扬州市区主要河流革兰氏阴性菌污染情况调查

扬州市区主要河流革 兰氏阴性菌污染情况 调查 班级：09 环监（2） 研究小组：李珊珊、孔一涛、 刘碧玉、胡香、龚秀宽 一前言 1选题的实际应用价值及研究现状 水是生命之源，人类无法离开她而生存，然而当前水质污染令 人堪忧，饮水安全无法保证。水又是微生物广泛分布的天然环境， 无论是地表水还是地下水，甚至雨水或雪水，都含有多种微生物。 根据细菌对氧的需求情况，可分为三大类：厌氧菌、兼性厌氧菌、 好氧菌。当水体受到人、畜粪便、生活污水或某些工业废水污染时， 水中厌氧菌和兼性厌氧菌等微生物的数量可大增。水环境研究显示 我国 70以上的河流受到了污染，全国湖泊约有 75的水域受到显 著污染，90以上城市水域污染严重。因此，水中的细菌总数测定， 特别是肠道细菌的检验，在环境质量评价、环境卫生监督等方面具 有重要的意义。但是直接检查水中各种病原微生物，方法较为复杂， 有的难度大，而且检查结果为阴性也不能保证绝对安全。所以，在 实际工作中经常以检查水的细菌总数，特别是检查作为粪便污染的 指示菌，来间接判断水体污染状况和环境卫生学质量。 常用的指示菌或其它指示微生物有：总大肠菌群、粪大肠菌群、 粪链球菌、产气荚膜梭菌、双歧杆菌属、肠道病毒、大肠杆菌噬菌 体、沙门氏菌属、志贺氏菌属、铜绿假单胞菌、葡萄球菌属、副溶 血弧菌等。此外，还有水生的真菌、放线菌和线虫。 2. 本小组对题的构思及采用的研究方法 水中细菌总数测定操作过程： 1.实验准备 2.水样的采取、稀释 3.接种、倒平板、培养 4.菌落计数、报告 3.水中细菌总数测定操作过程需要的试剂和器材 1.试剂：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，灭菌水 2.器材：灭菌三角瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌 吸管，灭菌试管，酒精灯，火柴，培养箱 4可能遇到的困难和问题以及相应的解决办法和措施 问题和困难： 解决办法和措施： 1. 菌落计数不正确 使用菌落计数器 2. 操作过程培养基凝结 快速倒完且适量 3. 怎么做到无菌操作 在超净台上操作 4. 为什么培养基不凝固 调 PH 5. 培养后观察不到细菌菌落 从头开始再操作 5研究方法 本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种 类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到 一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此， 以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数 仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 6主要参考文献 1.陈玮，董秀芹.微生物学及实验实训技术M. 北京:化学工业 出版社，2007 2.唐突.食品卫生检测技术M. 北京:化学工业出版社，2006 3.宋思杨，楼士林.生物技术概论M.第 2版. 北京:科学出版 社，2005 4.教学教案本.贵阳医学院.2006 5.生物实验.无忧生物网.2007.02.15 6.基础型实验内容.实验教学中心.山东农业大学农业生物学. 2005 7.中国仪器之家实验室常用方法资料J.水中病原微生物.2005 8.徐飞，王开元，江迎春.水中细菌总数测定的优化研究J. 今日科技 ，第 1期. 2007 二实验操作 1.实验准备 准确称量药品：牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 琼脂 2g .药品溶化：将 5.1.1 称量的药品进行溶化 .培养基调 pH：将培养基 PH 调至 7.0-7.2 .培养基过滤：使用纱布将培养基中的泡沫，沉淀物过滤 .培养基分装：将培养基分装到各洗净干燥的锥形瓶中 .盛放培养基的锥形瓶加塞：将锥形瓶加上橡胶塞 .锥形瓶包扎：使用纱布报纸包扎锥形瓶 2 水样的采取、稀释 （一）水样的采集 河水或湖水：应取距水面 l015cm 的深层水样，先将灭菌的带玻璃 塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入 瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则 需放入冰箱中保存。 (二) 水样的稀释 .取 3个灭菌空试管，分别加入 9ml灭菌水。取 lml水样注入第一 管 9ml灭菌水内、摇匀，再自第一管取 1ml至下一管灭菌水内，如 此稀释到第三管，稀释度分别为 10-1、10-2 与 10-3。 .若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续 稀释或减小稀释倍数。 3.接种、倒平板、培养 .仪器编号：所有要用到仪器全部编号 .水样吸取：用灭菌吸管吸取 lml 水样，注入灭菌培养皿中。共做 两个平皿。 .平板制作：分别倾注约 15mL 己溶化并冷却到 45左右的肉膏蛋 白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分 混匀。 .对照试验：另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15mL 作空自对照。 . 待牛肉膏蛋白胨琼脂培养基凝固后倒置于 37培养箱中培养 24h。 4.菌落计数、报告 先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙 酮)脱色，最后用复染剂(如番红) 复染。经此方法染色后，细胞保留 初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂 洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。 革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，为保证染色结果的正确性， 采用规范的染色方法是十分必要的。 活菌数=平均菌落数*稀释倍数 小秦淮河 稀释度 空白 10-1 10-2 10-3 平板 1 2 1 2 1 2 菌落数 19200 2765 2895 296 288 34 36 平均菌落数 19200 2830 292 35 菌落总数/(个 /ml) 19200 28300 29200 35000 二道河 稀释度 空白 10-1 10-2 10-3 平板 1 2 1 2 1 2 菌落数 10912 1392 1334 173 155 25 15 平均菌落数 10912 1365 164 20 菌落总数/(个 /ml) 10912 13650 16400 20000 宝带河 稀释度 空白 10-1 10-2 10-3 平板 1 2 1 2 1 2 菌落数 23512 2753 3027 319 305 42 36 平均菌落数 23512 2890 312 39 菌落总数/(个 /ml) 23512 28900 31200 39000 5. 分析讨论 实验做了两次，第一次是以原水样设计的实验，结果平板分离时的 阳性菌落太多以至实验失败，这次是以严重污染程度设计的实验； 从实验结果可以看出宝带河和小秦淮河水样的菌落总数超过了严重 污染的指标，二道河水样的菌落含量要低很多。 造成这显著的差异的原因： （1）从整个扬州的居民分布来看，靠近宝带河和秦淮河的居住密度 比较大，那些生活污水都往河里排，尤其是人畜粪便这种大肠菌含 量极高的污染物也大量往河里面排，导致河水细菌总数大大超过标 准值。 （2）居民的经济水平及当地的消费水平有关。 6. 结论 （1）宝带河河水的细菌污染现象极其严重 （2）造成菌落含量高的主要原因是附近居民的生活污水排往河里排， 并且伴随有周围工厂污水的注入，建议周围居民慎重取水与用水， 更加要保护水源。 致谢 感谢扬州职业大学生化工程系给予我们这样一次机会，并在这 个过程当中，给予我们各种方便，使我们能够更多学习一些实践应 用知识，增强了我们实践操作和动手应用能力，提高了独立思考的 能力。再一次对学校表示感谢。 感谢在整个科技创新期间和我们密切合作的同学，和曾经在各