 1 m3时，增加 1个测点； c)灭菌器柜室可用体积10 m 3时，至少 20个。 3）启动加热/循环系统，在到达灭菌工艺所需温度（如 50）时，记录所有传感器的温度值。 4）标准要求所有温度传感器间温度的最大偏差3。 5）空载灭菌室空间温度均匀性验证的温度传感器分布须有示意图表示。 7、灭菌室满载温度均匀性试验 验证灭菌室满载时温度均匀性是否符合要求。 1）在灭菌室满载的条件下，将规定数量的温度传感器（计算方法同上）均匀地分布在灭菌负 载包装箱内，启动加热/循环系统，在到达灭菌工艺所需温度（如 50）时，记录所有传感器的 温度值。 2）标准要求所有温度传感器间温度的最大偏差5。 3）灭菌室负载要有装载模式图。 五、微生物性能验证 微生物性能验证在灭菌器物理性能验证合格后进行。它验证现用环氧乙烷灭菌工艺是否符合 GB18279-2000 医疗器械 环氧乙烷灭菌确认和常规控制标准。对新产品、新材料、新包装、 新工艺的使用，通过灭菌验证为灭菌工艺的制定提供依据。 在进行微生物性能验证前，需进行负载试验；以及试验用生物指示物的检测（若需要） 。 微生物性能验证方框图 剂剂EO剂剂 ()剂 说明：图中虚线箭头表示此过程可选择做。 影响环氧乙烷灭菌的因素很多，主要有温度、压力、环氧乙烷浓度、相对湿度等。 1、温度 环氧乙烷的杀菌作用、灭菌时间、对物品的穿透能力与温度密切相关。在一定的范围内，随 着温度的升高，环氧乙烷的杀菌作用加强，同时也能增强其穿透力和缩短灭菌作用的时间。温度 的常规极限通常在 27-63，一般常用的合适温度为 505。但是当温度高到足以使药物发挥 最大作用时，再升高温度，则杀菌作用亦不再加强。在较高的温度下（例如 40-57）环氧乙 烷的用量为 440mg/L、880mg/L 和 1500mg/L，其消毒作用是一样的。用环氧乙烷消毒时通过适当 的提高温度，可以节省环氧乙烷用量与缩短消毒时间。 1）加温系统温度与均匀性 环氧乙烷灭菌柜以热水循环方式加热，根据灭菌柜体积不同，热水循环系统数量也不同，安 装试运行或经长期使用后，要检测循环系统的温度与流量是否一致。 2）处理（负载试验）应在受控条件下进行一段时间的予处理和（或）处理，使被灭菌物品内 达到规定温度和相对湿度。它同以下因素有关： 产品；规格（长*宽*高） ；数量（箱） ；总载量（30%，以达到使环氧乙烷有效地杀灭微生物所需要高的湿度，加湿要考虑 水蒸汽在灭菌柜内的均匀性。 5）影响湿度因素 被灭菌物品的含水量 经予处理、予真空的湿度 包装材料水分蒸发量与吸水量 包装材料的水蒸汽透气性 车间环境湿度对产品湿度影响 生物指示物的含水量 5、通风 产品应放置在规定条件下，持续通风一段时间。 通风可在灭菌器内和（或）单个柜室或房间内进行。 EO及其反应产物的残留物可能是有害的。生产厂必须认识到产品中可能有残留物存在。温度、 停放时间、强制气体循环、装载特性、产品与包装材料都对通风的效果有影响。 测定通风区温度分布的方法，应与推荐的测定预处理区温度分布的方法相同。应测定通风区 的气流速度和气流分布图。 通风： a）时间和温度； b）柜室内和（或）房间内压力的改变（如有改变） ； c）空气或其他气体所换气速度； d）被灭菌物品的温度和； e）柜室内和（或）空间内产品的摆放方式和分隔形式。 6、换气 抽真空，去除灭菌剂应根据对产品与包装的影响，设定规定压力（速率与时间） 。 换气的次数与加入清洁空气至大气压力。 应基本去除灭菌柜内的环氧乙烷。 出料应开启排风系统，保护操作员工避免吸入环氧乙烷。 7、微生物性能试验 除非能证明与以前经确认的产品、包装或被灭菌物品摆放方式等效，否则必须采用新的或更 改过的产品、包装、被灭菌物品摆放方式、设备或过程参数进行微生物性能鉴定。对等效性的证 明，应形成文件。 对适用生物指示物应作出规定，并形成文件。 做微生物学性能鉴定的产品，应采用与其常规灭菌相同的包装。 微生物学性能鉴定必须通过对符合 GB 18281.2的生物指示物灭菌，证明该灭菌过程适合产品 灭菌。 应把这些指示物放置在整个被灭菌物品中具代表性的部位，所选的周期条件对微生物的杀灭 力低于通常指定灭菌周期的杀灭力，达到保证无菌。 如果模拟产品灭菌的过程监测器材和指示物一起用于 EO灭菌的常规监测，则对过程监测器材 的适合性应予证实。 EO灭菌指示物应在预处理（若采用）前放置于被灭菌物品中，并且在整个灭菌周期中保持在 该位置。 应规定产品的生物负载，并形成文件。相关的国家标准将包括微生物确认方法和常规控制方 法。 生物指示物应放于产品中最难灭菌的位置，若产品的设计不能将生物指物放于其最难灭菌地 方，则应采用能提供已知数量活芽胞的芽胞悬液给产品染菌，芽胞悬液应符合 GB 18281.2标准。 使被染菌的产品表面上芽胞均匀地分布于被灭菌物品中，但放置点应包括灭菌条件下最难灭 菌的地方。用于生物学性能鉴定的生物指示物的数量应能验证整个被灭菌物品的微生物灭活。放 置点的选择可与进行温度监测的位置相同，要想深入了解过程的有效性，应将两个生物指示物放 置于每个热电偶的附近。根据已鉴定的实践经验，通常进行这类微生物学试验宜采用以下生物指 示物数量： 灭菌器柜室可用体积小于等于 5m3时，至少 20个； b）灭菌器柜室可用体积 5m3至 10m3时，每增加 1m3，应增加 2个生物指示物； c）灭菌柜室可用体积大于 10m3时，每增加 2m3，应增加 2个生物指示物。 应使用下列通用方法之一进行生物学性能鉴定。 注：当采用下面的方法 A或方法 B测定作用时间时，应考虑产品上灭菌前微生物污染水平。 当用这些方法测定作用时间时，还应考虑用于测定灭菌前微生物污染的（各种）方法的精确度和 准确性。 方法 A：存活曲线法 方法 B：部分阴性法 EO灭菌指示物应暴露于除时间外其他参数不变的时间递增的 EO灭菌过程。灭菌后，直接将 试验样品浸入适当的培养基内，样品按培养后无菌生长的比例计数，至少包含以下 7组灭菌结果： 至少有一组试样均显示有菌生长； 至少有四组试样中显示部分样品有菌生长（量化区） ； 至少有两组试样显示无菌生长。 D值可根据采用本标准 B7所述方法获得的结果求出。 方法 C：半周期法 本方法是在除时间外所有其他过程参数不变情况下，确定无存活菌的 EO最短作用时间。应再 重复两次实验来证实该最短灭菌时间，两次重复试验均应表明生物指示物上无菌生长。规定的作 用时间应至少为最短灭菌时间 2倍。还要进行能让存活菌复苏的短周期运转，以证明复苏技术的 可靠性。 应确定在确认研究中用于复苏生物指示物的条件，并形成文件。在确定培养时间时，应考虑 到 EO灭菌后芽胞有可能延迟生长。 生物指示物的培养时间 8、生物指示物的长菌检验 灭菌后生物指示物应及时转入培养基中进行培养。 取出被灭菌产品中生物指示物，应避免交叉污染与实验室污染。 经培养后生物指示物的普通肉汤培养基出现混浊，并符合枯草杆菌的特征，判为长菌。如有 可疑，将培养物分离在普通琼脂平板上，经 1-2天培养，枯草杆菌的菌落为粗糙型，黄色，边缘 不整齐，扁平并有粘性。必要时作染色镜检。 根据七次微生物性能确认试验及得到数据，计算各参数的均数，标准差与全距。 作为验证灭菌工艺与制订灭菌工艺依据。 9、二次灭菌对产品影响的验证 由于一次灭菌的失败，必须对产品进行第二次灭菌，第二灭菌对产品是否有影响呢？ 应根据标准对产品进行感官、物理、化学各项指标检验。特别对 EO残留量和 EO反应产物进 行监测，需要贮存多少天才能下降到安全水平，产品才能放行。 10、车间空气中 EO浓度测定 检验依据：GB 11721-89 检验方法：1、比色法 2、气相色谱法 比色法： 原理：环氧乙烷经酸水解成乙二醇，乙二醇经高碘酸钾氧化成甲醛，甲醛与发色剂作用生成 紫色化合物，通过比色可求得环氧乙烷含量。 采样：0.5L/min 10-20min 正常生产时 灭菌完成出箱时 采样点：根据灭菌车间大小分布，工人操作点，采样高度工人呼吸带 标准 EO浓度：1mg/m 3 11、废水中 EO浓度测定 检验依据：EN550 检验方法：气相色谱顶空分析法 原 理：在一定温度下，根据气一液分配定律测定样品中 EO含量 操 作：根据 GB/T 14233.1-1998。最好用六通阀进样，重现性好。 评 估：气相色谱法直接检测废水中 EO含量，因废水经加酸处理变成乙二醇，所以用比色 法结果不能反映出废水 EO含量，结果偏高。 12、噪音 请环保部门测定 附录：环氧乙烷灭菌验证相关表单 环氧乙烷灭菌验证相关表单一览表 验证项目 表单序号 1、环氧乙烷灭菌验证人员资格确认表 EO表 001 、产品确认表 EO表 002 、产品的物理、化学性能验证确认表 EO表 003 、环氧乙烷残留量验证确认表 EO表 004 2、产 品灭菌 的适用 性 、再次灭菌的影响验证确认表 EO表 005 4、化学指示物适用性验证确认表 EO表 006 化学指示物文件资料验证记录 EO表 006-1 5、生物指示物适用性验证确认表 EO表 007 生物指示物文件资料验证记录 EO表 007-1 生物指示物含菌量检验记录 EO表 007-2 6、灭菌剂适用性验证确认表 EO表 008 灭菌剂文件资料验证记录 EO表 008-1 7、产品的初始污染菌确认表 EO表 009 产品的初始污染菌检验记录 EO表 009-1 一、 验证前 的准备 8、加湿用蒸汽确认表 EO表 010 加湿用蒸汽质量检验记录 EO表 010-1 、小包装透析纸阻菌性能验证确认表 EO表 011 小包装透析纸阻菌性能验证记录 EO表 011-1 、小包装贮存验证确认表 EO表 012 小包装贮存验证记录 EO表 012-1 、小包装机械振动试验确认表 EO表 013 小包装机械振动试验记录 EO表 013-1 、小包装渗漏验证确认表 EO表 014 小包装渗漏试验记录 EO表 014-1 、小包装不透气性验证确认表 EO表 015 小包装不透气性试验记录 EO表 015-1 、小包装封口验证确认表 EO表 016 小包装封口粘合性能试验记录 EO表 016-1 小包装耐压试验记录 EO表 016-2 二、 包装 、再次灭菌的影响 EO表 017 续前表 1、设备的相关资料确认表 EO表 018 设备的相关资料确认记录 EO表 018-1 2、环境确认表 EO表 019 3、相关计量器具校验确认表 EO表 020 相关计量器具校验记录 EO表 020-1 4、灭菌器的安装确认表 EO表 021 灭菌器安装位置符合性确认记录 EO表 021-1 灭菌器安装系统完整、准确性确认记录 EO表 021-2 5、电器控制系统的安装确认表 EO表 022 电器控制系统的安装确认记录 EO表 022-1 6、计算机系统的安装确认表 EO表 023 三、 安装验 证 计算机系统的安装确认记录 EO表 023-1 1、电器控制系统的运行验证确认表 EO表 024 电器控制系统的运行验证记录 EO表 024-1 2、辅助设备的运行验证确认表 EO表 025 辅助设备的运行验证记录 EO表 025-1 3、报警系统的运行验证确认表 EO表 026 报警系统的运行验证记录 EO表 026-1 4、计算机系统运行验证确认表 EO表 027 四、 运行验 证 计算机系统运行验证记录 EO表 027-1 1、真空速率验证确认表 EO表 028 真空速率验证记录 EO表 028-1 2、正压泄漏验证确认表 EO表 029 正压泄漏验证记录 EO表 029-1 3、真空泄漏验证确认表 EO表 030 五、 物理性 能验证 真空泄漏验证记录 EO表 030-1 4、加湿系统验证确认表 EO表 031 加湿系统验证记录 EO表 031-1 5、灭菌室箱壁温度均匀性验证确认表 EO表 032 灭菌室箱壁温度均匀性验证记录 EO表 032-1 灭菌室箱壁温度均匀性验证温度传感器布点图 EO表 032-2 续前表 6、灭菌室空间温度均匀性验证确认表 EO表 033 灭菌室空间温度均匀性验证记录 EO表 033-1 灭菌室空间温度均匀性验证温度传感器布点图 EO表 033-2 7、灭菌室负载温度均匀性验证确认表 EO表 034 灭菌室负载温度均匀性验证记录 EO表 034-1 五、 物理性 能验证 灭菌室负载温度均匀性验证温度传感器布点图 EO表 034-2 1、微生物性能验证确认表 EO表 035 微生物性能验证记录 EO表 035-1 生物指示物布点图和负载装载模式图 EO表 035-2 初始灭菌工艺 EO表 035-3 确认的有效灭菌工艺 EO表 035-4 六、 微生物 性能验 证 灭菌柜（室）换气记录 EO表 035-5 （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表： 001 环氧乙烷灭菌验证人员资格确认表 验证目的：确认参加验证的人员具备正确从事验证活动的资格 验证要求：1、至少有两人经培训合格的验证人员； 2、参与验证的人员与培训记录相符。 验证依据：GB182792000 验证（操作）人员姓名： 人员专业： 设备管理 操作 微生物检验 计量管理 验证内容： 记录确认 1、环氧乙烷灭菌基本常识 合格 不合格 培训记录单号_ 2、设备规格性能 合格 不合格 培训记录单号_ 3、设备安装 合格 不合格 培训记录单号_ 4、计量器具校准 合格 不合格 培训记录单号_ 5、灭菌参数设定 合格 不合格 培训记录单号_ 6、设备操作 合格 不合格 培训记录单号_ 7、设备维护 合格 不合格 培训记录单号_ 8、物理性能鉴定 合格 不合格 培训记录单号_ 9、微生物性能鉴定 合格 不合格 培训记录单号_ 验证方法：检查相应的培训记录 相关文档： 1、培训记录 2、操作上岗证 不合格描述： 验证结论： 合格 不合格 验证人： 日期： 审核结论： 合格 不合格 审核人： 日期： （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表： 002 产品灭菌的适用性（1）产品说明验证确认表 验证目的：确认产品灭菌的适用性 验证要求：从产品的设计要求方面确认产品是否适用环氧乙烷灭菌 验证依据：产品的技术文档 验证（操作）人员姓名： 验证项目： 1、产品名称 2、材料 3、产品结构说明（附图） 4、确定产品最难灭菌部位 相关文档 ： 产品技术文档 不合格描述： 验证结论： 合格 不合格 验证人： 日期： 审核结论： 合格 不合格 审核人： 日期： （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表： 003 产品灭菌的适用性（2）产品的物理、化学性能验证确认表 验证目的：确认产品灭菌的适用性 验证要求：产品经环氧乙烷灭菌后，其物理、化学性能达到产品设计的预期要求 验证依据：产品技术文档 验证（操作）人员姓名： 验证项目： 确认记录 产品的物理、化学性能（产品的技术指标） 合格 不合格 验证方法： 产品技术文档 相关文档： 1、采样及灭菌参数记录； 2、相关检验报告。 不合格描述： 验证结论： 合格 不合格 验证人： 日期： 审核结论： 合格 不合格 审核人： 日期： （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表： 004 产品灭菌的适用性（3）环氧乙烷残留量验证确认表 验证目的：确认产品灭菌的适用性 验证要求：产品经环氧乙烷灭菌后，环氧乙烷残留量符合相关标准的要求。 验证依据：GB15980-1995 验证（操作）人员姓名： 验证项目： 确认记录 环氧乙烷残留量 合格 不合格 验证方法： 一次性使用医疗用品卫生标准：GB159801995 . 附录 G 相关文档： 1、采样及灭菌参数 2、相关检验报告 不合格描述： 验证结论： 合格 不合格 验证人： 日期： 审核结论： 合格 不合格 审核人： 日期： （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表： 005 产品灭菌的适用性（4）再次灭菌的影响验证确认表 验证目的：确认产品灭菌的适用性 验证要求：如允许再次灭菌，应确保产品经再次灭菌后，其物理、化学性能和环氧乙 烷残留量符合相关要求。 验证依据：GB15980-1995，产品技术文档 验证（操作）人员姓名： 验证项目： 确认记录 1、产品的物理、化学性能（产品的技术指标） 合格 不合格 2、产品的环氧乙烷残留量 合格 不合格 验证方法： 参见 GB15980-1995 和产品技术文档 相关文档： 1、采样灭菌参数 2、相关检验报告 不合格描述： 验证结论： 合格 不合格 验证人： 日期： 审核结论： 合格 不合格 审核人： 日期： （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表： 006 化学指示物适用性验证确认表 验证目的：确认化学指示物灭菌的适用性 验证要求：1、采购符合法规要求 2、产品符合产品标准要求 验证依据： GB1828212000 验证（操作）人员姓名： 产品名称： 型号规格： 生产批号： 生产企业： 验证内容： 资料（记录）确认 1、分承包方有关资料 合格 不合格 2、法定的生产许可证 合格 不合格 3、法定的卫生许可证 合格 不合格 4、化学指示物样品 灭菌前样品 合格 不合格 灭菌后样品 合格 不合格 5、进货检验文件资料 合格 不合格 6、产品标准 合格 不合格 验证方法： 核实相关资料 相关文档： 文件资料明细表 不合格描述： 验证结论： 合格 不合格 验证人： 日期： 审核结论： 合格 不合格 审核人： 日期： （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表：0061 化学指示物适用性验证文件资料明细表 序号 文件资料名称 编（证）号 有效期 备注 验证人： 日期： （ 企 业 名 称 ） EO灭菌验证表单 EO表： 007 生物指示物灭菌的适用性验证确认表 验证目的：确定生物指示物对灭菌过程的适应性 验证要求：1、采购符合法规要求 2、产品符合产品标准要求 验证依据： GB1828222000 验证（操作）人员姓名： 产品名称： 型号规格： 生产批号： 生产企业： 验证内容： 资料（记录）确认 1、分承包方