心痛宁冲剂醇提工艺研究.doc

心痛宁冲剂醇提工艺研究更新日期：2010-12-22 点击： 张会宗李成森张迎春王淑清董菁菁 提要采用L9(34)正交试验设计，以延胡索乙素和熊果酸含量作为考核指标，对心痛宁冲剂的醇提工艺进行了研究。结果表明：以60%乙醇冷浸24 h，第1次3倍量、3 h，第2次2倍量、2 h，提取2次为最佳提取工艺。 关键词心痛宁冲剂；正交试验；延胡索乙素；熊果酸 The Alcohol-Extraction Technology Study of Xin Tong Ning Infusion Zhang Huizong, Li Chengsen, Zhang Yingchun, et al Liaoning Insitute of TCM, Shenyang 110034 AbstractUsing L9(34) orthogonal test method and selecting the contents of dl-Tetrahydropalmatine and ursolic acid as indexes, we performed the investigation of alcohol-extraction technology for Xin Tong Ning. As a result, soaking the drugs in cold 60% EtOH for 24h, the best condition for alcohol-extraction is that first using 3 times alcohol for 3h, second adding 2 times alcohol for 2h. Key wordsXin Tong Ning infusion;Orthogonal test;Dl-Tetrahydopalmatine;Ursolic acid 心痛宁冲剂为治疗冠心病、心绞痛的国家三类中药制剂，具有活血祛瘀、行气止痛、舒通心脉等功效。该方主药由丹参、山楂、延胡索、银杏叶等10余味中药组成。根据药材的药理作用及活性成分的理化性质，将提取工艺分为水提、醇提、提油三部分，并对所提挥发油进行了环糊精包合。本文以延胡索乙素和熊果酸的含量作为醇提考察指标，对心痛宁的醇提工艺进行了研究。 1仪器与试药 UV-260型分光光度计(日本岛津)，微量进样器；所用药材购于辽宁省药材公司，经鉴定符合中国药典1995年版1部项下有关规定。硅胶G(青岛海洋化工厂)，熊果酸、延胡索乙素对照品由中国药品生物制品检定所提供；化学试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1醇提依据：药材中丹参含有多种脂溶性丹参酮类及丹参素、丹参醇等水溶性成分；山楂中除含有大量黄酮类及有机酸类成分外，山楂核中尚含有大量脂溶性成分1，采用醇提方法，既可使生物碱、黄酮类等成分溶出，又可使脂溶性成分尽可能提取完全。本文考察了乙醇浓度、溶媒倍量、提取时间3个因素，每个因素又3个水平对工艺的影响。具体因素、水平见表1。 表1实验因素水平表 水平 因素 A 醇提时间 (h) B 乙醇浓度 (%) C 乙醇用量 (倍) 1 3.02.0 70 4.01.5 2 3.51.5 60 3.02.0 3 2.01.5 50 2.01.5 2.2样品溶液的制备：按照处方配伍比例，称取延胡索31 g，丹参31 g，山楂30 g，银杏叶21 g适当粉碎，置回流提取器中，按表1选择的因素水平及表2的实验安排回流提取，提取液滤过，合并，浓缩并定量转移至500 ml量瓶中，加同浓度乙醇定容，摇匀备用。取定容后各提取液100 ml，挥散乙醇浓缩至约20 ml，用乙醚萃取3次(20、15、15 ml)。合并醚液，挥散乙醚至20 ml，用1%氢氧化钠溶液提取3次(15、10、10 ml)，合并碱液，乙醚液备用(A)。碱提取液加稀盐酸调pH值12，用乙醚提取4次(20、20、15、15 ml)，合并乙醚液，蒸干，残渣用无水乙醇溶解并定容至5 ml，摇匀备用(B)。 2.3样品溶液含量测定 2.3.1延胡索乙素含量测定2：精密吸取2.2项下乙醚液(A)各1 ml，加无水乙醇定容至15 ml，摇匀，照紫外分光光度法(中国药典，1995年版1部附录VA)实验，用无水乙醇作空白对照，在(2801)nm波长处测定吸收度，按回归方程计算含量。另取延胡索乙素对照品，以无水乙醇配制成5 mg/ml的对照品溶液，精密吸取0.0、9.0、15.0、21.0、27.0、33.0 l分别加乙醇定容至5 ml，摇匀，以无水乙醇作空白，于(2801)nm波长处测定吸收度，得回归方程为 C=74.510 A6.5965，相关系数 =0.9996。 2.3.2熊果酸含量测定：精密吸取2.2项下(B)供试品溶液20 l，照薄层色谱法(中国药典1995年版1部附录VIB)试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇(200.5)为展开剂上行展开，取出，晾干。用碘蒸气显色定位，刮取与对照品对应位置的供试品色斑于10 ml试管中，并刮取与供试品同位置、等面积硅胶作空白，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2 ml、高氯酸0.8 ml混匀，于60水浴加热10 min。冷却至室温，各加冰醋酸4 ml，摇匀，离心，吸取上清液在(5461)nm波长处测定吸收度，按回归方程计算含量。另精密吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，分置具塞试管中，挥去溶剂，按文献3法操作，于(5461)nm波长处测定吸收度，得回归方程为 C=5.9579 A0.6389，相关系数 =0.9985。 2.3.3正交试验及结果：根据药材活性成分的理化性质，采用回流提取方式，按选用L9(34)正交试验表安排实验，以熊果酸和延胡索乙素为考察指标，按2.3项下方法测定含量，结果见表2和表3。 表2L9(34)正交试验及结果( n=3) 试验号 A B C D 含量测定平均值(%) 熊果酸含量 延胡索乙素含量 1 1 1 1 1 0.0669 0.0457 2 1 2 2 2 0.0696 0.0476 3 1 3 3 3 0.0193 0.0366 4 2 1 2 3 0.0664 0.0432 5 2 2 3 1 0.0398 0.0405 6 2 3 1 2 0.0479 0.0417 7 3 1 3 2 0.0123 0.0146 8 3 2 1 3 0.0366 0.0374 9 3 3 2 1 0.0375 0.0376 表3极差分析表 试验号 熊果酸() 延胡索乙素() A B C D A B C D j 0.1558 0.1456 0.1514 0.1442 0.1299 0.1035 0.1248 0.1238 j 0.1541 0.1460 0.1735 0.1298 0.1254 0.1255 0.1284 0.1039 j 0.0864 0.1047 0.0714 0.1223 0.0896 0.1159 0.0917 0.1172 0.0519 0.0485 0.0505 0.0481 0.0433 0.0345 0.0416 0.0413 0.0514 0.0487 0.0578 0.0433 0.0418 0.0418 0.0428 0.0346 0.0288 0.0349 0.0238