生化期末设计性实验报告gpd缺乏症

年级：2012级 专业：麻醉学 班级：麻醉班 设计性实验报告 第三实验室 第四组 时间：2013年6月11日星期一 报告人：谢俊雄 组员：计树雄、黎国燕、李玲、罗靖、王玺赟、 王玉宣、谢俊雄、雍雪进、张茜、李俊 案例分析 案例分析 v 案例： v 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前 食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样（ 发生溶血性贫血）色，面色苍白。据家长反映，患者的姐 姐也曾发生过类似情况。 v 体格检查：体温38，脉搏150次/分，呼吸40次/分， 血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白， 皮肤及巩c膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常 ，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异 常。实验室检查：红细胞 1.981012/L，血红蛋白53g/L ，血清总胆红素85.5mol/L，结合胆红素13.7mol/L， 未结合胆红素71.8mol/L，尿蛋白（+），潜血(+)，尿 胆红素()，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 红细胞 1.981012/L （6.0-7.0）1012/L 血红蛋白 53g/L （170-200)g/L 血清总胆红素 85.5mol/L （3.4-17.1）mol/L 结合胆红素 13.7mol/L 03.42mol/L 未结合胆红素 71.8mol/L 013.68mol/L 尿蛋白（+） 潜血(+) 尿胆红素() 尿胆素原(+) 实验室检查项目正常值患儿检查值 案例分析 皮肤及巩膜黄染 黄疸 发病前曾食用蚕豆 其姐亦类似病史 Bp：80/60mmHg P：150bpm 呼吸：40每分 排尿呈酱油样 溶血性贫血 T：38 体温升高 呼吸急促 蚕豆病 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 案例分析 设计实验 G6PD基因分析 G6PD确诊试验 红细胞G6PD活性测定 G6PD荧光斑点试验 G6PD筛选试验 高铁血红蛋白还原试验 特异性不高 国际血液学标准化委员会 (ICSH)推荐 实验设计 G6PD荧光斑点试验 G6PD 实验原理：葡萄糖-6-磷酸（G6P）在G6PD作用下形成6- 磷酸葡萄糖（6PGA）,同时使NADP转变为NADPH,后者在340nm 波长紫外线照射下产生荧光。所以将含有G6P和NADP等的混 合试剂与血混匀0分钟、5分钟、10分钟时分别取1滴血到滤 纸上，通过观察滤纸上有荧光出现时间可判断G6PD活性。 NADP NADPH G6P 6PGA 实验原理 试剂反应液：G6P液1份、NADP液1份、 皂素2份、磷酸盐缓冲液3份和蒸馏水3份混 匀 仪器：长波紫外灯、滤纸、水浴箱 G6PD荧光斑点试验 取试管，加10l全血+100l反应液，混匀， 取一滴于滤纸上（第一斑点 ）作为对照 将上液置于37水浴10min ， 再取一小滴滴于滤纸上（第二斑点）实验组 晾干后，于长波紫外灯下（365nm）观察结果，计时 根据结果作出相应诊断 实验流程 G6PD荧光斑点试验 正常人： 0min斑点无荧光，5-10min出现， 10min荧光最强 临床诊断： 轻度缺陷者：0-10min荧光很弱或不出现 中度缺陷者：10-30min出现荧光 严重缺陷者：30min内不出现荧光 结果分析 G6PD荧光斑点试验 红细胞G6PD活性测定 实验原理：基本原理同G6PD荧光斑点实验。不同的是利 用紫外光分光光度法定量测定酶活性，即每隔一分钟在 340nm波长测定孵育液中NADPH吸光度（测6次），求每 分钟吸光度增加的平均值，根据单位时间内NADPH生成 由于所用试剂及体系的不同。 方法：WHO推荐的Zinkham;NBT定量法等 实验原理 G-6-PD活性测定的操作表（Zinkham法 ) 试管 对照管 测定管 NADP液（ml） 0.1 0.1 Tris液（ml） 0.1 0.1 氯化镁液（ml） 0.1 0.1 蒸馏水（ml） 0.68 0.58 G6P液（ml） 0.1 37预热 溶血液（l） 20 20 立即340nm处测吸光度，以对照管调零，37恒温 ，每分钟观察1次，记录吸光度的变化 实验流程 红细胞G6PD活性测定 计算公式：G-6-PD活性（U/gHb） =A/min1000/6.221020/20 Hb(gL-1) A/min:每min吸光度的平均变化值 1000/6.22:为微摩尔消光系数 1020/20:总容量与溶血液的量之比； 实验流程 红细胞G6PD活性测定 G6PD缺陷者：G6PD活性较正常平均值低40%以 上即可作出诊断 方法 正常值范围 WHO推荐的Zinkham (12.012.09)IU/gHb(37) ICSH推荐的Glock与McLoan法 （8.341.59）IU/gHb(37) NBT定量法 （13.130.0）NBT单位 Chapman和Dern法 （2.87.31）IU/gHb(25) 结果分析 红细胞G6PD活性测定 从生化代谢解释患儿的 临床表现和实验室检查结果 GSH的主要作用： 保护红细胞内的含硫氢基 （-SH）血红蛋白、酶蛋白和膜 蛋白的完整性，免遭氧化 与谷胱甘肽过氧化酶共同使 H2O2还原成H2O 红细胞 膜破裂 溶血性贫血 （面色苍白） 游离Hb肾 吸收阈值 血红蛋白尿/ 含铁血黄素尿 G6PDNADPH+H+ GSH红细胞的抗氧化能力 血尿、酱油样尿液 皮肤及巩膜黄染 体