三体综合征产前诊断.ppt

案例一 遗传病的产前诊断,产前诊断是在遗传咨询的基础上，主要通过遗传学检测和影像学检查，对高风险胎儿进行明确诊断，通过对患胎的选择性流产达到胎儿选择的目的，从而降低出生缺陷率，提高优生质量和人口素质。产前诊断又称宫内诊断。它是为了了解胎儿在子宫内的健康情况，有无先天性畸形或遗传病，用某些特殊检查方法在子宫内对胎儿进行诊断，以便及早采取措施避免残疾儿的出生，提高出生人口的素质，是有生学的重要组成部分。,产前诊断对象,35岁以上的高龄孕妇； 夫妇双方有一人为染色体畸变，或曾生育过染色体异常患儿的孕妇； 曾生育过单基因遗传病患儿的孕妇、已知或推测为AR或XR遗传病携带者的孕妇夫妇； 夫妇之一有开放性神经管畸形，或出生过这种畸形患儿的孕妇； 有原因不明的自然流产史、畸胎史、死胎及新生儿死亡史的孕妇； 具有遗传病家族史又系近亲婚配的孕妇； 夫妇之一有致畸因素接触史的孕妇； 羊水过多、宫内生长发育迟缓或疑为严重宫内感染的孕妇,产前诊断方法,1.X线检查 2.超声波检查 3.胎儿镜 4.羊膜穿刺术 5.绒毛吸取术 6.脐带穿刺术 7.孕妇外周血分离胎儿细胞 8.植入前诊断,一、实验目的,掌握遗传病的产前诊断过程，通过对21三体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现代技术解决医学实际问题的能力。,二、实验原理,1. 羊水中有一定数量胎儿脱落细胞，通过羊膜穿刺获取羊水中的胎儿细胞，经体外培养后通过G显带实验进行核型分析，判断染色体是否畸形，诊断是否患有21三体综合征。,2. G显带是指以Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。,三、实验材料、试剂及器材,（1）器材：离心管，离心机，天平，37温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，滴管。 （2）药品：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,取材,1、腹部备皮，排光膀胱，平卧位常规消毒后铺无菌洞巾。 2、麻醉，一般不必需要，精神紧张者或可用普鲁卡因或利多卡因麻醉。,取材,3、选择穿刺部位，经B超胎盘定位后避开胎盘。 中期妊娠时，一般选择在耻骨联合上3横指相当于子宫下段处，于腹中线或其左右侧旁，扪及囊样感的部位做穿刺；也可于宫底与耻骨联合连线中点或左右任何一侧穿刺。 晚期妊娠时，先扪清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎儿颈背部空隙处或胎儿肢体侧空隙处穿刺。,取材,4、确定穿刺部位后，以2021号腰椎穿刺针垂直刺入腹壁，通过腹壁及宫壁两次阻力，当有落空感时即进入羊膜腔，抽出芯针，见羊水溢出，接上注射器，顺利抽得清亮羊水，再次证实在羊膜腔内后，可注射药物。如欲做羊水检查，则抽取羊水20ml立即送检。 5、穿刺完毕后拔出穿刺针，局部压迫5分钟，穿刺部位敷以无菌纱布，胶布固定。,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,细胞体外培养,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,制片,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,显带,1、将制好的染色体标本，置7275烤箱中烤片3h。 2、放入预温至37的0.025%胰酶溶液中（pH=7.27.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。,显带,3、在Giemsa 染液中染色10min，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。 4、镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析,四、实验步骤,取材 体外细胞培养 制片 显带 核型分析,核型分析,纯 合 型,核型分析,易 位 型,核型分析,五、注意事项,（1）胰蛋白酶浓度和处理时间随气温高低有所不同。一般规律是标本存放时间越长，在胰蛋白酶当中处理时间越长。太新鲜的标本，染色体会出现毛茸现象。片龄很长的标本往往会导致斑点状的染色体。 （2）胰蛋白酶温度：温度越高，反应的速度就越快，一般是室温，但温度必须稳定至少20min。 （3）胰蛋白酶处理的时间：如果细胞呈紫蓝色，说明胰蛋白酶的作用时间不够，如果细胞呈桃红色，说明作用时间刚好。,结果判断,(1)标准型 占患者总数的92.5%，患儿体细胞染色体有47条，有一条额外的21号染色体，核型为47，XX（或XY）+21。其发生机制为亲代（多为母亲）的生殖细胞在减数分裂时染色体不分离所致。,结果判断,(2)嵌合型 仅占21-三体综合征的2.5%-5%，是指受精卵在有丝分裂期间染色体不分离而导致的，因此只是部分而不是所有的细胞存在缺陷。患儿体内含有正常和21-三体细胞二种细胞株，形成嵌合体，核型为46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其临床表现随正常细胞所占百分比而定。嵌合型的患儿的智商较其它两型高，临床并发症的发生率也相对较少。,结果判断,(3)易位型 约占全部病例的2.5%5%，多为罗伯逊易位，即着丝粒融合，其额外的21号染色体长臂易位到另一近端着丝粒染色体上。最常见为D/G易位，D组中以14号染色体为