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文档简介

,专题2 细胞工程,现代生物科技专题,细胞工程,植物细胞工程的理论基础是什么?通常采用的技术手段有哪些?, 植物细胞工程,一 植物细胞工程的基本技术,所采用技术的理论基础,植物细胞工程,通常采用的技术手段,植物组织培养,植物体细胞杂交,植物细胞的全能性,一、植物组织培养的基本原理,植物细胞的全能性,原因:,表现的条件:,在植物体中未表现的原因:,每个细胞都含有本物种的全部遗传信息,都具有发育成一个完整个体的潜能。,离体 无菌、无毒的环境 适宜的培养基(营养物质和植物激素) 适宜的环境条件(温度等),在个体发育过程中,基因在特定的时空条件下选择性表达的结果。,1、有关全能性的表述中,不正确的是( ) 受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完 整个体,因此全能性最高 生物体内细胞由于分化全能性不能表达 卵细胞和受精卵一样,细胞未分化,全能 性很高 植物细胞离体培养在一定条件下能表现出 全能性,自我评价,c,2、在一个生物体内,细胞没有表现出全能性,原因是( ) 细胞失去了全能性 细胞中的基因部分丢失 细胞中的基因选择性表达 细胞中的基因变异不同,c,、植物组织培养的概念,(一)植物组织培养技术,、植物组织培养的过程,3、自我评价,在无菌和人工控制的条件下,将离体的植物器官、组织、细胞,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。,脱分化,再分化,过程,(分化),(未分化),(分化),幼芽或幼根?,条件?,优点?,特点?,繁殖速度快 不受季节限制 幼苗无毒 保持优良性状,适宜温度、无光照、 ph和无菌环境。 无机、有机成分和植物激素(生长素,细胞分裂素和赤霉素),无定形状态 薄壁细胞 高度液泡化 排列疏松、无规则,分化程度低去分化较易,离体的植物器官、组织或细胞,愈伤组织,自我评价,1、关于愈伤组织形成过程的正确叙述是( ) a、愈伤组织的形成是离体植物细胞分化的结果 b、愈伤组织的形成是离体植物细胞分裂的结果 c 、愈伤组织的形成是离体动物细胞分化的结果 d 、愈伤组织的形成是离体植物细胞脱分化的结果,d,2 、植物组织培养形成的愈伤组织进行培养, 又可以分化形成根、芽等器官,这一过程称为( ),c,(一) 植物繁殖的新途径,1.微型繁殖 微型繁殖技术:快速繁殖优良品种的植物组织培养技术。,二 植物细胞工程的实际应用,特点:保持优良品种的遗传特性; 高效快速地实现种苗的大量繁殖。,(1)材料:无病毒的茎尖。 (2)脱毒苗:切取茎尖进行组织培养获得。,2.作物脱毒,3.神奇的人工种子,(1)技术:植物组织培养。 (2)结构:人工薄膜胚状体或不定芽或顶芽或腋芽。,(3)特点: 保持亲本优良性状; 不受气候,季节和地域限制。,(二) 作物新品种的培育,1.单倍体育种 (1)方法:花药离体培养。 (2)优点: 后代稳定遗传,都是纯合体; 明显缩短育种年限。,2.突变体的利用 (1)产生:植物组织培养; (2)利用:筛选对人们有利突变体,进而培育新品种。,(三) 细胞产物的工厂化生产,1.种类:蛋白质,脂肪,糖类,药物,香料,生物碱等。 2.技术:植物的组织培养。,植物体细胞杂交,1你认为两个来自不同植物的体细胞完成融合,遇到的第一个障碍是什么? 2怎么样去解决这个障碍呢? 3两个原生质体能发生融合,这与细胞膜的什么特性有关?,杂种植株,融合的原生质体ab,再生出细胞壁,脱分化,愈伤组织,再分化,植物体细胞杂交的过程,植物细胞的融合,植物组织培养,植物细胞a,原生质体b,原生质体a,杂种细胞ab,去 壁,去 壁,人 工 诱 导,方法?,促进融合的方法?,融合完成的 标志,植物细胞b,实例 番茄-马铃薯,在克服远源杂交不亲和的障碍、培育作物新品种方面所取得的重大突破。,意义:,未解决的问题:未能让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性状。,原理:植物细胞的全能性和细胞膜的流动性,白菜,甘蓝,2.利用多倍体育种能获得这种白菜-甘蓝吗?怎样获得?,2n=14,2n=14,1.植物体细胞杂交得到的白菜甘蓝是几倍体、几个染色体组、多少染色体,是否可育?,是四倍体、四个染色体组、28条染色体、可育,能,先让两者进行有性杂交,对杂交所得种子在萌发成幼苗时,用秋水仙素处理,使其染色体加倍,恢复育性。,思考:,1下列属于组织培养的是 ( ) a花粉培育成单倍体植株 b芽发育成枝条 c根尖分生区发育成成熟区 d未受精的卵细胞发育成个体,a,2.植物体细胞杂交的过程实质是( ) a、细胞质融合的过程 b、细胞核融合的过程 c、细胞膜融合的过程 d、细胞原生质体融合的过程,d,3.在植物细胞工程中,当原生质体融合成一个细胞后,需 要诱导产生细胞壁,参与这一过程的细胞器( ) a、叶绿体、高尔基体 b、线粒体、高尔基体 c、叶绿体、线粒体 d、线粒体、内质网,b,4.用杂合种子尽快获得纯合子植株的方法是( ) a、种植f1选出不分离者纯合子 b、种植秋水仙素处理纯合子 c、种植生长素处理纯合子 d、种植花药离体培养单倍体幼苗秋水仙素处理纯合子,d,5.下面关于植物细胞工程的叙述,正确的是(多选) ( ) a叶肉细胞脱分化后可形成具有分裂能力的薄壁细胞b叶肉细胞经再分化过程可形成愈伤组织 c融合植物叶肉细胞时,应先去掉细胞膜 d叶肉细胞离体培养时,可以表现出全能性,ad,6.下图为植物体细胞杂交过程示意图,据图回答:,步骤是去掉 ,使植物细胞成为 ,最 常用的方法是 。 步骤一般常用的化学试剂是 , 目的是 。 在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中,运用的 技术手段是 ,其中步骤相当于 , 步骤相当于 。,细胞壁,原生质体,酶解法,聚乙二醇,诱导原生质体融合,组织培养,脱分化,再分化,植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株,使两株 植物的性状能够在新的植物体上有所表现,其根本原因 是 。 从理论上讲,杂种植株的育性为 。若运用传 统有性杂交方法能否实现? 因此,这 项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于 。 利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种的过程中, 遗传物质的传递是否遵循孟德尔的遗传规律?为什么?,杂种细胞具有两个亲本的遗传物质,可育,不能,克服远缘杂交不亲和的障碍,不遵循,植物体细胞杂交属于无性生殖。,7.基因型为aabb的水稻(24条染色体)的花药通过无菌操 作,接入试管后,在一定条件下培养形成试管苗。 愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团 愈伤组织形成中,必须从培养基中获得 和小分 子有机物等营养物质。 要促进花粉细胞分裂生长,培养基中应有 和 两类激素。 组织培养技术不能直接用于( ) a、快速繁殖 b、培育无病毒植株 c、植物产品的工厂化生产 d、培养抗病菌植株 用组织培养技术繁殖植物体时,不可能发生的是 ( ) a、基因重组 b、基因突变 c、染色体变异 d、染色体分离,水、无机盐,细胞分裂素,生长素,d,a,试管苗的细胞核中含有 个dna分子。 培养成的试管苗可能出现的基因型有 。 如果要获得育种需要的植株,并能繁殖新品种,后面的 育种步骤是 。,12,ab ab ab ab,用一定浓度的秋水仙素处理组织 培养获得的幼苗,8.下面所列过程是植物组织培养的简略过程。请据此回答: 脱分化再分化 表示 ,它能被培养成的根本原因是 。 表示 ,它的细胞特点是 ,它的颜色特点是 。 若想制造人工种子,应选择(写编号) 。,外植体,植物细胞全能性,愈伤组织,细胞排列疏松,高度液泡化无定形状态,色浅,若是花药,则是 ,这项技术可用 在 上。,单倍体植株,单倍体育种,9.下图为植物细胞融合及组织培养过程示意图。下列说法 不正确的是( ),a植物体细胞杂交的最大优点是可以克服远缘杂交不亲 和的障碍 b杂种细胞经过和过程可以培育成杂种植株,说明 杂种细胞具有全能性 c尽管愈伤组织可以进行光合作用,但其培养基中仍需 要糖类、氨基酸等有机营养 d若a的基因型为rr,b的基因型为yy,则最终形成的杂 种植株的基因型为rryy,c,二 、动物细胞工程 (第二课时),动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体,胚胎移植,核移植,读下面一段文字资料,思考以下问题:,长期以来,为了获得抗体,采用的是把某种抗原反复注射到动物体内,然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体,不仅产量低,而且抗体的特异性差,纯度低,反应不够灵敏。人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的b细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每个b细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体,必须用单个b细胞进行无性繁殖,即克隆。,1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念,2、怎样才能获得单克隆抗体?,提示1:仅用细胞培养技术可行吗?,提示2:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?,提示3:有什么方法能使b细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢?,用单个b细胞进行克隆,得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体,这种抗体就叫做单克隆抗体。,五、动物细胞培养,从动物机体中取出相关的 ,将它分散成 ,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞 。,1概念:,动物胚胎或 幼龄动物的组织、器官 如:肾、肺等 细胞生命力旺盛,分裂能力强,原理:细胞增殖,使细胞和培养液充分接触,组织,单个细胞,生长和增殖,2、过程:,取什么样的组织?,如何将组织分散成单个细胞?,如何制备细胞悬液?,什么叫原代培养?,什么叫传代细胞培养? 如何进行传代培养?,什么是细胞贴壁现象? 什么是细胞接触抑制,取幼龄组织或器官 如:肾脏 肌肉,用胰蛋白酶处理,加入细胞培养液,细胞贴壁:培养过程中,细胞贴附在瓶壁上的现象。 要求:培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒,细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止,数量不再增加。,原代培养:从机体取出后立即培养的细胞。 10代以内,用胰蛋白酶分散成单个细胞,传代培养:分瓶后的培养,从10代培养到4050代细胞,2、过程,取 的组织、器官,细胞悬浮液,酶,贴满瓶壁的细胞,单个细胞,加入 液,动物胚胎或幼龄动物,胰蛋白,培养,接触抑制,原代 培养,1-10代细胞,4050代细胞(细胞株),传代培养,无限传代(细胞系),用 处理,胰蛋白酶,遗传物质不变,遗传物质改变, 能无限增殖(癌变),注意,3、条件:,1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和ph 4、气体环境:,(添加一定量的抗生素,定期更换培养液),补充合成培养基中缺乏的物质,36.5 +0.5度 ;ph为7.2-7.4。,o2作用:进行 呼吸,提供能量 co2作用:维持培养液的ph值 (95%空气和5% co2 ),(葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。),有氧,(1)生产蛋白质生物制品:病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体等。 (2)获得大量自身的皮肤细胞,用于植皮。 (3)用于检测有毒物质 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据,4、应用,实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理:b淋巴细胞能产生抗体,骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。 实验材料:小白鼠 实验器材:培养皿、针筒等等。 实验过程:如下页,根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案:,单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,(1)为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与b淋巴细胞融合?,(小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖, b淋巴细胞能够产生抗体, 细胞的同源性越近,融合形成的杂种细胞越易成活。,(2)骨髓瘤细胞是癌细胞吗?,有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞, 具有转移能力的肿瘤细胞,称为癌细胞, 所以说,瘤细胞不能等于癌细胞。,(3)整个制备过程为何要经过两次筛选?,(第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种), 第二次需先在多孔培养板上,在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养,然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的,所以产生的抗体必然是化学性质单一的,特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义,只不过克隆的不是b淋巴细胞,而是杂交瘤细胞。),胚胎移植技术,试管动物(婴儿)培养过程,受精卵,核移植技术,克隆羊培育过程,另一头绵羊的子宫,植物组织培养和动物细胞培养的比较,细胞全能性,细胞增殖,固体 营养物质 植物激素,液体 营养物质 动物血清,培养成植株,培养成 细胞株 细胞系,快速繁殖 培养无病毒植株,获得细胞产品、细胞,植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较,细胞膜 流动性,去壁 原生质体 融合,细胞分散 细胞融合,物理 化学,物理 化学 失活病毒,克服远缘杂交不亲合,制备单克隆抗体,1下图是单克

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