中药制剂的含量测定.ppt

暖了，花开了，碧水庭院，该买了！ 工作在繁华都市， 居住，我更喜欢安静点的地方 喜欢那种离尘不离城的悠然空间， 那种繁华之外的宁静生活 在春暖花开的日子， 在民心河畔邂逅碧水庭院， 多年的居住理想， 从此， 有了清晰的图象,第四章 中药制剂的含量测定,目 录,2 供试品溶液的制备,3 常用定量分析方法,1 概述,1 概述,二、特点：单一成分 君药、贵重药、有毒药,一、目的： 控制制剂的质量，保证临床用药的 安全、有效,2 供试品溶液的制备,最大限度地保留被测定组分， 除去干扰物质， 将被测组分浓缩至最小检测限,原则,粉碎：目的：样品均匀；充分提取 提取：关键是提取完全 除杂：关键是不损失待测成分 浓缩：达到检测限 衍生化：定量反应,步骤,供试品溶液的制备,关键的两步,供试品溶液的制备,样品的提取 冷浸、回流提取、索氏提取、升华、 超声提取、超临界流体萃取 样品的净化 液-液萃取法、色谱法、沉淀法、 升华法、消化法、 盐析法、 水蒸汽蒸馏法,索氏提取,回流提取,特点：无需过滤 、提取效率高、所需溶剂少、提取杂质少。但费时、提取不完全,特点：对热不稳定或具有挥发性的成分不宜使用。提取完全，快速。,提取方法,回流瓶，0.52h,索氏提取器，58h,浸泡过夜,挥发性成分,20min,特点：快速、低温、省时，提取完全,特点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少。少有于定量分析。,提取方法,冷浸,水蒸气蒸馏,超声提取,例：P9091（本科教材）,精密称取，准确加入甲醇50ml，称重，超声提取30min，放冷并再次称重，用甲醇补足其重量,特点：计量关系准确,注明超声波的频率、功率，以保证重现性,最常用的提取方法（HPLC）,供试品溶液的制备,常用溶剂：正丁醇、氯仿、 EtOAc、乙醚,多次萃取（3-5次） 调整水相酸度，提取有机酸、有机碱 利用盐析作用，减少乳化,净化方法,液-液萃取法,例：P69,离子对萃取法：生物碱 P125,溴百里酚蓝,净化方法,液-液萃取法,溴甲酚绿,中药制剂分析常用的方法,净化方法,色谱法,柱的大小：长10cm，内径10mm 步骤：装柱、上样、洗脱、收集 装柱方法：湿法装柱、干法装柱 装柱要求：填装均匀、紧密， 表面平整,色谱柱净化方法,柱填料： 硅胶、氧化铝、活性炭、 键合相硅胶、大孔树脂、 离子交换树脂、聚酰胺,色谱柱净化方法,例：P124 生物碱 甲醇提氧化铝乙醇洗脱,氧化铝,硅胶,酸性吸附剂，强烈保留碱性化合物 适用于中性或酸性成分 洗脱顺序：极性小大（正相洗脱）,碱性吸附剂， 适用于碱性成分 洗脱顺序：同硅胶,例： 三七皂苷 甲醇提取蒸干水溶解上样水洗70%乙醇洗收集,色谱柱净化方法,大孔树脂,分为极性、非极性,非极性型（D101等）常用 使用前需要用有机溶剂除去杂质 洗脱顺序：极性大小（反相洗脱）,例 益母草流浸膏中盐酸水苏碱的鉴别 取本品10 ml，水浴蒸干，残渣加水10ml使溶解，加稀盐酸调节pH值至12，加在强酸性阳离子交换树脂柱（732Na-型，内径0.9cm，柱长12cm）上，以水洗至流出液近无色，弃去水液，再以2mol/L氨溶液40ml洗脱，收集洗脱液作为供试品溶液。,色谱柱净化方法,离子型化合物,离子交换树脂,洗脱顺序：极性大小（反相洗脱）,聚酰胺,活性炭,非极性吸附剂，除色素 P72,常用于黄酮类,色谱柱净化方法,固相萃取法,净化方法,C18小柱,分开脂溶性和水溶性成分,例：P204,操作：柱的活化上样清洗洗脱 洗脱顺序：极性大小（反相洗脱）,P194,蒸馏法,沉淀法,例 六味地黄颗粒中丹皮酚含量测定 取本品约2g，研细，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液约450ml，置500 ml量瓶中，加水稀释至刻度。274nm波长处测定吸收度。,净化方法,用于挥发性成分,加入沉淀剂,消化法,湿法消化：强酸腐蚀 干法消化：高温炽灼,测定中药制剂中的无机元素,净化方法,注意：各剂型样品的预处理,原则：应根据被测成分的理化性质和存在状态以及各类成分之间相互干扰的程度及制备工艺与剂型的不同、赋形剂的特点等进行综合考虑,固体制剂：丸剂、片剂、颗粒剂、栓剂、胶囊 半固体制剂：流浸膏、浸膏、糖浆、煎膏 液体制剂：合剂、口服液、酊剂、注射剂,片剂：淀粉、糊精、滑石粉、糖精,散剂：注意取样的代表性,蜜丸、糖浆剂、煎膏剂：消除粘性,颗粒剂：糖、糊精,固体制剂：排除赋形剂的影响,注意：各剂型样品的预处理,固体稀释剂：硅藻土 P144,栓剂：基质（油脂性基质和亲水性基质） 滴丸：基质（水溶性基质和水不溶性基质）,复方丹参滴丸中三七的测定 取本品40丸，加甲醇10ml，振摇10分钟， 于4放置24小时，使聚乙二醇析出完全， 滤过，取滤液作为供试品溶液,注意：各剂型样品的预处理,注射剂：直接取样,合剂、口服液：直接取样或经过分离净化,液体制剂：摇匀后再取样,西洋参精口服液中人参总皂甙的含量测定 精密移取待测样品10ml，加入到处理好的大孔 树脂柱上，加蒸馏水80ml洗柱，洗液弃去，再 用70%乙醇100ml洗柱，收集洗脱液，,酒剂、酊剂：加热蒸去乙醇，然后再用 有机溶剂萃取或柱层析,注意：各剂型样品的预处理,3 常用定量分析方法,化学分析法,挥发法：如水分测定、灰分测定 萃取法：昆明山海棠片 药典P492 乙醇回流蒸干盐酸溶解氨 乙醚萃取 沉淀法：西瓜霜的含量测定,适用于：含量较高的成分,重量分析,化学分析法,酸碱滴定：生物碱、有机酸 沉淀滴定：含Cl-的制剂 络合滴定：朱砂硫氰酸铵 石膏、白矾EDTA 氧化还原：雄黄I2 磁石、赭石重铬酸钾,滴定分析,紫外可见分光光度法,（一）基本原理：A = E c l,仪器：紫外-可见分光光度计,光源,单色器,比色皿,检 测 器,（二）用途：总成分的测定 （三）定量方法： 吸收系数法 标准曲线法 对照品比较法,紫外可见分光光度法,取本品粉末，精密称定，加盐酸-甲醇（1:100） ，回流置氧化铝柱用乙醇洗脱，收集洗脱液，。 在345nm的波长测定吸光度，按盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）的吸收系数（ ）为728计算, 注意：对仪器进行波长校正,计算公式：,吸收系数法,吸收系数法,A= 0.358 w = 0.9926g H2O% = 8.0%,标准曲线法,1 2 3 4 5,c,A,回归求方程 A = k c + m,注意： 供试品浓度应在线性范围内,cx,Ax,相关系数r 0.999,排石颗粒中总黄酮的含量测定,对照品溶液的制备 每1ml含无水芦丁0.2mg,测定 取本品照标准曲线依法测定,标准曲线的制备 精量对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，加5%亚硝酸钠硝酸铝氢氧化钠再加50%甲醇至刻度，摇匀。在510nm下测定A，以A为纵坐标，c为横坐标，绘制标准曲线,标准曲线法,1、某同学欲用吸收系数法测定三黄片中总生物碱，请设计一个合理的供试品溶液制备的实验方案,2、某同学欲用分光光度法测定冠心丹参片中总皂苷，为除去杂质干扰，请设计一个有效的供试品溶液制备的方法,（一）基本原理,A = k w,仪器：薄层扫描仪,薄层扫描法（TLCS）,（二）实验条件,例：熊果酸,薄层扫描法,吸收扫描法 光源：氘灯、 钨灯 扫描方式：锯齿式 测光方式：透射、反射 设定散射系数SX 双波长扫描法,例：小檗碱,特点：灵敏度高,荧光扫描法,薄层扫描法,光源：汞灯 直线式扫描 无需曲线校直,（三）定量方法,A,w,w1,wx,w2,A1,A2,Ax, 点样量在线性范围内 交叉点样：每一样品2个点样点 市售预制板,外标二点法,例：P80,薄层扫描法,气相色谱法（GC）,（一）基本原理,（二）实验条件 固定相：硅氧烷类固定液 色谱柱：弹性交联石英毛细管柱 检测器：FID 进样量：12l，分流进样，分流比, 特点：适用于挥发性及易气化的成分 不同成分灵敏度不同 进样量重复性差,气相色谱法,（三）定量方法：内标法,选择某纯物质作为内标物，准确称量，加入待测液中，比较待测组分与内标物的峰面积,相对校正因子：,S,x,气相色谱法,例1 马应龙麝香痔疮膏中龙脑含量测定（P84） 【校正因子测定】 内标：水杨酸甲酯3.0mg/ml 对照品：龙脑2.0mg/ml 吸取1l，注入气相色谱仪，计算校正因子 【测定法】取本品约1g，精密加入 内标溶 液10ml，超声滤过，吸取续 滤液1l，注入气相色谱仪。,气相色谱法,iS,R,【对照品溶液】 iS：3.0mg/ml As = 882 R：2.0mg/ml AR =600,气相色谱法,iS,x,特点：定量准确度与进样量无关,【供试品溶液】 m：1.050g iS：3.0mg/ml As = 980 Ax =700,气相色谱法,系统适用性试验P81, 理论塔板数：n 分离度：R1.5 拖尾因子：0.95T1.05 重复性：n5，RSD2.0%,气相色谱法,（一）实验条件 色谱柱：ODS（5m，4.6mm250mm） 流动相：色谱纯，脱气，水相过0.45m膜 检测器：UVD，ELSD,高效液相色谱法（HPLC）,（二）方法分类,1、反相键合相色谱,固定相：C18、C8 流动相：甲醇-水、乙腈-水 洗脱顺序：极性大小 对象：低极性成分,例：药典P126 辛夷 木兰脂素 固定相：C8 流动相：乙腈-四氢呋喃-水,高效液相色谱法,离子抑制色谱法,3.0 pKa7.0：醋酸、磷酸、磷酸盐 6.0 pKb 7.0：氨水、乙二胺、磷酸盐,例1：P90,反相键合相色谱,离子对色谱法,pKa3.0：季铵盐，如（C4H9）4N+Br- pKb6.0：烷基硫酸盐，如C12H25OSO3-Na+,B+ + A- (B+A-),C12H25OSO3-,+,例2：P90,反相键合相色谱,2、正相键合相色谱,固定相：氨基键合相硅胶或氰基 流动