梅毒诊断研究进展课件

梅毒诊断研究进展梅毒诊断研究进展 He who knows syphilis,He who knows syphilis, knows medicineknows medicine n n 一、概述一、概述 n n 二、梅毒螺旋体二、梅毒螺旋体 n n 三、梅毒三、梅毒 n n 四、梅毒的实验室诊断四、梅毒的实验室诊断 n n 五、我国梅毒诊断试剂的现状五、我国梅毒诊断试剂的现状 n n 六、中国药品生物制品检定所简介六、中国药品生物制品检定所简介 一、概述一、概述 名名 词词 n n 梅毒（梅毒（SyphilisSyphilis） n n 由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病 n n 是我国卫生部规定的是我国卫生部规定的8 8种重点防治性病之一种重点防治性病之一 n n 中华人民共和国传染病防治法中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病规定的乙类传染病 n n 世界卫生组织列为世界上最常见的世界卫生组织列为世界上最常见的5050种传染病之一种传染病之一 n n 梅毒螺旋体（梅毒螺旋体（Treponema pallidumTreponema pallidum，TP TP ） n n 是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋 体体 溯溯 源源 n n 关于梅毒关于梅毒(syphilis)(syphilis)的起源和传播有很多争执的起源和传播有很多争执 n n 梅毒来源于美洲：有记载，梅毒来源于美洲：有记载，14931493年哥伦布发现新大陆，其水手从西印度群岛年哥伦布发现新大陆，其水手从西印度群岛 上感染了梅毒，上感染了梅毒，14971497年回到欧洲，其水手带回去的梅毒很快在欧洲广泛流行年回到欧洲，其水手带回去的梅毒很快在欧洲广泛流行 。亦有考证在美洲印地安人的骨骼上留有梅毒病损的遗迹。亦有考证在美洲印地安人的骨骼上留有梅毒病损的遗迹 n n 14981498年梅毒传到印度年梅毒传到印度 n n 15101510年传入日本，随后蔓延全世界。年传入日本，随后蔓延全世界。 n n 大约于大约于15051505年由印度传入我国广东，当时称为年由印度传入我国广东，当时称为“ “广东疮广东疮” ”、“ “杨梅疮杨梅疮” ”，此后梅，此后梅 毒向内地传播毒向内地传播 n n 解放前梅毒在我国的传播甚为广泛，一些大城市的发病率达解放前梅毒在我国的传播甚为广泛，一些大城市的发病率达 ，某些少数民族地区高达，某些少数民族地区高达 n n 解放后，我国政府采取措施，只花费了十几年时间就控制了梅毒等性病的流解放后，我国政府采取措施，只花费了十几年时间就控制了梅毒等性病的流 行。尔后，撤销了大部分性病防治机构，医学院校也取消了性病课程，许多行。尔后，撤销了大部分性病防治机构，医学院校也取消了性病课程，许多 中青年医务人员压根儿就没见到过早期梅毒，至于一般年轻人甚至还没听说中青年医务人员压根儿就没见到过早期梅毒，至于一般年轻人甚至还没听说 过这种病。过这种病。 n n 8080年代初，梅毒和其他性传播疾病一样在我国死灰复燃，而且迅速蔓延年代初，梅毒和其他性传播疾病一样在我国死灰复燃，而且迅速蔓延 二、梅毒螺旋体二、梅毒螺旋体 分类分类 n n 螺旋体目（螺旋体目（SpirochaetalesSpirochaetales） n n 螺旋体科（螺旋体科（SpirochaetaceaeSpirochaetaceae） n n 密螺旋体属（密螺旋体属（TreponemaTreponema） n n 苍白螺旋体种（苍白螺旋体种（Treponema pallidumTreponema pallidum） n n 分几个亚种分几个亚种 生物学特性生物学特性形态学形态学1 1 n n 细长，细长，5 5150.1150.10.2um0.2um，形似细密的弹，形似细密的弹 簧，螺旋弯曲规则，平均簧，螺旋弯曲规则，平均8 81414个，两端尖个，两端尖 直直 n n 电镜下显示结构复杂，从外向内分为：外电镜下显示结构复杂，从外向内分为：外 膜（主要由蛋白质、糖及类脂组成）、轴膜（主要由蛋白质、糖及类脂组成）、轴 丝（主要由蛋白质组成）、圆柱形菌体（丝（主要由蛋白质组成）、圆柱形菌体（ 包括细胞壁、细胞膜及胞浆内容物）包括细胞壁、细胞膜及胞浆内容物） 生物学特性生物学特性形态学形态学2 2 n n 透明不易染色，姬姆萨染色则可染成桃红透明不易染色，姬姆萨染色则可染成桃红 色色 n n 在暗视野显微镜下观察，螺旋体浮游于组在暗视野显微镜下观察，螺旋体浮游于组 织中织中 n n 有三种特征性的运动方式：有三种特征性的运动方式： n n 旋转式，依靠自己的长轴旋转，向前后移动旋转式，依靠自己的长轴旋转，向前后移动 n n 伸缩螺旋间距离活动，不断地拉长身体，使一伸缩螺旋间距离活动，不断地拉长身体，使一 端附着，再收缩旋距而前进；端附着，再收缩旋距而前进； n n 蛇行式，弯曲，像蛇爬行，是常见的方式蛇行式，弯曲，像蛇爬行，是常见的方式 生物学特性生物学特性形态学形态学3 3 n n 细胞质外有三层细胞质膜，有柔软而较坚固的粘细胞质外有三层细胞质膜，有柔软而较坚固的粘 蛋白包绕，以维持其一定的结构，外膜含有丰富蛋白包绕，以维持其一定的结构，外膜含有丰富 的脂类及少量的蛋白的脂类及少量的蛋白 n n 6 6条内鞭毛围绕其内层细胞壁和外层细胞膜之间的条内鞭毛围绕其内层细胞壁和外层细胞膜之间的 空间旋转，是负责运动的收缩成分空间旋转，是负责运动的收缩成分 n n 表面有特异性抗原，能刺激机体产生特异性的凝表面有特异性抗原，能刺激机体产生特异性的凝 集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体 繁繁 殖殖 n n 繁殖方式与其生活环境有关繁殖方式与其生活环境有关 n n 近年来电子显微镜观察，在培养条件下或在体近年来电子显微镜观察，在培养条件下或在体 内适宜环境中为横断分裂，分裂时将躯干分裂内适宜环境中为横断分裂，分裂时将躯干分裂 成长短两段成长短两段 n n 分裂增代时间为分裂增代时间为30303333小时小时 n n 当条件不利时，以分芽子繁殖当条件不利时，以分芽子繁殖 n n 生活发育周期生活发育周期: :颗粒期、球形体期及螺旋体期，颗粒期、球形体期及螺旋体期， 与所致疾病周期、隐伏发作及慢性病程有关与所致疾病周期、隐伏发作及慢性病程有关 培培 养养 n n 一般不能人工培养一般不能人工培养 n n NicholsNichols株（有毒株）能接种在家兔睾丸中或眼前房株（有毒株）能接种在家兔睾丸中或眼前房 内繁殖，能保持毒力内繁殖，能保持毒力 n n 转种至加有多种氨基酸的兔睾丸组织碎片的特殊培转种至加有多种氨基酸的兔睾丸组织碎片的特殊培 养基中，养基中，2525厌氧环境下能使螺旋体保持运动能力厌氧环境下能使螺旋体保持运动能力 4-74-7天天 n n 19811981年年FieldsteelFieldsteel等采用棉尾兔单层上皮细胞在等采用棉尾兔单层上皮细胞在 1.5%1.5%氧的大气环境进行培养，经氧的大气环境进行培养，经9-129-12天孵育后，螺天孵育后，螺 旋体数比接种数平均增加旋体数比接种数平均增加4949倍，对兔仍保持毒力倍，对兔仍保持毒力 n n ReiterReiter株能生长繁殖，已丧失致病力株能生长繁殖，已丧失致病力 n n NicholsNichols株和株和ReiterReiter株已广泛用作多种梅毒血清学的株已广泛用作多种梅毒血清学的 诊断抗原诊断抗原 生存条件生存条件 n n 厌氧寄生物，在人体内可长期生存，体外不易生存厌氧寄生物，在人体内可长期生存，体外不易生存 n n 干燥、肥皂水及一般消毒剂如干燥、肥皂水及一般消毒剂如1 1：10001000苯酚、新洁尔灭苯酚、新洁尔灭 、稀酒精均可于短时间将其杀死、稀酒精均可于短时间将其杀死 n n 在血液中在血液中4 4经经3 3日可死亡，故在血库冰箱冷藏日可死亡，故在血库冰箱冷藏3 3日以上日以上 的血液就无传染性的血液就无传染性 n n 温度的影响：温度的影响：41-4241-42时可生活时可生活1-21-2小时，在小时，在4848仅半仅半 小时即失去感染力，小时即失去感染力，100100立即死亡。对寒冷抵抗力大立即死亡。对寒冷抵抗力大 ，在，在0 0时，可生活时，可生活4848小时，如将梅毒病损标本置于冰小时，如将梅毒病损标本置于冰 箱内，经箱内，经1 1周仍可致病。在低温（周仍可致病。在低温（-78-78）保存数年，）保存数年， 仍可保持其形态、活动及毒性仍可保持其形态、活动及毒性 n n 在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活1010小时左右小时左右 n n 在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时 n n 在干燥环境中可见迅速死亡在干燥环境中可见迅速死亡 宿宿 主主 n n 梅毒螺旋体只感染人类梅毒螺旋体只感染人类 n n 人是梅毒的唯一传染源人是梅毒的唯一传染源 毒力因子毒力因子 n n 目前未证明具有内毒素或外毒素目前未证明具有内毒素或外毒素 n n 粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子 n n 荚膜样的粘多糖能保护菌体免受环境中不良因素的伤害，荚膜样的粘多糖能保护菌体免受环境中不良因素的伤害， 在体内可阻止大分子物质（如抗体）穿透，从而保护菌体在体内可阻止大分子物质（如抗体）穿透，从而保护菌体 ，还有抗吞噬作用，还有抗吞噬作用 n n 粘多糖酶与对组织细胞的吸附，对组织基质的分解和荚膜粘多糖酶与对组织细胞的吸附，对组织基质的分解和荚膜 的合成有密切关系的合成有密切关系 致致 病病 性性 n n 由于其表面有赖以生存的荚膜样的粘多糖，荚膜由于其表面有赖以生存的荚膜样的粘多糖，荚膜 中含有的中含有的N-N-乙酰乙酰-D-D-半乳糖胺，不能自行合成，须半乳糖胺，不能自行合成，须 从宿主细胞获得从宿主细胞获得 n n 其粘多糖酶吸附含粘多糖的组织细胞表面的粘多其粘多糖酶吸附含粘多糖的组织细胞表面的粘多 糖受体上，分解宿主细胞的粘多糖、获取合成荚糖受体上，分解宿主细胞的粘多糖、获取合成荚 膜所需的物质膜所需的物质 n n 由于粘多糖是宿主组织和血管支架的重要基质成由于粘多糖是宿主组织和血管支架的重要基质成 分，粘多糖被梅毒螺旋体分解后，组织受到损伤分，粘多糖被梅毒螺旋体分解后，组织受到损伤 破坏，从而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管破坏，从而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管 腔闭合性动脉内膜炎，动脉周围炎及坏死，溃疡腔闭合性动脉内膜炎，动脉周围炎及坏死，溃疡 等病变等病变 抗抗 原原 n n 分为三类：分为三类： n n 1 1表面特异性抗原：刺激机体产生特异凝集抗体表面特异性抗原：刺激机体产生特异凝集抗体 及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解 螺旋体螺旋体 n n 2 2螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与 非病原性螺旋体有交叉反应非病原性螺旋体有交叉反应 n n 3 3，螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺，螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺 旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体 上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产 生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素（生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素（AegaginAegagin ），可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂），可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂 质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反应质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反应 （华氏试验）（华氏试验） 免免 疫疫 n n 以细胞免疫为主，体液免疫只有一定的辅以细胞免疫为主，体液免疫只有一定的辅 助防御作用助防御作用 n n 当螺旋体从体内清除后可再感染，而且仍当螺旋体从体内清除后可再感染，而且仍 可出现一期梅毒症状可出现一期梅毒症状 n n 此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内 产生的免疫力有关产生的免疫力有关 n n 机体免疫力强，螺旋体能变成颗粒形或球形，在体内一些部位潜伏起机体免疫力强，螺旋体能变成颗粒形或球形，在体内一些部位潜伏起 来，一旦机体免疫力下降，螺旋体又可侵犯体内某些部位而复发。来，一旦机体免疫力下降，螺旋体又可侵犯体内某些部位而复发。 三、梅三、梅 毒毒 分分 类类 n n 人是梅毒的唯一传染源人是梅毒的唯一传染源 n n 由于感染方式不同可分：由于感染方式不同可分： n n 先天性梅毒：患梅毒的孕妇经胎盘间接传先天性梅毒：患梅毒的孕妇经胎盘间接传 染给胎儿染给胎儿 n n 后天性梅毒：出生后感染的，其中后天性梅毒：出生后感染的，其中95%95%是是 由性交直接感染，少数通过输血感染由性交直接感染，少数通过输血感染 先天性梅毒先天性梅毒 n n 又称胎传梅毒又称胎传梅毒 n n 梅毒螺旋体经胎盘进入胎儿血循环，引起胎儿全梅毒螺旋体经胎盘进入胎儿血循环，引起胎儿全 身感染身感染 n n 螺旋体在胎内儿脏（肝、脾、肺及肾上腺）及组螺旋体在胎内儿脏（肝、脾、肺及肾上腺）及组 织中大量繁殖，造成流产或死胎织中大量繁殖，造成流产或死胎 n n 如胎儿不死则称为梅毒儿，会出皮肤梅毒瘤、骨如胎儿不死则称为梅毒儿，会出皮肤梅毒瘤、骨 膜炎、锯齿形牙、神经性耳聋等症状膜炎、锯齿形牙、神经性耳聋等症状 后天获得性梅毒后天获得性梅毒 n n 表现复杂，依其传染过程可分为三期：表现复杂，依其传染过程可分为三期： n n 一、二期梅毒又统称为早期梅毒，此期传一、二期梅毒又统称为早期梅毒，此期传 染性强而破坏性小染性强而破坏性小 n n 三期梅毒又称为晚期梅毒，该期传染性小三期梅毒又称为晚期梅毒，该期传染性小 ，病程长、破坏性大，病程长、破坏性大 初期梅毒初期梅毒 n n 梅毒螺旋体侵入皮肤粘膜约三周后，在侵入局部梅毒螺旋体侵入皮肤粘膜约三周后，在侵入局部 出现无痛性硬结及溃疡，称硬性下疳出现无痛性硬结及溃疡，称硬性下疳 n n 局部组织镜检可见淋巴细胞及巨噬细胞浸润局部组织镜检可见淋巴细胞及巨噬细胞浸润 n n 下疳多发生于外生殖器，其溃疡渗出物含有大量下疳多发生于外生殖器，其溃疡渗出物含有大量 梅毒螺旋体，传染性极强梅毒螺旋体，传染性极强 n n 下疳常可自然愈合下疳常可自然愈合 n n 约约2 23 3个月无症状的隐伏期后进入第二期个月无症状的隐伏期后进入第二期 二期梅毒二期梅毒 n n 此期的主要表现为全身皮肤粘膜出现梅毒疹，全此期的主要表现为全身皮肤粘膜出现梅毒疹，全 身淋巴结肿大，有时亦累及骨、关节、眼及其他身淋巴结肿大，有时亦累及骨、关节、眼及其他 器官器官 n n 在梅毒疹及淋巴结中有大量螺旋体。不经治疗症在梅毒疹及淋巴结中有大量螺旋体。不经治疗症 状一般可在状一般可在3 3周周3 3个月后自然消退而全愈；部分个月后自然消退而全愈；部分 病例经隐伏病例经隐伏3 31212个月后可再发作个月后可再发作 n n 二期梅毒因治疗不当，经过二期梅毒因治疗不当，经过5 5年或更久的反复发作年或更久的反复发作 ，而进入三期，而进入三期 三期梅毒三期梅毒 n n 主要表现为皮肤粘膜的溃疡性损害或内脏主要表现为皮肤粘膜的溃疡性损害或内脏 器官的肉芽肿样病变（梅毒瘤）器官的肉芽肿样病变（梅毒瘤） n n 严重者在经过严重者在经过10101515年后引起心血管及中年后引起心血管及中 枢神经系统损害，导致动脉瘤、脊髓痨及枢神经系统损害，导致动脉瘤、脊髓痨及 全身麻痹等全身麻痹等 n n 此期的病灶中螺旋体很少，不易检出此期的病灶中螺旋体很少，不易检出 梅毒分类总结梅毒分类总结 n n EarlyEarly（infectiousinfectious）syphilissyphilis n n Time after exposureTime after exposure n n 9-90 days primary9-90 days primary n n 6weeks-6months secondary6weeks-6months secondary n n (4-8weeks after primary lesion)(4-8weeks after primary lesion) n n 2 years (early)Latent 2 years (early)Latent n n Late(non-infectious)syphilisLate(non-infectious)syphilis n n 2 years (late)Latent2 years (late)Latent n n 3-20years Tertiary3-20years Tertiary n n Gummatous Gummatous n n Cardiovascular Cardiovascular n n Neurosyphilis Neurosyphilis n n Congenital syphilisCongenital syphilis n n 2 years since birth early congenital syphilis2 years since birth early congenital syphilis n n (includes stillbirth)(includes stillbirth) n n 2years Late congenital syphilis2years Late congenital syphilis 防治原则防治原则 n n 梅毒是一种性病，预防的主要措施是加强梅毒是一种性病，预防的主要措施是加强 卫生宣传教育和社会管理卫生宣传教育和社会管理 n n 目前尚无疫苗预防目前尚无疫苗预防 n n 对病人应早诊、早治，现多采用青霉素对病人应早诊、早治，现多采用青霉素3 3个个 月月1 1年，以血清中抗体阴转为治愈指标年，以血清中抗体阴转为治愈指标 四、梅毒的实验室诊断四、梅毒的实验室诊断 梅毒检测的应用梅毒检测的应用 n n 临床诊断及筛查临床诊断及筛查 n n 血源筛查血源筛查 n n 出入境人员等的体检出入境人员等的体检 梅毒螺旋体检查梅毒螺旋体检查 n n 1 1暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查 n n 2 2免疫荧光染色免疫荧光染色 n n 3 3活体组织检查梅毒螺旋体，如用银染色活体组织检查梅毒螺旋体，如用银染色 法（法（Warthin-starryWarthin-starry）法或（）法或（LevoaditisLevoaditis法法) ) 或荧光抗体染色或荧光抗体染色 螺旋体的鉴别螺旋体的鉴别 与雅司、地方性梅毒、品他三种非性病性螺旋体鉴别，与雅司、地方性梅毒、品他三种非性病性螺旋体鉴别， 还应与齿大螺旋体、齿小螺旋体、软螺旋体、生殖器螺旋还应与齿大螺旋体、齿小螺旋体、软螺旋体、生殖器螺旋 体相鉴别体相鉴别 n n 1 1雅司、地方性梅毒、品他三种非性病螺旋体：形态上雅司、地方性梅毒、品他三种非性病螺旋体：形态上 不能区别不能区别 n n 2 2齿大螺旋体：为疏螺旋体，比梅毒螺旋体长，存在于齿大螺旋体：为疏螺旋体，比梅毒螺旋体长，存在于 口腔中，尤其在齿缝内最多；口腔中，尤其在齿缝内最多； n n 3 3齿小螺旋体：比梅毒螺旋体短，旋距也短，运动不规齿小螺旋体：比梅毒螺旋体短，旋距也短，运动不规 则，两端较中部略宽。主要见于齿垢中；则，两端较中部略宽。主要见于齿垢中； n n 4 4软螺旋体：为疏螺旋体，螺旋较少，运动不规律且快软螺旋体：为疏螺旋体，螺旋较少，运动不规律且快 ，常不断改变其形态。寄生于皮肤溃疡中。，常不断改变其形态。寄生于皮肤溃疡中。 n n 5 5生殖器螺旋体：比梅毒螺旋体短小，螺旋体大而不规生殖器螺旋体：比梅毒螺旋体短小，螺旋体大而不规 则，生于阴垢内，不经常清洗者检出率较高。则，生于阴垢内，不经常清洗者检出率较高。 n n 6 6其他：与螺旋形网状纤维、纤维蛋白细丝、纤毛、串其他：与螺旋形网状纤维、纤维蛋白细丝、纤毛、串 状红细胞等呈螺旋状的物体相鉴别。状红细胞等呈螺旋状的物体相鉴别。 基因诊断技术检测梅毒螺旋体基因诊断技术检测梅毒螺旋体 n n 梅毒螺旋体不能进行体外培养。检测临床标本中梅毒螺旋体不能进行体外培养。检测临床标本中 梅毒螺旋体最敏感、可靠的方法是兔感染试验（梅毒螺旋体最敏感、可靠的方法是兔感染试验（ RITRIT），），RITRIT能证实活的梅毒螺旋体存在，是检测能证实活的梅毒螺旋体存在，是检测 梅毒螺旋体常用的标准方法梅毒螺旋体常用的标准方法 n n 目前有四套扩增梅毒螺旋体目前有四套扩增梅毒螺旋体DNADNA的系统：扩增的系统：扩增 47KDa47KDa膜抗原基因（膜抗原基因（tpp47tpp47基因），扩增基因），扩增39KDa39KDa碱碱 性膜蛋白基因（性膜蛋白基因（bmpbmp基因），扩增基因），扩增TpF1TpF1蛋白基因蛋白基因 （tpf-1tpf-1）或）或TyF1TyF1蛋白基因（蛋白基因（tyf-1tyf-1）和扩增）和扩增tmpAtmpA基基 因因 梅毒血清试验梅毒血清试验 n n 非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验 ( (非特异性非特异性) ) n n 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验 ( (特异性特异性) ) 非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验 n n 用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，亦用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，亦 称反应素称反应素 n n 敏感性高而特异性较低，且易发生生物学假阳性敏感性高而特异性较低，且易发生生物学假阳性 n n 早期梅毒患者经充分治疗后，反应素可以消失，早期梅毒患者经充分治疗后，反应素可以消失， 早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可 以减少或消失以减少或消失 n n 目前一般作为筛选和定量试验，观察疗效，复发目前一般作为筛选和定量试验，观察疗效，复发 及再感染及再感染 非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验( (早期早期) ) n n 19061906年年WassermannWassermann等首先提出补体结合试验（等首先提出补体结合试验（ 瓦氏反应瓦氏反应) ) n n KahnKahn在在19221922年发明了一种更为简单的康氏试验年发明了一种更为简单的康氏试验 n n 其后又在沉淀反应的基础上发展为絮状反应，如其后又在沉淀反应的基础上发展为絮状反应，如 KlineKline试验试验 n n 三种试验其抗原是采用牛心肌粉酒精浸液提取，三种试验其抗原是采用牛心肌粉酒精浸液提取， 谓之心肌脂抗原谓之心肌脂抗原 n n 类似方法据统计有几十种类似方法据统计有几十种 非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验 n n 1 1性病研究实验室试验（性病研究实验室试验（Venereal Disease Research Venereal Disease Research Laboratory testLaboratory test，VDRLVDRL）；用心磷脂、卵磷脂及胆固醇为）；用心磷脂、卵磷脂及胆固醇为 抗原，抗原， 缺点：抗原每天配制；血清标本加热灭活；结果在缺点：抗原每天配制；血清标本加热灭活；结果在 显微镜下观察显微镜下观察 n n 2 2不加热血清反应素玻片试验（不加热血清反应素玻片试验（Unheated Serum Reagin Unheated Serum Reagin USRUSR）也是）也是VDRLVDRL抗原的改良，敏感性及特异性与抗原的改良，敏感性及特异性与VDRLVDRL相似相似 ，仍需显微镜下观察，仍需显微镜下观察 n n 3 3快速血浆反应素试验（快速血浆反应素试验（Rapid Plasma reagin testRapid Plasma reagin test， RPRRPR ）：是）：是VDRLVDRL抗原的改良，敏感性及特异性与抗原的改良，敏感性及特异性与VDRLVDRL相似，加相似，加 入特制炭粉，可肉眼读出结果入特制炭粉，可肉眼读出结果 n n 4 4甲苯胺红不加热血清试验（甲苯胺红不加热血清试验（Toluidine red untreated Toluidine red untreated serum test , TRUSTserum test , TRUST）：加特制的甲苯胺红，稳定、颗粒均）：加特制的甲苯胺红，稳定、颗粒均 匀，生产批间差小，结果易观察匀，生产批间差小，结果易观察 非梅毒螺旋体抗原血清试验的特点非梅毒螺旋体抗原血清试验的特点 n n 敏感性相似，对敏感性相似，对I I、II II期梅毒有诊断价值，可作期梅毒有诊断价值，可作 筛查和疗效随访筛查和疗效随访 n n 特异性较差，正常人群阳性率达特异性较差，正常人群阳性率达0.1%0.1% n n 敏感性敏感性: :抗心磷脂抗体晚于特异性抗体的出现，抗心磷脂抗体晚于特异性抗体的出现， 晚期可能转阴晚期可能转阴 n n 不适合不适合I I期梅毒早期、期梅毒早期、IIIIII期梅毒，对潜伏梅毒期梅毒，对潜伏梅毒 和神经梅毒也不敏感和神经梅毒也不敏感 n n 阳性时应结合病史、临床症状综合判断，并用阳性时应结合病史、临床症状综合判断，并用 梅毒螺旋体试剂盒确证梅毒螺旋体试剂盒确证 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验 n n 用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗 原测定抗螺旋体抗体原测定抗螺旋体抗体 n n 敏感性和特异性均高，一般用作确证试验敏感性和特异性均高，一般用作确证试验 n n 检测血清中抗梅毒螺旋体检测血清中抗梅毒螺旋体IgGIgG抗体，即使患抗体，即使患 者经过足够治疗，仍能长期存在，甚至终者经过足够治疗，仍能长期存在，甚至终 身不消失，血清反应仍持续存在阳性，不身不消失，血清反应仍持续存在阳性，不 能用于观察疗效能用于观察疗效 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验 n n TPI TPI 梅毒螺旋体制动试验（梅毒螺旋体制动试验（19491949） n n TPA TPA 梅毒螺旋体凝集试验（梅毒螺旋体凝集试验（19531953） n n TPIA TPIA 梅毒螺旋体免疫吸附试验（梅毒螺旋体免疫吸附试验（19531953） n n TPCP TPCP 梅毒螺旋体补体结合试验（梅毒螺旋体补体结合试验（19531953） n n TPMB TPMB 梅毒螺旋体甲基兰试验（梅毒螺旋体甲基兰试验（19561956） n n WTPCP WTPCP 梅毒螺旋体（全部）补体结合试验（梅毒螺旋体（全部）补体结合试验（19571957） n n RFCFR RiterRFCFR Riter蛋白补体结合试验（蛋白补体结合试验（19571957） n n TWR TWR 螺旋体瓦色曼反应试验（螺旋体瓦色曼反应试验（19571957） n n FTA-200 FTA-200 荧光螺旋体抗体试验荧光螺旋体抗体试验200200（19601960） n n FTA-ABS FTA-ABS 荧光螺旋体抗体吸收试验（荧光螺旋体抗体吸收试验（19641964） n n TPHA TPHA 梅毒螺旋体血凝集试验（梅毒螺旋体血凝集试验（19661966） n n TPPA TPPA 梅毒螺旋体明胶凝集试验梅毒螺旋体明胶凝集试验 n n 19S-IgM-TPHA 19S-IgM19S-IgM-TPHA 19S-IgM梅毒螺旋体血凝试验梅毒螺旋体血凝试验 n n IgM-SPHA IgMIgM-SPHA IgM固相血凝试验固相血凝试验 n n TP-IgM-HA TP-IgM-HA 梅毒螺旋体梅毒螺旋体IgMIgM血凝试验血凝试验 n n IgM-Cap-ELISA IgM-Cap-ELISA 梅毒螺旋体梅毒螺旋体IgMIgM抗体捕捉酶联免疫吸附试验抗体捕捉酶联免疫吸附试验 n n 19S-IgM-FTA-ABS 19S-IgM19S-IgM-FTA-ABS 19S-IgM荧光螺旋体抗体吸收试验荧光螺旋体抗体吸收试验 梅毒螺旋体制动试验梅毒螺旋体制动试验 n n 梅毒螺旋体制动试验（梅毒螺旋体制动试验（Treponema Treponema Pallidum immobilization Pallidum immobilization ，TPITPI）；用）；用 NicholNichol株螺旋体（活的）加病人血清（含株螺旋体（活的）加病人血清（含 抗体）后，在补体的参与下可抑制螺旋抗体）后，在补体的参与下可抑制螺旋 体的活动。如体的活动。如 50%50%梅毒螺旋体停止活动梅毒螺旋体停止活动 ，则为阳性。此试验特异性、敏感性均，则为阳性。此试验特异性、敏感性均 高，但设备要求高，操作难，仅供研究高，但设备要求高，操作难，仅供研究 用用 目前常用的梅毒螺旋体抗原血清试验目前常用的梅毒螺旋体抗原血清试验 n n 1 1荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（ fluorescent treponema antibody fluorescent treponema antibody absorption absorption ，FTA-ABS TestFTA-ABS Test） 2 2梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（ T.pallidum particle agglutination T.pallidum particle agglutination ，TPPATPPA ） n n 3 3梅毒螺旋体酶联免疫试验梅毒螺旋体酶联免疫试验 (Treponema Pallidum ELISA)(Treponema Pallidum ELISA) FTA-ABSFTA-ABS n n 间接荧光抗体技术间接荧光抗体技术 n n 较敏感和较特异的试验，公认为金标准较敏感和较特异的试验，公认为金标准 n n 梅毒螺旋体梅毒螺旋体NicholsNichols株作抗原，株作抗原，ReiterReiter株进株进 行吸收行吸收 n n FITCFITC标记的抗人抗体标记的抗人抗体 n n 步骤多，对照多，结果判定需要经验步骤多，对照多，结果判定需要经验 TPPATPPA n n 敏感性和特异性均高，操作简便敏感性和特异性均高，操作简便 n n TPPATPPA取代取代TPHATPHA n n 明胶颗粒取代红细胞用于抗原的致敏，明胶颗粒取代红细胞用于抗原的致敏， 不需要吸收过程不需要吸收过程 n n 非特异性凝集少非特异性凝集少 n n 对板、枪头要求较高对板、枪头要求较高 TP-ELISATP-ELISA n n 抗原采用超声破碎的螺旋体抗原或重组抗抗原采用超声破碎的螺旋体抗原或重组抗 原原 n n 检测检测IgMIgM或或IgGIgG n n 敏感性和特异性与其他试剂基本一致敏感性和特异性与其他试剂基本一致 n n 应作进一步评价应作进一步评价 重组梅毒螺旋体抗原重组梅毒螺旋体抗原 n n 目前已重组的目前已重组的TPTP抗原有近抗原有近2020多种，如多种，如TpN15TpN15、TpN17TpN17、 TpN19TpN19、TpN29TpN293535（TpDTpD）、）、TpN44.5TpN44.5（TmP aTmP a）、）、 TpN47TpN47、TpN35(Tmp c) TpN35(Tmp c) n n TP15kDTP15kD抗原抗原 ：15kD15kD蛋白是一种脂蛋白，首先由蛋白是一种脂蛋白，首先由HenselHensel等等 19851985年分离鉴定，它在年分离鉴定，它在TPTP膜蛋白中的含量相对较少，但膜蛋白中的含量相对较少，但 在免疫印迹试验中与人梅毒血清间显示了超强的反应性在免疫印迹试验中与人梅毒血清间显示了超强的反应性 n n TmP ATmP A：TmP aTmP a是一个分子量为是一个分子量为42kD42kD的的TPTP膜蛋白膜蛋白 ，血清，血清 学诊断中的意义学诊断中的意义 ：一期梅毒：一期梅毒76%76%、二期梅毒、二期梅毒100%100%、早期、早期 稳性梅毒稳性梅毒98% 98% n n TP47kDTP47kD抗原：该蛋白为抗原：该蛋白为TPTP整合性膜蛋白抗原，整合性膜蛋白抗原，19861986年年 NorgardNorgard等等1212在大肠杆菌中首先克隆及表达了重组在大肠杆菌中首先克隆及表达了重组47kD47kD 抗原。多中心研究发现抗原。多中心研究发现1313，此蛋白有很强的免疫原性，此蛋白有很强的免疫原性， 在在TPTP中含量非常丰富，且为致病菌特有的蛋白中含量非常丰富，且为致病菌特有的蛋白 梅毒血清假阳性反应梅毒血清假阳性反应 n n 技术性假阳性反应：如实验室操作错误，标本技术性假阳性反应：如实验室操作错误，标本 溶血等，如重复试验，无梅毒患者血清试验成溶血等，如重复试验，无梅毒患者血清试验成 为阴性。为阴性。 n n 生物学假阳性反应：因非螺旋体抗原血清试验生物学假阳性反应：因非螺旋体抗原血清试验 是非特异性的，在其它一些疾病，尤以感染性是非特异性的，在其它一些疾病，尤以感染性 疾病，也可释放心拟脂至血液中，产生反应素疾病，也可释放心拟脂至血液中，产生反应素 ，如麻风、麻疹、疟疾、传染性肝炎、病毒性，如麻风、麻疹、疟疾、传染性肝炎、病毒性 肺炎、传染性单核细胞增多症，系统性红斑狼肺炎、传染性单核细胞增多症，系统性红斑狼 疮，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出现阳性，疮，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出现阳性， 但这类患者血清反应滴度低，很少超过但这类患者血清反应滴度低，很少超过1 1：8 8。 而且半年内渐转成阴性。另外可用特异性的梅而且半年内渐转成阴性。另外可用特异性的梅 毒血清反应证实。如用毒血清反应证实。如用FTAFTAABSABS试验试验 梅毒血清假阳性反应的原因梅毒血清假阳性反应的原因 Disease or condition Nontreponemal Treponemal Disease or condition Nontreponemal Treponemal n n Autoimmune disease Yes Yes Autoimmune disease Yes Yes n n Malaria Yes No Malaria Yes No n n Recent immunizations Yes No Recent immunizations Yes No n n Dermatologic diseases Yes Yes Dermatologic diseases Yes Yes n n Cardiovascular disease Yes Yes Cardiovascular disease Yes Yes n n Tuberculosis Yes No Tuberculosis Yes No n n Leprosy Yes Yes Leprosy Yes Yes n n Intravenous drug abuse Yes No Intravenous drug abuse Yes No n n Viral infection Yes No Viral infection Yes No n n Febrile illness Yes Yes Febrile illness Yes Yes n n Pregnancy Yes No Pregnancy Yes No n n HIV Yes No HIV Yes No n n Other STD Yes No Other STD Yes No n n Age No Yes Age No Yes n n Multiple blood transfusions Yes No Multiple blood transfusions Yes No n n Lyme disease No Yes Lyme disease No Yes n n Endemic treponematoses Yes Yes Endemic treponematoses Yes Yes n n Transient unknown cause Yes Yes Transient unknown cause Yes Yes n n Technical errors Yes Yes Technical errors Yes Yes 梅毒感染及检测梅毒感染及检测 血清学检测的几个特点血清学检测的几个特点 n n 在最初的两周可能是阴性结果在最初的两周可能是阴性结果 n n FTAFTA、TPPATPPA和和ELISAELISA在所有阶段都最敏感在所有阶段都最敏感 n n VDRLVDRL和和RPRRPR在三期梅毒期可能为阴性在三期梅毒期可能为阴性 n n VDRL-CSFVDRL-CSF仅用于诊断神经性梅毒仅用于诊断神经性梅毒 梅毒血清试验结果判断梅毒血清试验结果判断 n n RPR/TRUST TPHA FTA-ABS TPPA RPR/TRUST TPHA FTA-ABS TPPA 反应结果判断反应结果判断 n n n n 阴性阴性 阴性阴性 阴性阴性 阴性阴性 排除梅毒感染初期，尚未产生任何排除梅毒感染初期，尚未产生任何 抗体；抗体； AIDSAIDS病人合并感染梅毒病人合并感染梅毒 n n 阴性阴性 阴性阴性 阳性阳性 阳性阳性 既往患梅毒，对既往患梅毒，对FTA-ABSFTA-ABS及及TPPATPPA非非 特异性反应特异性反应 n n 阳性阳性 阴性阴性 阴性阴性 阴性阴性 生物性假阳性生物性假阳性(BFP)(BFP)，可疑早期梅毒，可疑早期梅毒 n n 阳性阳性 阴性阴性 阳性阳性 阳性阳性 早期梅毒，陈旧性梅毒早期梅毒，陈旧性梅毒 n n 阴性阴性 阳性阳性 阴性阴性 阴性阴性 梅毒治愈，对梅毒治愈，对TPHATPHA非特异性反应非特异性反应 n n 阴性阴性 阳性阳性 阳性阳性 阳性阳性 先天梅毒，梅毒治愈，其它螺旋体感染先天梅毒，梅毒治愈，其它螺旋体感染 n n 阳性阳性 阳性阳性 阴性阴性 阳性阳性 可疑既往患梅毒，梅毒螺旋体抗体消失可疑既往患梅毒，梅毒螺旋体抗体消失 n n 阳性阳性 阳性阳性 阳性阳性 阳性阳性 梅毒梅毒( (治愈或未治愈治愈或未治愈) ) 假阳性反应假阳性反应 n n 确无性接触史、性病史、流产史、梅毒病征确无性接触史、性病史、流产史、梅毒病征( (如鞍鼻、胡金森如