P120ctn在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义.doc

P120ctn在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义 作者：吴颖，刘文励，孙汉英，徐惠珍【摘要】 为了探讨连环蛋白P120（P120 catenin，P120ctn）在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的表达及意义，采用免疫组织化学染色的方法对比分析了40例NHL和10例反应性增生（RH）淋巴结的外科活检石蜡包埋组织切片中P120ctn的表达情况。结果显示，在反应性增生淋巴结组织中未检测到P120ctn的表达；而在NHL中P120ctn的阳性检出率为55% (22/40)，其中低度恶性及中高度恶性NHL组中的阳性检出率分别为16.7(2/12)、71.4(20/28)，两组之间比较存在显著性差异( P0.001 )。另外，在肿瘤血管内皮细胞上也发现了p120ctn的阳性表达。结论：P120ctn的表达与NHL的恶性程度密切相关，提示P120ctn在淋巴瘤的恶性增殖过程中可能发挥着重要作用，这对淋巴瘤的诊断和治疗可能具有一定的意义。 【关键词】 非霍奇金淋巴瘤Expression of P120ctn in Non-Hodgkins Lymphoma and ItsSignificanceAbstract To evaluate the expression of P120ctn in non-Hodgkins lymphoma (NHL) and to explore its clinical significance，immunohistochemistry stain method was applied to comparatively investigate the protein expression of P120ctn in paraffin-embedded lymph node tissue slices from 40 cases of NHL and 10 cases of reactive hyperplasia of lymph node. The results showed that P120ctn was not detected in reactive hyperplasia of lymph node，but was detected in 55%(22/40) cases of NHL. P120ctn expression increased with the tumor malignancy of NHL，there was a significant difference between the expression rates of P120ctn in low grade(16.7%，2/12) and intermediate to high grade malignant (71.4%，20/28) NHL (P<0.001). Moreover，P120ctn was also detected in vascular endothelial cells of NHL. It is concluded that the level of P120ctn expression is closely related to the malignant grade of NHL，it suggests that P120ctn possibly plays an important role in the malignant proliferation of lymphoma with a certain significance in diagnosis and therapy of lymphoma.Key words non-Hodgkins lymphoma; P120ctn; immunohistochemistry连环蛋白（catenin）是一组细胞内糖蛋白，包括、和P120 4大类。它们的分子中均具有重复的armadillo样结构，并通过这个结构与钙粘蛋白的胞内段结合，形成钙粘蛋白连环蛋白复合体（cadherin-catenin complex，CCC），CCC对维持细胞的正常信号转导和粘附功能是必需的。当细胞发生癌变时，这些分子在细胞内的表达和分布发生异常，即发生转位1。 P120ctn是新近发现的连环蛋白成员，它的一端与E-cadherin的胞内段近膜区结合，而另一端可能与Kaiso转录因子结合，对基因转录起调控作用2，但是两者在基因转录中的详细作用机制未明。P120ctn对E-cadherin 介导的细胞内信号转导和细胞黏附起调节作用3，4，这些信号分子与肿瘤的发生、发展及转移有密切的关系。我们采用免疫组织化学SP法研究了P120ctn在NHL淋巴结病理组织中的表达情况，并以反应性增生淋巴结作为对照，初步探讨P120ctn在NHL中的可能作用及意义。材料和方法标本采集收集2001年9月-2005年3月同济医院病理科的NHL存档蜡块共40例，所有标本经常规染色和免疫表型研究后确诊，其中男18例，女22例，年龄12-68岁，中位年龄42岁。根据2000年淋巴组织肿瘤WHO分类标准及分类中各类型侵袭性划分标准进行病理分型，其中低度恶性组12例为惰性淋巴瘤，中高度恶性组28例为侵袭性淋巴瘤。免疫组织化学证实25例为B细胞性NHL，15例为T细胞性NHL。另取同期保存的10例反应性增生淋巴结作为对照。P120ctn蛋白的免疫组织化学染色石蜡包埋组织连续切片，厚3-5 m。采用链霉素抗生物素蛋白过氧化酶SP法，一抗为鼠抗人P120ctn单克隆抗体（Santa Cruz公司），工作浓度为120，SP试剂盒及DAB显色剂均购于北京中山生物技术有限公司。切片脱蜡至水；微波煮沸抗原修复2次各5分钟；3% H2O2甲醇溶液阻断内源性过氧化物酶，37孵育30分钟；非免疫动物血清室温封闭30分钟；滴加一抗，4过夜；滴加二抗，37 孵育30分钟；滴加酶结合物，37孵育30分钟，DAB显色，苏木素复染、分化、促蓝、透明、封片。将已知阳性的乳腺癌切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗，作为阴性对照。免疫着色评估P120ctn蛋白阳性染色定位于胞浆，可伴有胞核着色。每张切片选取5个有代表性的高倍镜视野（400），每个视野随机计数300个肿瘤细胞，计算1 500个肿瘤细胞中P120ctn阳性细胞百分率，对滤泡性淋巴瘤只计数滤泡内肿瘤细胞，按阳性细胞百分率分为：<5%为阴性，5%为阳性。统计学分析运用SPSS 11.5统计分析软件进行2检验，检验水准设为0.001。结果良性淋巴结组织中P120ctn的表达情况在反应性增生淋巴结组织中，P120ctn的阳性检出率为0（0/10）（图1）。NHL肿瘤细胞中P120ctn的表达情况及与临床病理特征的关系在NHL病理组织标本中，淋巴结的正常结构被破坏，P120ctn主要在肿瘤细胞中表达，阳性染色定位于胞浆，可伴有胞核着色（图2）。在肿瘤血管内皮细胞上也出现了P120ctn的阳性表达（图3）。P120ctn在NHL中的阳性检出率为55（22/40），随着NHL恶性程度的增加，P120ctn的表达水平增高，在低度恶性组中的阳性表达率（16.7%，2/12）明显低于中高度恶性组的阳性表达率(71.4，20/28)，两组之间比较有显著性差异(P0.001 )。不同免疫分型(细胞性和细胞性)、首发部位(结内和结外)、性别及年龄之间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，见附表。Table . Expression of P120ctn in NHL and the relation with clinical pathological feature（略）讨 论P120ctn最初是作为src癌蛋白的底物而被发现的，现被认为是一种与癌细胞侵润和转移有关的连环蛋白。已证明连环蛋白是细胞信号转导分子和黏附分子，参与由上皮型钙黏着蛋白（E-cadherin）介导的细胞内信号转导，在细胞黏附、增殖和细胞运动过程中起重要作用。在细胞内，4种连环蛋白（、和P120）均能与E-cadherin的胞内肽段结合，和连环蛋白呈互斥方式与 E-cadherin结合，它们的另一端与连环蛋白结合，后者与肌动蛋白细胞骨架结合，这样就形成了钙黏着蛋白连环蛋白复合体。P120ctn在细胞内也能与E-cadherin结合，但不同于和连环蛋白，它的结合位点在E-cadherin高度保守的近膜区（JMD），而其另一端并不与连环蛋白或抑癌蛋白APC（adenomatous polyposis coli）结合。P120ctn的缺失并没有明显影响E-cadherin的合成率，却促进了E-cadherin的降解5，它是E-cadherin稳定停留在细胞膜上所必需的6。E-cadherin表达及功能的调节在肿瘤的形成和转移中起着重要作用7。P120ctn可能与连环蛋白一样，作为一种癌基因影响着基因转录；也可能以抑癌基因样作用干预E-cadherin 介导的细胞黏附和信号转导活动8，9。P120ctn可因不同的剪接方式而具有32种同工蛋白之多，它广泛表达于上皮组织、内皮组织、心肌细胞和神经系统中10，并存在组织特异性。近年来，国外已有不少文献报道了在多种恶性肿瘤中均发现了P120ctn的异常表达，但对它在恶性淋巴瘤中的研究却很少。 本研究应用免疫组织化学染色方法对40例不同恶性程度NHL的P120ctn进行检测，结果显示P120ctn的表达与NHL免疫分型以及患者的临床病理特征如性别、年龄、首发部位等无明显相关性。P120ctn在低度恶性组的表达率明显低于中高度恶性组，提示P120ctn在淋巴瘤的侵袭浸润及发展中可能起到重要作用，可作为判断淋巴瘤恶性程度高低的参考指标之一。在正常淋巴组织中，P120ctn不表达，此结果与Mo等11的研究结果基本相符，由于P120ctn特异性表达于淋巴瘤组织而在正常淋巴组织不表达的特点，可能成为淋巴瘤治疗的新靶标。但P120ctn对NHL预后判断的意义，还有待今后进一步结合临床观察和随访证实。实验中还发现P120ctn在肿瘤血管内皮细胞中也有表达，提示P120ctn在血管形成中可能具有一定作用。Xiao等人12研究发现，P120ctn能调节VE-cadherin在血管内皮细胞中的表达和功能，从而成为血管内皮细胞黏附的调节因子，但这是否是P120ctn在肿瘤血管形成中的作用还有待进一步研究。 在正常上皮组织中，P120ctn表达以细胞膜尤其是细胞细胞连接处为主，胞浆表达微弱，胞核不表达，而在其癌组织和癌细胞中则表现为胞浆或（和）胞核表达，胞膜表达减弱或消失，说明癌细胞中信号分子已出现转位或重新分布，即失去正常的信号传递和黏附功能，可能会表现出转移行为。而这一机制并不能完全说明P120ctn在恶性淋巴瘤中的作用机制。在我们的研究中，可以认为P120ctn是肿瘤转移的促进因子，但其作用机制并不清楚。至于表达缺失P120ctn的癌细胞，这些分子是如何消失的或如何“跑到”别的部位如胞核的，尚有待今后进一步探讨。【参考文献】 1农朝赞，郭凌霄，黄华艺. 正常肝组织和肝细胞系、肝癌组织及细胞系中连环蛋白P120的表达. 四川大学学报（医学版），2003; 34: 80-832Daniel JM，Reynolds AB. 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