向日葵叶抗氧化成分24-亚甲基环木菠萝烷醇的分离提取.pdf

1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. J TCVM 2010年第2期 40 实 验 技 术 Opti m ization on the ultrason ic treat ment extracting process for chlorogen ic acid fromL onicera japonicaThunb.by orthogonal design SONGDe - hua, L I ANG Yun - xia, YANG Guang - yu (HeilongjiangVocational College ofAnimal Husbandry and Veterinary Science, Shuangcheng Heilongjiang 150111, China) Abstract: Objective:To opti mize the ultrasonic treatment extracting process for chlorogenic acid fromLonicera japonica Thunb. . Methods: Orthogonal design was used to deter mine the optimum extracting process with the extracting rate of chlorogenic acid asmakers . Results: The ultrasonic treat ment optimum extracting process for chlorogenic acid fromLonicera japonicaThunb. was that adding 8 folds of 70% ethanol, refluxing for 30 min. Conclusion: The extracting process for chlorogenic acid shows high extracting rate and good stability . Key words:Lonicera japonicaThunb. ; chlorogenic acid; extracting rate; orthogonal design; HPLC 向日葵叶抗氧化成分24 -亚甲基环木菠萝烷醇的分离提取 曾佑玲,吉庆发,易 琼,郭 庆,何炳坤,王 鲁 (贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025) 摘 要: 通过对向日葵叶乙酸乙酯、0. 5%稀盐酸混合液提取物的氯仿萃取部分的分离纯化, 得到一个化合物。经MS鉴定其分子量为440,为24 -亚甲基环木菠萝烷醇,且为首次从该植物中 分离得到。用普鲁士蓝法以茶多酚为对照研究该化合物的抗氧化活性。结果表明, 24 -亚甲基环 木菠萝烷醇具有抗氧化活性,但比同浓度茶多酚的抗氧化活性要弱。 关键词: 向日葵叶; 24 -亚甲基环木菠萝烷醇;抗氧化 中图分类号: S853174 文献标识码: A 文章编号: 1000 - 6354 (2010) 02 - 0040 - 02 自20世纪60年代起,国外已对向日葵属植物 地上部分的植物化学成分进行了系统研究。目前国 内对向日葵的研究热点主要集中在向日葵籽中绿原 酸和脂肪酸,对向日葵叶的研究主要局限在对其化 学活性成分和绿原酸。24 -亚甲基环木菠萝烷醇最 先由W illiams B L从葡萄柚的果皮中分离得到,国 内主要在金毛狗脊 1 和小油桐叶2 中分离出 ,但是 关于其化学活性的研究国内尚属空白。前期试验研 究中表明,向日葵叶总提取物具抗氧化活性,为了进 一步明确其抗氧化成分,笔者等对向日葵叶总提取 物进行了分离、 纯化,并首次成功地从向日葵叶中分 离到24 -亚甲基环木菠萝烷醇,同时初步探讨了其 抗氧化能力。 1 材料 1. 1 材料和试剂 向日葵叶(采自贵阳某种植场 ) , 无水乙醇、 三 收稿日期: 2010 - 01 - 04 基金项目:贵州大学SRT项目贵大SRT字(20)号 作者简介:曾佑玲(1988 - ) ,女,在读本科生。通讯作者:王鲁, E - mail: wanglu7007163. com 氯甲烷、 甲醇、 石油醚、 乙酸乙酯、 三氯乙酸、 盐酸、 三 氯化铁、 磷酸二氢钠、 磷酸氢二钠、 六氰合铁酸钾 (以上试剂均为国产分析纯 ) , 柱层析硅胶、 薄层层 析硅胶(青岛海洋化工有限公司 ) , 茶多酚(贵州大 学食品科学系提供,纯度95% )。 1. 2 主要仪器及设备 HP5973 -质谱仪 (HP 公司)、 紫外分析仪WD - 9403B (北京市六一仪器厂)、HH - 4数显恒温水 浴锅(常州澳华仪器有限公司)。 2 方法与结果 2. 1 提取与分离方法 取干燥向日葵叶,按每30 g加450 mL乙酸乙 酯和0. 05%盐酸混合溶液 (4 1) 浸泡30 min,后在 65 水浴锅上回流提取,重复提取2次,每次3 h, 第2次提取时盐酸用量减1 /3,收集提取液。总计 提取1 050 mL,合并提取液, 30 减压浓缩至无乙 酸乙酯味,收集浓缩液,过滤,除去不溶物后以60 减压浓缩至一半体积时,收集浓缩液。按11体 积加入无水乙醇,静置24 h后过滤,滤液40 减 压浓缩至无醇味,收集浓缩液,加入氯仿反复萃 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. J TCVM 2010年第2期 41 实 验 技 术 取3次,收集氯仿萃取液,将其浓缩成膏状,自然 干燥至恒重,得样品2. 897 6 g,收率为0. 27% , 该样品用硅胶柱色谱分离,经石油醚洗脱,然后 再用石油醚 氯仿 (10 1) 洗脱。洗脱部分经反复 纯化后得结晶状化合物A 0. 058 6 g,收率为 01005 6%。 2. 2 抗氧化活性评价 参考文献 3 ,采用普鲁士兰法测定分离物的总 抗氧化活性,取试样1 mL,加pH值6. 6磷酸缓冲液 2. 5 mL和质量分数1%铁氰化钾溶液2. 5 mL,混 合,后在50 静置20 min,加入质量分数10%的三 氯乙酸溶液2. 5 mL混合,取混合液2. 5 mL,加入 215 mL蒸馏水和质量分数0. 1%氯化铁2. 5 mL混 匀,静置10 min。在700 nm处测定吸光强度,吸光 强度越高,抗氧化性越好,还原力越强。根据文 献 4报道茶多酚浓度在 0 - 0. 6 mg/mL内均具有良 好的量效关系。因此我们将24 -亚甲基环木菠萝 烷醇和茶多酚以甲醇做溶剂均配成0. 1 mg/mL 的浓度,以甲醇做阴性对照,每样平行测3次,取 平均值。 2. 3 质谱鉴定及抗氧化活性评价 2. 3. 1 质谱鉴定 试样用甲醇溶解,用HP5973 -质 谱仪检验,其纯度为99% ,其m /z: 440,并与文献 1 报道数据进行比对,证明化合物A是24 -亚甲基环 木菠萝烷醇。 2. 3. 2 抗氧化能力 在700 nm处茶多酚的吸光强 度为0. 381, 24 -亚甲基环木菠萝烷醇为0. 323。 3 讨论 向日葵作为经济作物在我国农村已有广泛 的种植,其果盘、 花瓣、 茎叶等均可作药用。为了 提高农产品的附加值,笔者等以抗氧化活性为跟 踪目标,对向日葵叶的抗氧化活性成分进行提取 分离。并首次从向日葵叶中分离到24 -亚甲基 环木菠萝烷醇,国外学者主要研究24 -亚甲基环 木菠萝烷醇在植物甾醇的合成过程中所起的作 用,目前基本证实它是植物甾醇生物合成的环阿 乔醇路线中的重要中间体 5 。但是关于它的其 他化学性质研究较少。 该研究就其抗氧化能力进 行了初步探讨,发现24 -亚甲基环木菠萝烷醇具 有较强的抗氧化能力,但是其抗氧化能力弱于同 样浓度的茶多酚。至于该物质是否就是向日葵 叶中的主要抗氧化物质,是否具有开发成为天然 抗氧化剂及功能性食品的开发资源还有待进一 步的探讨。 参考文献: 1 吴 琦,杨秀伟,杨世海,等.金毛狗脊的化学成 分研究J . Nat Prod ResDev(天然产物研究与 开发) , 2007, 19: 240 - 243, 302. 2 王兆玉,陈飞龙,梁文丰,等.小油桐叶石油 醚萃取 物 的GC - MS分 析 J .中 药 材, 2009, 32 (7) : 1077 - 1079. 3 OyaizuM.Studies on products of browning reac2 tion:antioxidative reaction prepared from glu2 cosamineJ . Jpn J Nutr, 1986, 44: 307. 4 赵艳红,李建科,李国秀.天然抗氧化物体外活 性评价方法的优选与优化 J .食品科学, 2008, 29 (6) : 64 - 69. 5 Goad L J, Goodwin TW. The biosynthesis of Sterols in higher PlantsJ . Biochem J,1966,99: 735. Extraction and isolation of antioxidant constituent 24 - methylenecycloartanol from sunflower leaves ZENG You - ling, J IQing - fa, YIQiong, GUO Qing, HE B ING - Kun, WANGLu (College ofAnimal Science, Guizhou University, Guiyang Guizhou 550025, China) Abstract: Acompound was isolated from the mixture of ethyl acetate with 0. 5% hydrochloric acid - soluble of chloroform ex2 tracts from sunflower leaves .Identification byMS showed itsmolecularweightwas 440, for 24 - methylenecycloartanol, which was isolated from thisplant for the first ti me. Then the antioxidant activity of the compoundwas studied by Prussian bluemethodwith