益生菌发酵牛初乳对致病菌抑制作用的研究.pdf

v ， ww c h i n a d a i r y n e t r p g y c h i n a j o u ma 1 n e t c n 中国乳品工业 dai r y I ND US TR Y 益生菌发酵牛初乳对致病菌抑制作用的研究 张小平 ， 顾瑞霞 ( 扬 州 大 学 乳 品 研 究 所 ， 江 苏 扬 州 2 2 5 0 01 ) 摘要 研 究 了益 生茵发 酵牛初 乳对 致病性 大肠杆 茵及 幽 门螺 旋杆 茵的抑 制作 用。 结 果表 明 ， 初乳 经益 生茵发 酵 ， 导致 初乳 p H 值 降低 ， 初乳 l g G活性也相应降低， 在 p H值为4 6时， I g G活性仅为初乳的2 5 。 不同益生茵发酵初乳在不同p H值对大肠杆茵及幽门螺旋杆 茵 均 有抑 制作 用，且 嗜酸 乳 杆 茵发 酵初 乳抑 制 作 用 最强 ， 对 大肠杆 茵 的抑 制 率 最 高达 8 3 ，对 幽 门螺 旋杆 茵抑 茵 ll t 直 径 最 大达 1 7 2 u n 达到高度敏感， 分别较初乳的抑制作 用提 高 4 7 5 2 ff 5 2 2 1 。不同益生茵发酵初乳的抑茵作 用依 次为嗜酸乳杆 菌双歧杆 菌 混 合乳 酸茵 德 氏乳杆 茵保加 利 亚亚种嗜热链 球 茵。 关 键词 ： 牛初乳 ； 益 生茵 ； 发 酵 ； 抑 制 中图分类号 ：T S 2 5 2 1 文献标识码 ：A 文章编号：1 0 0 1 2 2 3 0 ( 2 0 0 5 ) 0 3 0 01 0 0 4 S t u d ys o n t he i n hi bi t i o n o f f e r m e nt e d bo v i ne c o l os t r u m s by pr o b i o t i c s t o t h e pa t ho g e ni c b a c t e r i a ZHAN G Xi a op i ng ， GU t L ui x i a ( I n s t i t u t e o f Da i r y S c i e n c e a n d Te c h n o l o g y， Ya n g z h o u Un i v e r s i W ， Ya n g z h o u 2 2 5 0 0 1 ， Ch i n a ) Ab s t r a c t ： T h e a r t i c l e s t u d i e d t h e i n h i b i ti o n o f f e r me n t e d b o v i n e c o l o s t r u m b y p r o b i o t i c t O t h e p a t h o g e n i c E c o l i a n d He l i c o b a c t e r p y l o r i ( HP ) 、 Th e r e s u l t s i n d i c a t e d t h a t p H v a l u e o f b o v i n e c o l o s t r u m Wa S r e d u c e d a f t e r f e r m e n t e d ，S O d i d t h e a c ti v e o f l g G At t h e pH 4 6 ， t h e a c ti v e o f l g G Wa S o n l y 2 5 pe r Th e f e rm e n t e d c o l o s t r u ms b y diff e r e n t p r o bi o t i c h a d t h e i n h i b i ti o n t O t h e p a t h o g e ni c E c o l i an d HP a t t h e diff e r e n t p H Th e i n h i b i ti v e e ff e c t o f t h e L a c i d o p h i l u s WaS t h e be s t a n d t h e h i g h e s t i n h i b i ti v e r a ti o t O t h e E c o l i WaS 8 3 2 ， t h e b i g g e s t i n h i b i ti o n z o n e di a me t e r t O t h e HP wa s 1 7 2 mm wh i c h hig he r t h a n t h e i n h i b i ti o n o f c o l o s t r u r m wi t h 4 7 5 2 a n d 5 2 2 1 s e p a r a t e l y Th e o r d e r o f t he i n hib i ti o n o f t h e f e rm e n t e d c o l o s t r u ms b y diff e r e n t p r o b i o t i c wa s L a c i d o p h i l u s Bi fi d o b a c t e r i a mi x e d L AB L d e l b r u e c k i i s u b s p b ulg a r i c u s S t h e rm o p h i l u s Ke y wor d s ： b o v i n e c o l o s t r u m ； p r o b i o t i c s ； f e rm e n t ； i n h i b i t i o n 0 引 言 人 体 内 的 肠 道 菌 群 在 一 定 情 况 下 可 危 害 人 体 健 康 ， 即若 肠 道 菌 群 平 衡 失 调 ，于 人 体 有 益 的 菌 群 明 显 减 少 而 影 响 人 体 的 正 常 机 能 ；或 是 对 人 体 有 害 的 细 菌 空 前 活 跃 ，在 肠 道 内 大 量 繁 殖 ，释 放 毒 素 ，破 坏 机 体 组 织 ，引 起 肠 道 功 能 紊 乱 ，从 而 使 人 出现 种 种 病 态 。 如 大 肠 杆 菌 可 导 致 人 腹 泻 ；幽 门 螺 旋 杆 菌 ( He l i c o b a c t e r p y l o r i ， Hp ) 易 引 起 慢 性 胃 炎 和 消 化 性 溃 疡 ，同 时 ，Hp也 是 胃癌 的 主要 诱 发 因 子 ；梭 菌 、拟 杆 菌 以 及 种 种 腐 败 性 细 菌 激 增 。可 致 氨 、硫 化 氢 、 胺 类 等 有 毒 物 质 在 肠 道 内 蓄 积 ， 出 现 慢 性 中 毒 加 剧 机 体 的衰 老 进 程 等 收稿 日期 ：2 0 0 5 0 1 一l 0 基金 项 目：国家 十五 重大科 技攻 关项 目( 2 0 0 2 B A0 1 0 ) ； 江苏 省农业 三项 工程 资助项 目( S X( 2 0 0 3 ) 0 4 3 作者 简介 ：张小 平 ( 】 9 8 0 一 ) ，男 ，硕士研 究生 ，从 事乳 品科 学方 面 的 研 究 。 I 10 I 西 由 于 肠 道 病 原 微 生 物 引 起 的 疾 病 如 腹 泻 、 抗 病 力 下 降 等 是 各 类 人 群 的 常 见 病 ， 特 别 是 对 于 免 疫 系 统 发 育 不 成 熟 的婴 幼 儿 ，这 一 情 况 更 为 严 重 ，采 用 抗 生 素 等 合 成 药 物 的 治 疗 有 局 限 性 、又 有 毒 副 作 用 、 耐 药 性 等 等 问 题 ，而 若 以 天 然 的 免 疫 球 蛋 白 及 益 生 菌 来 加 以 预 防 ，则 不 会 出现 这 些 问题 。 牛 初 乳 是指 乳 牛 产 犊 后 3 d内所 分 泌 的乳 汁 ，富 含 免 疫 球 蛋 白( 主 要 为 l g G 抗 体 ) 、生 长 因 子 等 活性 功 能 组 分 ， 能 攻 击 侵 入 人 体 的 致 病 原 ， 与 细 菌 或 病 毒 发 生 凝 集 反 应 ，导 致 细 菌 或 病 毒 的 生 长 和 繁 殖 受 到 抑 制 。 但 是 ，初 乳 的 抑 菌 作 用 仅 仅 是 广 谱 抑 菌 作 用 ，抑 菌 能 力较 弱 益 生 菌 是 一 类 活 的微 生 物 ，主 要 是 作 为 肠 道 内 固有 菌 群 的 补 充 ， 以 帮 助 机 体 消 化 和 防 止 有 害 微 生 物 的 过 度 生 长 ，起 到 促 进 机 体 健 康 的 作 用 。 益 生 菌 在 代 谢 过 程 中 会 产 生 有 机 酸 、 细 菌 素 、过 氧 化 氢 和 类 细 菌 素 等 物 质 。 实 验 室 或 临 床 实 践 研 究 表 明 。这 维普资讯 Re s e a r c h P a p e r s 研究报告 类 物 质 可 以 抑 制 胃肠 道 中 某 些 有 害 微 生 物 如 大 肠 杆 菌 、 沙 门 氏菌 、 幽 门螺 旋 杆 菌 等 生 长 繁 殖 ， 对 致 病 菌 引 起 的肠 道 感 染 、腹 泻 等 疾 病 ，有 预 防 和保 护 作 用 。 本 文 利 用 益 生 菌 发 酵 牛 初 乳 ，研 究 初 乳 的 活 性 因 子 和 益 生 菌 对 致 病 性 大 肠 杆 菌 及 幽 门 螺 旋 杆 菌 的 双 重 抑 制作 用 ， 了解 益 生 菌 发 酵 初 乳 在 不 同 p H 值 下 的 抑 菌 功 效 ， 为 研 制 功 能 性 初 乳 制 品 提 供 参 考 。 1 材 料 与 方 法 1 1 材 料 牛 初 乳 ； 嗜 酸 乳 杆 菌 ； 双 歧 杆 菌 ； 混 合 乳 酸 菌 ( 德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 亚 种 和 嗜 热 链 球 菌 比 为 1 ：2) 、 德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 亚 种 、 嗜 热 链 球 菌 ： ( 扬 州 大 学 乳 品 研 究 所 分 离 保 藏 ) ； 致 病 性 大 肠 杆 菌 ( O1 3 )； 幽 门 螺 旋 杆 菌 ( 1 1 6 3 7) ； 兔 抗 牛 I g G 血 清 ( 自制 ， 效 价 为 1： 6 4 ) 。 1 2 仪 器 精 密 p H 计( P Hs 一2 5) ， 高 速 冷 冻 离 心 机( e p p e n d o r f 5 8 0 4 R ) ， CO2 培 养箱(HE AL F ORCE HF 9 0)， 大 容 量 离 心 机 ， 低 温 冰 柜( BD -I O OL T)， 超 净 工 作 台 ，恒 温 水 浴 锅 。 1 3方法 1 3 1 牛 初 乳 发 酵 牛 初 乳 过 滤 后 4 0 ， 3 5 0 0 xg离 心 脱 脂 ， 然 后 进 行 低 温 长 时 巴 氏杀 菌( 6 3 ，3 0 rai n) ，冷 却 至 4 2 o C左 右 ， 按 3 接 入 益 生 菌 ，于 3 7 c C发 酵 。 1 3 2 琼 脂 双 向 免 疫 扩 散 法 测 定I g G 活 性 中 心 孔 加 入 效 价 为 1 ：6 4 的 抗 血 清 ， 周 边 孔 分 别 加 入 经 倍 比稀 释 的发 酵 初 乳 3 7 c c放 置 2 4 h，以 出 现 清 晰 沉 淀 线 的 最 高 稀 释 度 记 为 I g G 活 性 。 1 3 3发 酵 初 乳 对 大 肠 杆 菌 的 抑 制 将 致 病 性 大 肠 杆 菌 接 种 于 营 养 肉 汤 培 养 基 中 ， 3 7 振 荡 培 养 1 0 h左 右 ，平 板 计 数 法 确 定 菌 液 浓 度 达 到 1 0 1 0 。 mL。 将 配 制 好 的 营 养 肉 汤 液 体 培 养 基 分 装 于 1 0 0 mL 三 角 瓶 中并 加 棉 塞 1 2 1 o C，2 0 mi n灭 菌 。 将 活 化 的 大 肠 杆 菌 液 按 1 ( 体 积 分 数 ) 接 入 各 液 体 培 养 基 中 。 然 后 将 发 酵 初 乳 以 最 终 I g G 质 量 浓 度 约 1 g L 的 量 加 入 三 角 瓶 中 ，终 体 积 均 为 4 0 mL置 3 7 恒 温 培 养 箱 培 养 ，每 2 h振 荡 一 次 ，1 2 h后 作 标 准 平 板 计 数 ，确 定 抑 菌 率 。 同 时作 空 白对 照 。 抑 菌 率 公 式 为 ： 抑 菌 率 = ( t小 时 后 对 照 组 菌 数 一t小 时 后 实 验 组 菌 数 ) t小 时 后 对 照组 菌 数 X1 0 0 1 3 4发 酵 初 乳 对 幽 门 螺 旋 杆 菌 的 抑 制( AW DA) 将 冻 融 后 的 幽 门 螺 旋 杆 菌 吸 取 少 量 于 S k i r r o w 氏 培 养 基 表 面 ，稍 推 开后 ，置 于 密 封 罐 中 3 7 o C、微 氧 环 境 培 养 。 用 灭 菌 生 理 盐 水 将 培 养 皿 表 面 的 菌 落 洗 脱 下 来 ，使 其 浓 度 控 制 在 1 0 s 1 0 e mL。 吸 取 菌 液 0 5 mL 于 培 养 基 平 板 上 ， 用 无 菌 涂 抹 棒 ，于 超 净 工 作 台 内通 无 菌 空 气 ，放 置 1 h，待 表 面 的 菌 液 固 定 后 打 孔 ， 孔 的 直 径 4 I T I 1 T 1 ， 孔 深 3 IT I I T 1 ， 将 发 酵 初 乳 注 至 满 孔 ， 不 可 溢 出 ， 于 3 7 o C微 需 氧 环 境 培 养 4 8 h，观 察 结 果 、 测 量 抑 菌 圈 直 径 。 判 定 标 准 ： 抑 菌 圈 直 径 4 n 1 n 1为 不 敏 感 ； 直 径 5 8 I T I 1T 1 低 度 敏 感 ； 8 1 2 I T I 1 T 1中 度 敏 感 ； 直 径 1 2 1T I 1 T I为 高 度 敏 感 。 2结 果 与 讨 论 2 1初 乳 发 酵 不 同 p H 值 I g G 活 性 变 化 初 乳 经 混 合 乳 酸 菌 发 酵， 分 别 在p H 值 6 2 ， 6 0， 5 8， 5 6， 5 4， 5 2， 5 0， 4 8， 4 6 取 样 ， 经 琼 脂 糖 双 向 免 疫 扩 散 法 测 定 其 中 I g G 活 性 的 变 化 情 况 同 时 以 酸 沉 淀 法 作 对 比 ，结 果 如 图 1所 示 。 蜒 0 b o p H值 口发 酵 ； _酸 沉 淀 图 1 发 酵初乳 不 同 p H值 I g G活性 变化 从 图1可 以 看 出 ， 由 于 混 合 乳 酸 菌 发 酵 产 酸 ， 导 致 p H 值 降 低 ，发 酵 初 乳 中 I g G 活 性 也 相 应 的 降 低 。 在 p H 值 为 4 8处 ，初 乳 已 成 凝 固 状 ，p H 值 降 低 到 4 6， 其 I g G 活 性 降 低 至 初 乳 的 2 5 ， 但 仍 是 酸 沉 淀 法 的 一 倍 。说 明 p H 值 对 初 乳 中 的 I g G 活 性 有 一 定 的 影 响 ， 这 可 能 是 由 于 在 低 p H 值 环 境 中 ， I g G 的空 间 构 象 已经 发 生 部 分 变 化 ， I g G 的 轻 链 遭 到 破 坏 ， 而 轻 链 ( 可 变 区 ) 的 完 整 性 是 I g G 保 持 其 活 性 的 条 件 之 一 。 2 2不 同 益 生 茵 发 酵 初 乳 对 致 病 性 大 肠 杆 菌 的 抑 制 在 不 同 p H 值 对 发 酵 初 乳 取样 ，进 行 抑 制 大肠 杆 菌 实 验 结 果 如 图 2所 示 姆 困 最 p H值 嗜酸 乳 杆 菌 ； 双 歧 杆 菌； 混 合 乳酸 菌 ； 德 氏乳 杆菌 保 加 利 亚亚 种 ； O嗜热 链 球 菌 图 2 不 同益 生菌发 酵初 乳对 大肠杆 菌 的抑制作 用 f 3 3， N o 3 2 0 0 5 I I 维普资讯 研 究报告 Re s e a r c h P a p e r s 经 测 定 初 乳 的 p H 值 为 6 2 4，初 乳 对 大 肠 杆 菌 的 抑 制 率 为 5 6 4 。 从 图 2 中 可 以 看 出 ， 益 生 菌 发 酵 初 乳 的 抑 制 作 用 均 比 初 乳 的 抑 制 作 用 强 ， 这 是 由 于 益 生 菌 与 初 乳 共 同 抑 制 大 肠 杆 菌 的 结 果 。 不 同益 生 菌 发 酵 初 乳 对 大 肠 杆 菌 的 抑 制 作 用 以 嗜 酸 乳 杆 菌 发 酵 初 乳 最 强 ， 在 p H 值 为 5 4时 ，抑 菌 率 最 高 达 到 8 3 2 ，较 初 乳 的 抑 制 作 用 提 高 4 7 5 2 ； 双 歧 杆 菌 发 酵 初 乳 其 次 ，在 p H 值 为 5 4时 ，抑 菌 率 最 大 达 到 8 0 4 较 初 乳 相 应 提 高 4 2 5 5 ，均 明 显 的 高 于 混 合 乳 酸 菌 、德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 亚 种 以 及 嗜 热 链 球 菌( P 0 0 1 ) 。 肉 眼 观 察 1 2 h 的 培 养 物 时 ， 对 照 组 呈 现 均 匀 的 混 浊 现 象 属 于 大 肠 杆 菌 在 培 养 基 中 的 正 常 生 长 繁 殖 现 象 。 而 试 验 组 则 出现 凝 集 沉 淀 现 象 ，上 清 液 相 对 透 明 ， 颜 色 较 对 照 组 淡 ， 说 明 了 益 生 菌 发 酵 初 乳 对 大 肠 杆 菌 具 有 较 强 的 抑 制 作 用 。 2 ， 3不 同 益 生 菌 发 酵 初 乳 对 致 病 性 幽 门 螺 旋 杆 菌 的 抑 制 在 不 同 p H 值 对 发 酵 初 乳 取 样 ，进 行 抑 制 幽 门 螺 旋 杆 菌 实 验 ，每 样 做 2个 平 行 ，观 察 孔 内发 酵 初 乳 对 致 病 性 幽 门 螺 旋 杆 菌 的抑 制 作 用 。 结 果 发 现 ，孔 洞 周 围 一 圈 无 幽 门 螺 旋 杆 菌 生 长 ， 在 光 线 下 呈 透 明 状 ， 说 明 发 酵 初 乳 对 幽 门 螺 旋 杆 菌 有 抑 制 作 用 。 测 量 发 现 不 同 益 生 菌 、不 同 p H 值 对 应 的发 酵 初 乳 抑 菌 圈大 小不 等 ，具 体 结 果 如 图 3和 图 4所 示 。 图 3 婷 ：醢 是 为 1 1 3 l m与 图 4中 p H 值 为 6 2处 的 抑 菌 圈 直 径 相 当 。 从 图 中 可 以 看 出 ， 益 生 菌 发 酵 初 乳 的 抑 菌 圈 直 径 均 比 初 乳 的 抑 菌 圈 直 径 大 ， 表 明 发 酵 初 乳 比 初 乳 的 抑 制 作 用 强 ， 这 同 样 是 由 于 益 生 菌 与 初 乳 共 同 作 用 的 结 果 。 由 图 4所 示 ， 抑 制 作 用 最 强 的 为 嗜 酸 乳 杆 菌 ， 在 p H 值 为 5 6 时 ， 抑 菌 圈 直 径 最 大 达 到1 7 2 r n K n， 较 初 乳 的 抑 制 作 用 提 高 5 2 2 1 ；双 歧 杆 菌 发 酵 初 乳 其 次 ， 在 p H 值 为 5 2时 ，抑 菌 圈 直 径 最 大 达 到 1 6 3 i n n 1 ， 较 初 乳 相 应 提 高 4 4 2 5 ， 都 属 于 高 度 敏 感 。 它 们 均 明 显 的 高 于 混 合 乳 酸 菌 、德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 亚 种 以 及 嗜 热 链 球 菌( P0 0 1 ) 。 3 结 论 ( 1 )初 乳 经 益 生 菌 发 酵 ， 由 于 益 生 菌 发 酵 产 酸 ， 导 致 p H 值 降 低 初 乳 中 I g G 活性 也 相 应 的 降 低 。 发 酵 初 乳 p H 值 降 低 到 4 6时 ， 其 I g G 活 性 仅 为 初 乳 的 2 5 。 ( 2)不 同 益 生 菌发 酵 初 乳 在 不 同 p H 值 对 致 病 性 大 肠 杆 菌 及 幽 门 螺 旋 杆 菌 均 有 抑 制 作 用 ， 且 均 较 初 乳 抑 制 作 用 强 。本 实 验 中 嗜 酸 乳杆 菌 发 酵 初 乳 的 抑 制 作 用 最 强 其 对 大 肠 杆 菌 的抑 制 率 最 高 达 到 8 3 2 对 幽 门 螺 旋 杆 菌 的 抑 菌 圈 直 径 最 大 达 到 1 7 2 t 1 埘 较 初 乳 的 抑 制 作 用 分 别 提 高 4 7 5 2 和 5 2 2 1 。 其 次 是 双 歧 杆 菌 、 混 合 乳 酸 菌 、德 氏乳 杆 菌 保 加 利 亚 亚 种 以 及 嗜 热 链 球 菌 。 益 生 菌 发 酵 初 乳 对 以上 致 病 菌 的 抑 制 作 用 ， 一 方 面 是 由 于 初 乳 中 的 活 性 因 子 免 疫 球 蛋 白等 对 致 病 菌 本 身 就 有 抑 制 作 用 ，另 一 方 面 由 于 益 生 菌 的 繁 殖 ， 产 生 有 机 酸 、细 菌 素 等 物 质 抑 制 了 致 病 菌 的 生 长 繁殖 。 不 同 益 生 菌 发 酵 初 乳 的抑 制 作 用 随 着 p H 值 的 降 低 ，先 升 高 后 降 低 ，这 是 因 为 益 生 菌 的 大 量 繁 殖 导 致 抑 菌 作 用 增 强 ， 但 益 生 菌 过 了 稳 定 生 长 期 后 又 开 始 衰 退 ， 抑 菌 效 果 也 就 相 应 的 下 降 。 抑制4 展 望 pH值 嗜酸乳 牛 T 菌 ； _ 双歧 + 下 菌； 混合乳 酸菌 ： 德 氏乳杆菌保 加利亚 亚种 ； O嗜热链球 菌 图 4 不 同益 生菌 发酵初 乳 对幽 门螺旋杆 菌 的抑制 作用 经 测 定 初 乳 对 幽 门 螺 旋 杆 菌 的 抑 菌 圈 直 径 平 均 初 乳 是 哺 乳 动 物 提 供 给 幼 仔 的 最 初 食 物 具 有 抗 菌 、 抗 病 毒 、 抗 毒 素 等 多 种 免 疫 功 能 ， 大 自然 中 尚 未 发 现 其 他 物 质 这 样 有 益 于 动 物 的 健 康 成 长 。 同 时 ， 在 发 酵乳 制 品 中应 用 益 生 菌 已 越 来 越 受 到 人 们 的 欢 迎 更 多 的 消 费 者 十 分 关 注 益 生 菌 的健 康 促 进 效 应 。 因 此 ， 随 着 我 国 功 能 性 食 品 法 规 的 不 断 完 善 配 合 日益 发 展 的 乳 品行 业 ，跟 随 全 球 保 健 食 品 潮 流 功 能 性 初 乳 制 品 将 逐 渐 成 为 研 究 热 点 ， 具 有 广 阔 的 发 展 前 景 。 参 考 文 献 ： 【 1 】 顾瑞霞 乳与乳制品的生理功能特性【 M 北京 ： 轻工业出版社， 2 0 0 0 ( 下 转 第 2 1 页 ) I 2 不 加 鸺 H 加 4 0 维普资讯 Re s e a r c h P a p e r s 研究报告 【 5 0 】 张 龙翔 生化 实验方 法和技 术【 M】 北 京 ： 中国教育 出版 社 ， 1 9 8 2 【 5 1 】周 光 炎 免疫 学 原 理 【 M】 上 海 ： 上 海 科 学 技 术 文献 出版 社 ， 2 0 0 0： 1 6 5 -1 6 8 5 2 】 周 顺伍 动物 生物 化学【 M】 北 京 ： 中国农业 出版 社 ， 2 0 0 2 【 5 3 】周顺 伍 动 物生物 化学 实验指 导 【 M】 一E 京 ： 中国农业 出版 社 ， 2 0 0 2 【 5 4 】 朱明哲 田问试验及统计分析【 M】 北京： 中国农业出版社， 2 0 0 2 【 5 5 】 B E C K L R， Z I MME R 3 M AN V S t o ll e i m mu n e m i l k U 】 S t o ll e Mi l k Bi o l og i c s I nt e rna t i on a l， 1 98 9， 1 8 71 8 9 5 6 l BRANDON M R， WATS ON D L ， L AS CE L L E S A K Th e me c h a n i s m o f c o ws U Au s t Bi o l Me d S c i ， 1 9 7 1 ， 4 9 ： 6 1 3 6 2 3 【 5 7 】 BROCK J M， A RZA BE F R ， P I NEI RO A，e t a1Th e e ff e c t o f t r y p s i n a nd c h y mo t r y p s i n o n t he ba c t e ric i d a l a c t i v i t y a n d s p e c i fi c a n tib od y a c ti v i t y o f b o v i n e c o l o s t r u ms J I mmu n o l o g y ， 1 9 7 6 ， 3 2 ： 2 0 7 2 1 3 【 5 8 】BUTL E R T E P a s s i v e i mmu n i ty a n d i m mu n o g l o b u li n d i v e i ty I n ： I n d i g e n o u s【 A 1 An t i i n i c r o b i al Ag e n ts o f MI 1 k Re c e n t De v e l o p me n t ， P 1 4 -5 0 c I n t e r n a t i o n al Da i r y F e d e r a t i o n ， 4 1 ，Br u s s e l s ， 1 9 9 4 【 5 9 BUTL E R J E Bo v i n e i mmu n o g l o b u li n s ： a n a u g me n t e d r e v i e w 【 A】 Ve t e ma ry I mmu n o l o g y a n d l mmu n o p a t h o l o g y ， 4 ： 4 3 1 5 2【 q E l s e v i e r s c i e n c e p u bli s he r s ， Am s t e r d a m ， 1 98 3 【 6 0 】 CA M P B E L L B， P E TE RS E N W E Di a t h e l i c i mmu n i z a ti o n a ma t e rnal opr i n g r e l a tio n s hi p i n vo l v i n g mi l k a n ti bo d i e s ，S c i e n c e ， 1 9 5 7 ， 1 2 5 ： 93 2-9 3 3 【 6 1 】CA RROL L E J ，CR ENS HA W G L Ba c t e ri c i d a l a c n v i ty o f b o v i n e ne on a t a l s e rums o f s e l e c t e d c ol i f o n1 】 ba c t e ri a i n r e l a ti on t o t o t al p r o t e i n i mmu n o g l o b u l i n G1 a n d i mmu n o l o b u li n Mc o n e e n t r a t i o n sj 1 Am J V e t As s o c ， 1 9 7 6 ， 3 7 ： 3 8 9 3 9 4 【 6 2 H AMME R D K， KI CHHOF E N B， S CHMI D T De t e c t i o n o f ho m o c y t o t r op i c a n fb od y a s s oc i a t e d wi t h a un i q ue i mm u no g l o b uli n c l a s s s p e c i e s J E u r J l mmu n o l ， 1 9 7 1 ， ( 1 ) ： 2 4 9 2 5 8 【 6 3 】HI L P E RT H F o o d a n d I mmu n o l o g y S y rup S we d 【 M】 Nu t r F o u n d ， 1 9 7 7 (上 接 第 1 2页) 2 1傅维 琦 牛 初乳 中主要 生 物 活性 物 质 开 发的 最新 进 展 u 1 食 品 与发 酵 工业 2 0 0 3 2 9 ( 4 ) ： 7 6 7 9 【 3 】张和平 ， 郭军 ， 李立 民， 等 牛初 乳 中免疫 球蛋 白的测定 o 】 中国乳 品工 业， 2 0 0 1 ， 2 9 ( 2 ) ： 2 2 2 4 f 4 】 王钦 富 免 疫学 及 免疫学 检验 实验 技 术 【 M】 北 京 ： 中 国医 药科 技 出 版社 1 9 9 5 ： 2 1 2 2 【 5 】郭 本 恒 ， 骆 承庠 牛 初 乳 免疫 球 蛋 白变 性 动 力 学 研 究 U 食 品科 学 ， I 9 9 6 ， 1 7 ( 7 ) ： 1 0 1 3 【 6 】顾瑞 霞 ， 谢 继志 乳 酸菌与 人体保 健【 M】 北京 ： 科学 出版 社 ，1 9 9 5 【 7 】曹劲 松 ， 王 晓 琴 牛初 乳 功 能 食 品 的 开 发 现 状 和 前景 硼 食 品 科 学 ， 1 9 9 5 ，( 5 ) ： 1 4 -1 7 【 6 4 】 L OGAN E F ， P ENHA L E W J S t u d i e s o n t h e i mmu n i ty o f the c a l f t o c o li b a c i U o s i s J T h e Ve t Re c o r d ， 1 9 7 2 ， 9 1 ： 4 1 9 4 2 3 【 6 5 】 V A N M H R e g e n m o r t e l U 】 Wo r l d P o u l t r y ， 1 9 9 4 ， 1 0 ( 1 2 ) ： 6 7 【 6 6 】NE WB Y T J ， BOURNE F J Th e n a t u r e o f t h e l o c d i n mmn e s y s t e m o f the b o v i n e ma mma r y g l a n d j J l mmu n o l ， 1 9 9 7 ， 1 1 8 ：4 6 1 4 6 5 【 6 7 】 OT A NI H L e b e n s m i t t e l Wi s s e n s c h a f t u n d T e c h n o l o gi e 】 1 9 9 1 ， 2 4 ( 2 ) ： 1 5 2 【 6 8 】P ANG A S D， A S TON W P Th e a l t e r n a ti v e c o mp l e me n t p a t h wa y i n b o v i n e s e rum：Th e i s o l a ti o n o f a s e rum p r o t e i n wi 七 h f a c t o r B a c t i vity田 1 r mn un o c h e mi s t r y ， 1 9 7 8，1 5 ： 5 2 9 5 3 4 【 6 9 】P E TE RS E N W E ， MI N N S P ，CA NY B Me t h o d o f P r o d u c i n g An ti b o die s i n Mi l k M U S P a t e n t ， 1 9 6 8 ： 3 ， 3 7 6 ， 1 9 8 【 7 0 】S A S AKI M， DAVI S C L ，L ARS ON B L P r o d u c ti o n a n d t u rno v e r o f I g G1 a n d l g G 2 i m mu n o g l o b u l i n s i n t h e b o v i n e a r o u n d p a r t u r i ti o n J J Da i ry S c i ， 1 9 7 6， 5 9 ： 2 0 4 62 0 5 5 【 7 1 】 S C I C C HI T A NO R， H US B A ND A J ， C RI P P S A W B il i a r y a n s p o r o f s e rum I g A i n s h e e p J I mmu n o l o gy， 1 9 8 4 ， 5 3 ： 1 2 1 1 2 9 【 7 2 1 S H E L D R A K E R F ， HU S B A N D A J I m mu n e d e f e n c e s a t m u c o s a l s u r f a c e s i n rumin a n ts田 J Da i ry Re s ， 1 9 8 5 ， 5 2 ： 5 9 9 6 1 3 【 7 3 S H E L D R A K E R F ， H US B A N D A J ，WA T S ON D L ， e t a1 S e l e c ti v e t r a n s p o r t o f s e D A m d e ri v e d I g A i n t o mu c o s al s e c r e ti o n s J J l mmu n o l ， 1 9 8 4 ， 32 ： 3 6 3 -3 6 8 【 7