资源微生物实验实习报告

资源与应用微生物实习报告学院：生命科学学院专业：应用生物科学学号：20120459020姓名： 毛 德 昌酵母耐糖度、耐酒精度、耐酸度特性的检测酵母菌是人类历史文明中被利用最早的微生物。酵母菌可以在缺氧的环境中生存。酵母菌是一些单细胞的真菌，在自然也广泛存在，主要生活在偏酸的潮湿的环境含糖环境中。在酿酒业中广泛应用。酵母主要通过芽殖的方式繁殖后代。在不同的培养基浓度条件下酵母的的生长速率以及酵母的活性有所不同。利用血球计数板对发酵后的酵母进行计数，并计算酵母存活率，出芽率。血球计数板被用来对人体内红、白细胞进行显微计数只用，也常用来对细、真菌、酵母等微生物计数，是一种常见的生物学工具。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0毫米X1.0毫米=1.0平方毫米;容积为1.0平方毫米X0.1毫米=0.1立方毫米。其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，每个中方格用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域，每个大方格用单线划分为16个中方格。血球计数板的计数区如下图酵母死活计数和形态的观察可用吕氏美兰溶液对酵母进行染色。吕氏碱性美蓝染液是一种无毒的染料，其氧化型呈蓝色，还原型为无色。用美蓝染液对酵母菌的细胞进行染色时，活细胞内的还原性物质能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。1、 实验过程选用三株酵母分别对其进行耐糖度，耐酒精度和耐酸度的特性进行测定。按照如下配方配制耐性发酵培养基表一，酵母耐糖度培养基名称 1 2 3葡萄糖（g/1000ml） 100 150 200硫酸铵（g/1000ml） 5 7.5 10磷酸二氢钾（g/1000ml） 2 3 4 表二，酵母耐酸度培养基名称 1 2 3去皮土豆 （g/L） 200 200 200葡萄糖 （g/L） 20 20 20PH 2 3 4表二，酵母耐酒精度培养基（每瓶200ml培养基；注无水乙醇在接种前加入培养基）名称 1 2 3去皮马铃薯 （g/L） 200 200 200葡萄糖 （g/L） 20 20 20水 （ml/100ml） 60 50 50无水乙醇 （ml/100ml） 40 50 601.1 接种种子液的配制以及接种配制PDA种子液培养基，用去皮的鲜土豆20g，用80ml蒸馏水煮20min。滤去土豆，向滤液中加入2g葡萄糖，定容至100ml。分装于6支试管中，每支试管15ml液体。分装好后放入灭菌锅中美军30min。灭好菌后在超净工作台上从菌种管中挑适量的酵母菌接种于种子液中。接种好后28培养48h。1.2发酵液的接种培养好后现在显微镜下利用血球计数板对酵母染色后进行计数。记录活细胞和死细胞，将各个菌种液的活细胞浓度调成一致，向每个耐性梯度的培养基中接种入1ml种子菌液。在28条件下恒温培养48h后，用同样的方法对酵母进行计数。2、 实验结果血球计数板计数公式： 注：（1）死细胞；（2）酵母菌体；（3）芽体实验结果统计如下各表表三，种子液酵母计数菌数1号酵母21号酵母22号酵母活菌数（个/ml）1.61071.941071.38107死菌数（个/ml）5.410671065.2106总菌数（个/ml）2.141072.641071.38107 表四，种子液酵母死亡率1号酵母21号酵母22号酵母死亡率（）25.2326.5237.69将三株酵母菌的活菌数调到浓度均为个菌体，然后接种于三种耐性培养基的个梯度中，每个梯度1ml，即每个梯度中接种个菌体。培养48小时后计数结果如以下各表。 表五，酵母耐酸实验数据 PH梯度菌株编号2.03.04.01活菌数（个/ml）2.81068.61061.62107死菌数（个/ml）51054.91061.0106总菌数（个/ml）3.31061.351071.72107死亡率（）15.1536.305.821活菌数（个/ml）2.251067.71061.4107死菌数（个/ml）3.51054.01062.1106总菌数（个/ml）2.61061.171071.61107死亡率（）13.534.1913.0422活菌数（个/ml）2.351068.251061.18107死菌数（个/ml）3.51053.61061.2106总菌数（个/ml）2.71061.1851071.3107死亡率（）12.9630.389.23表六，酵母耐糖实验数据 培养基糖含量 （g/L） 菌株编号1001502001活菌数（个/ml）7.21063.61065.4106死菌数（个/ml）4.01051.61062.4106总菌数（个/ml）7.61065.11067.8106死亡率（）5.2631.3730.7721活菌数（个/ml）1.61061.41061.6106死菌数（个/ml）8.010501.2106总菌数（个/ml）2.41061.41062.8106死亡率（）33.33042.8622活菌数（个/ml）4.61064.21064.0106死菌数（个/ml）1.351061.61061.0106总菌数（个/ml）5.951065.81065.0106死亡率（）22.6927.5920.00第 4 页 共 5 页表七，酵母耐酒精实验数据 酒精含量（）菌株编号4050601活菌数（个/ml）7.01063.41063.0106死菌数（个/ml）4.61062.81063.2106总菌数（个/ml）1.161076.21066.2106死亡率（）39.6645.1651.6121活菌数（个/ml）3.21065.41064.0105死菌数（个/ml）2.21062.01064.0105总菌数（个/ml）5.41067.41068.0105死亡率（）40.7427.0350.0022活菌数（个/ml）4.81063.61062.2106死菌数（个/ml）2.01062.01064.4106总菌数（个/ml）6.81065.61066.6106死亡率（）29.4135.7166.67三株菌的耐糖、耐酒精、耐酸度的高低的比较。（1） 随着PH值的升高，三株菌株的存货菌体数增加，三株菌中1号菌耐受力要强于21号、22号两株菌的耐受力。（2） 随着含糖量的增加菌体存活数越来越少，相比之下21号菌的耐糖度的能力要明显低于1号菌和22号菌；在三株菌中22号菌的耐受力最强，在培养基的含糖量达到200g/L的时候每毫升的菌体存活数仍达到4.0106个菌体。（3） 随着培养基中的酒精含量增加三株菌总体上呈现出活菌体数量减少的趋势，即酒精度越低存活数量越多。但是似乎21号菌呈现出一个先上升后下降的趋势，21号菌在培养基中酒精含量达到50%时，菌体在每毫升培养基中含量达到5.4106之多，似乎这浓度时其适合浓度。在三株菌中1号菌的耐酒精度的能力最强，当培养基中的酒精度达到60%是存活菌体数达到3.0106个/ml，在三株菌中是存活数最多的。3、 讨论酵母菌在