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SFRP4过表达对结肠癌细胞株HCT116基因表达谱的影响,复旦大学附属肿瘤医院病理科 黄 丹,研 究 背 景,研究背景,CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179,结直肠癌的发病率,研究背景,Wnt信号通路,分泌型卷曲相关蛋白SFRP,一组分泌型糖蛋白家族 SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达 定位于染色体8p 1211.1 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。 （除SFRP3以外）,研究背景,分泌型卷曲相关蛋白SFRP 通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物而阻碍Wnt信号,研究背景,研 究 目 的,检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。,技术路线,pcDNATM 3.1-SFRP4重组质粒,基因芯片检测（Pathway分析）,双酶切鉴定,WB鉴定SFRP4表达,转染HCT116后 筛选稳定表达株,结果,pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果,pcDNA3.1载体大小为5500bp， SFRP4基因片段大小为1056bp,EcoRI和HindIII双酶切重组质粒后凝胶电泳图,Western Blot 检测pcDNATM 3.1-SFRP4质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达,0道为pcDNA3.1空载体，1和2道为pcDNA3.1-SFRP4,pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果,上调的MAPK家族基因,下调的TNF家族基因,凋亡相关基因的改变,pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果,1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。 -actin作为对照。,RT-PCR验证基因芯片结果,讨论,我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p38MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤细胞的作用机制。,讨论,MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用 肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用
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