8.化验作业指导书

目 录一、目的：1二、适用范围：1三、作业流程：1四、作业内容：2（一）、效价的测定：31、原理：32、方法：4（二）、总糖的测定：41、原理：42、测定：4（三）、还原糖的测定：51、原理：52、测定：5（四）、氨基氮的测定：71、原理：72、测定：7五、注意事项：8六、加强责任制及生产安全教育：8安全生产管理制度16职工安全生产公约.18化验工段作业指导书一、目的：为了规范化验人员的操作技能，保证化验人员的人身安全，要做到操作必须规范，数据必须真实、准确。 二、适用范围： 适用于化验工段全体员工。三、 作业流程：1. 按规定准时到岗，换好工作服，做好交接班准备，进行交接班。2. 交接班时，当场将工作交接清楚，将存在的问题找出来，看仪器是否正确（分光光度计、干燥箱、恒温水浴锅、电炉等），药品试剂是否够用，常用的玻璃仪器是否放入干燥箱，卫生是否清洁，双方交接无误后接班人签名，交接人方可离岗，接班人正常工作。3. 根据当日无菌室发的生产调度单和补料单做好本班工作计划。4. 根据化验原始记录，看看各罐生长情况，效价长势情况，总糖、氨基氮消耗情况，如果结果偏差大的重新取样复样，认真寻找原因，将结果填入原始记录，并注明复样，如有特殊情况汇报工作。5. 按规定时间取样，做样前对所做样的仪器和玻璃仪器做好充分的准备，放在工作台上，做效价和糖所用的试剂临用时混合。6. 取样后，进行各项含量分析，完成后将结果随时填入原始记录，如有填错应及时改正，并签名，原始记录填写完整后，认真核对确定无误后签字发出报告单。7. 随时清理和洗涤玻璃仪器和工作台，及时处理废料残液，始终保持现场的整洁有序，玻璃仪器轻拿轻放。8. 如有化验，结果偏差大，该复样的重新取样、复样。9. 剩余时间，折叠滤液用的滤纸。10. 清理卫生，做好交班准备。四、作业内容：发酵过程的中间分析是生产控制的眼睛，它显示了发酵过程中微生物的主要代谢变化，供操作人员做好分析控制发酵工艺并处理异常发酵的重要依据。 化验项目（每8h取样一次） 项目罐类 PH（无菌） 杂菌（无菌） 菌浓（无菌） 总糖（化验）还原糖（化验）氨基氮（化验） 效价（化验）种子罐消后接后30h移前发酵罐消后接后40h放罐糖罐（一）、效价的测定：1、原理：在培养过程中，产生菌体的生物合成能力和抗生素的积累程度，通常都以抗生素的效价单位表示。发酵过程中，定期测定发酵效价单位，可使我们及时了解发酵过程的趋势，帮助我们选择最合适的发酵条件，并控制最合适的发酵周期。效价单位测定一般采用化学测定和生物测定法。现我们采用化学测定法，方法简速。2、方法：（1）、准确吸取2.5ml发酵液于25ml的具塞比色管中，加无水乙醇将发酵液全部冲下（起步效价做3倍，加无水乙醇5ml；效价超过5500改做4倍，加7.5ml无水乙醇），充分摇匀后放入37恒温水浴中30min，取出后摇匀过滤。（2）、精确吸取1ml于盛有10ml硼缓溶液和8ml正丁醇溶液的25ml的比色管中，充分摇匀再次放入37恒温水浴中20min。（3）、吸取上清液4ml，加4ml无水乙醇摇匀，在波长408nm的722分光光度计上进行比色。讨论：（1）、测定样品时，应力求与制作标准曲线和条件相同。（2）、正丁醇和硼缓在临用时混合，混合时不能快。（3）、空白，样品所用之比色皿，应分别固定使用。（4）、比色前15min，打开分光光度计预热。（二）、总糖的测定：1、原理：淀粉系多糖类，经酸水解后生产单糖，利用其分子中的醛基在碱性溶液中将高价铜还原成低价铜，剩余铜在酸性溶液中与碘化钾作用析出游离碘，可用硫代硫酸钠滴定，根据空白与样品之差推出糖含量。2、测定：（1）、发酵液过滤后，精吸滤液2.5ml于盛有5ml（6mol/L）的HCl的25ml刻度试管中，在沸水中加热15min，冷却，用蒸馏水稀释至刻度。（2）、正确吸取上述水解溶液5ml，斐林A10ml、斐林B10ml于150ml的三角瓶中，稍震摇，在电炉上加热，煮沸3min，同时以A、B液各10ml、水5ml做空白。（3）、冷却至室温，加KI5ml、加6mol/L的HCl 10ml，立即以0.1mol/L的Na2S2O3，滴定至淡黄色，加淀粉指示剂2ml，继续滴至蓝色消失。样品消耗的Na2S2O3毫升数为A，空白消耗的毫升数为B，（B-A）计算得。（三）、还原糖的测定：1、原理： 测还原糖是看玉米淀粉的转化率，还原糖是培养液内含自由醛基的单糖，通常指葡萄糖，葡萄糖可以直接被微生物吸收利用，因而还原糖这个数值是反映产生菌体直接利用糖的情况与发酵关系的较为密切。2、测定：发酵液经过滤，吸滤液1ml，不经酸水解，其它按总糖的方法测定。注意：1、 煮沸时间应以沸腾开始起严格控制3min。2、 A液B液必须准确加入，因为+1价铜离子是计算得依据。3、 淀粉指示剂不能过早的加入，因为生产大量的淀粉吸附物达到终点时仍不易褪色，造成误差。4、 滴定至终点后放置一下，又呈蓝色，这是因为过量的碘。碘化钾在酸化情况下，被空气氧化而析出的碘遇淀粉重显蓝色。糖曲线表：（本表以葡萄糖计）查 糖 浓 度 表滴定值00.10.20.30.40.50.60.70.80.900.060.130.2010.270.340.400.470.540.610.680.750.820.8920.951.021.091.161.231.301.371.441.501.5731.641.711.781.851.921.992.062.122.192.2642.332.402.472.542.612.672.742.812.882.9553.023.093.163.223.293.363.433.503.573.6463.713.773.843.913.984.054.124.194.264.3274.394.464.534.604.674.744.814.874.945.0185.085.155.225.295.365.435.495.565.635.7095.775.845.915.986.046.116.186.256.326.39106.466.536.596.666.736.806.876.947.017.08注：还原糖查表除以2，即得；超出范围值用公式计算： C%=滴定差值0.612/1.454（四）、氨基氮的测定：1、原理：生产上通常仅测定氨基氮和氨氮，测定氨基氮和氨氮都可以用甲醛法，简便迅速，氨基氮测定数据作为中间补料和代谢控制的主要依据（含量：以mg/100ml）。2、测定：、发酵液过滤。、吸取滤液5ml于250ml三角瓶中，加蒸馏水20ml，甲基红3滴，以0.5mol/LH2SO4调至红色，放置5min，再用0.075mol/L的NaOH调至黄色，加18%的中性甲醛5ml摇匀，放置5min，加酚酞3滴，以0.075mol/L的NaOH滴定至为红色为终点。滴定毫升数200即为氨基氮的含量。讨论、注意：1、 在加甲醛前，酸性应调节好，第一步调节，H2SO4可适当多一点，因为发酵液中含有CO3+消耗HCl。2、 中性甲醛随用随时中和。3、 操作周围应避免有氨气和HCl气体，否则影响结果的正确性。五、注意事项：1、 化验员必须穿戴好洁净的工作服，在进行有毒、有刺激性、有腐蚀性药品的工作时，必须戴好防护镜、口罩。2、 电器设备发现有故障、损坏、漏电等情况时，应立即切断电源，通知电工修理。3、 电器设备不得用湿手或手拿金属工具操作，开关按钮。4、 有机溶媒应放在固定地点，不得放在高温炉或电炉旁。5、 当有人触电时，用木棒将触电者和电源切断，进行急救。6、 有毒或有刺激性的药物，不能直接嗅之，必须用手扇动，在旁嗅之。7、 不能用玻璃仪器喝水，以免发生意外。六、加强责任制及生产安全教育：参见【化验安全操作规程】，【化验岗位工作职责】。化验安全操作规程一、化验员必须穿戴好洁净的工作服，在进行有毒、有刺激、有腐蚀性药品的工作时必须戴好防护镜、口罩。二、对有挥发性和易燃性有机溶剂加热排除时，必须在水份锅中或电热板上缓慢进行，禁止用火焰式电炉直接加热。三、当加热蒸馏及有关用火或点加热操作时，要有人看护，以防意外。四、可燃性溶剂，不可存放在电源，水源处，以免发生火灾。五、电源开关要安装牢固的外罩，开合电源时要精力集中，手湿不得操作。六、电热设备及导线要经常检查，电热器械是否有安全可靠垫板。七、化验室附近要配有灭火器材，以备急用。化验岗位工作职责一、负责检查发酵的含量，总糖，还原糖，效价，氨基氮等，为生产提供准确的检验数据。二、负责化验所需各种标准溶液，清液的配制，做好各种曲线的绘制。三、根据生产工艺要求，随时作出所需项目的检验结果，为生产提供可靠的依据。四、负责仪器室的使用和管理，做好称量操作记录，严格按规程进行操作，爱护室内所有仪器。五、按工艺要求严格取样程序。六、负责化验室所用各种试剂，标准品的管理，避免由于管理不当造成化验结果误差。七、保证计量器具的准确性及可靠性。72230G可见分光光度计使用方法一、使用准备工作：方式（一）1、 开机前，要检查电源插座是否按规定L接火线，N接零线，接大地。仪器使用时，应避免强光照射。2、 启动电源开关，仪器显示“F7230”。3、 按“CLEAR”键，仪器显示“YEA”进入年份设置。4、 年份设置，按数字键，输入对应的年份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“MON”表示进入月份设置。5、 月份设置，按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“DA”表示进入日期设置。6、 日期设置，按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“HOU”表示进入日期设置。7、 小时设置，按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“MIN”表示进入日期设置。8、 分钟设置，按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器进入时间显示模式。9、 过20min，待机器热平衡后，载进行试样测定可得到准确的数值。方式（二）：若不需要设置年，月，日，时，分，即进入工作状态，可采用方式（二）。1、 开机，仪器显示“F7230”。2、 按“CLEAR”键，仪器显示“YEA”。3、 按“0%”键，仪器显示“00-00”，表示仪器进入及时状态，时间从88年1月1日0时0分开始。4、 按“MODE”键，仪器显示（T）状态。注意在时间输入中，年份范围在00-99，月份在01-12，时期01-31.小时00-23，分钟00-59。不在这些数字的范围，输入无效，需再次输入。数值输入的过程中，如果按错数字，可按“CLEAR”键，然后再次输入。时间一经输入不可更改，除非关机再开机重新开始。二、仪器基本使用方法：1、调节波长旋钮使波长移到所需这处。2、四个比色皿，其中一个放入参比试样，其余3个放入待测试样。将比色皿放入样品池内的比色皿架中，夹子夹紧，盖上样品池盖。3、将参比试样推入光路，按“MODE”键，使显示（T）状态或A状态。4、按“100%键”，至显示“T 100.0”或“A 0.000”。5、打开样品池盖，按“0%”键，显示“T 0.0”或“A E 1”。6、盖上样品池盖，按“100%”键，至显示“T 100.0”。7、然后将待测试样推入光路，显示试样的（T）值或A值。8、如要想将待测试样的数据记录下来，只要按“PRINT”键即可。硫代硫酸钠滴定液的配制和标定1、 配制：、 0.1N Na2S2O3标准溶液：称取26g Na2S2O3及0.2g Na2CO3，加适量新煮沸过的冷水使之溶解，并稀释至1000ml，混匀，放置一个月后过滤备用。、 0.5%淀粉指示剂。、 4N H2SO4：量取H2SO4 10ml，慢慢加入80ml水中。2、 标定：精密称取在120干燥至恒重的基准重铬酸钾约0.15g，置于500ml碘瓶中，加水50ml使之溶解，加KI 2g，轻轻振摇使之溶解，再加入4N H2SO4 20ml，盖塞，摇匀，放置暗处10分钟后加水250ml，用Na2S2O3溶液滴定至呈浅黄绿色，再加0.5%淀粉指示剂3ml，继续滴定蓝色消失而显亮绿色。反应液及稀释用水的温度不应高于20 。同时做试剂空白试验。3、 计算： N8=m/（v1-v2）0.04903式中：N8 Na2S2O3标准溶液的当量浓度，N；m基准重铬酸钾的质量，g；v1Na2S2O3标准溶液用量，ml；v2试剂空白试验中Na2S2O3标准溶液用量，ml；0.04903每mg当量重铬酸钾的克数。4、 贮藏：贮于棕色瓶中，密闭低温保存。试剂的配制：1、 正丁醇溶液：量取正丁醇500ml，加300ml水充分摇匀后静置至完全分层，取上清液备用。2、 硼缓溶液：准确称取四硼酸钠95.35g，定容至5000ml，调PH至9.2后加50ml硼酸即可。3、 斐林A：称取CuSO45H2O 300g定容至5000ml。4、 斐林B：称取酒石酸钠900g，NaOH660g定容至5000ml。5、 硫代硫酸钠：取1mol/L硫代硫酸钠稀释至0.1mol/L即成，待标定。6、 0.1mol/LNaOH：取1mol/LNaOH1000ml加水稀释至1000ml使其浓度为0.1mol/L，待标定。7、 甲醛：（中性甲醛）取500ml甲醛溶液，加500ml水摇匀，加酚酞3滴，用浓NaOH调至微红色即可。8、 酚酞：1%的乙醇溶液。9、 甲基红：0.05%的75%的乙醇溶液。安全生产管理制度一、“安全生产、人人有责”，所有职工都必须加强法制观念，认真执行党和国家的有关安全生产，劳动保护政策及法令规定，严格遵守安全技术操作规程和各项安全生产规章制度。二、凡不符合安全生产要求，有严重危险的厂房，设备及生产线，职工有权向上级报告，遇有严重危及生产安全的情况，职工有权停止操作并及时报告领导处理。三、进厂新员工，临时参加劳动及变换工种的人员，未经安全教育及跟班的师傅同意，不准单独操作。四、生产工人上班时，必须严格按规定穿戴防护用品。女工要把辫子放在帽内，操作前要检查设备和工作场地，及时排除故障和隐患；保持设备润滑及通风良好，运转机器严禁戴手套操作；不准带小孩进入工作场地，不准穿拖鞋，赤脚、敞衣，戴头巾、围巾工作，上班前不准喝酒。五、工作中应坚守岗位，不准擅自把自己的工作交给他人，不准打闹、睡觉以及做与本职工作无关的事情。凡运转设备，不准跨越、调整检查设备，要先停电关车，中途停电应关闭电源。六、严格执行交接班制度，本班生产工人下班前必须切断电源、气源、熄灭火种及照明电灯，清理场地。七、操作工必须熟悉其设备性能，工艺要求和设备操作规程。设备要定人操作，不得任意开动本工种以外的设备，当工作需要时须经有关领导的同意后方可操作。八、检查，修理机械、电气设备时，必须先停电，设人监护，非工作人员严禁合闸、开关。在合闸要前细心检查确认无人检修时