GBT18932.2-2002蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法薄层析法.pdf

I C S 6 7 . 1 8 0 . 1 0 X 3 1 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 1 8 9 3 2 . 2 -2 0 0 2 蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法 薄 层 色 谱 法 Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f h i g h f r u c t o s e s t a r c h s y r u p i n h o n e y - T h i n - l a y e r c h r o ma t o g r a p h i c me t h o d 2 0 0 2 一 1 2 一 3 0 发布 2 0 0 3 一 0 6 一 0 1 实施 中华人民共和国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布 GI 3 / T 1 8 9 3 2 . 2 -2 0 0 2 月q舀 G B / T 1 8 9 3 2 -2 0 0 2分为 1 2个部分， 本部分为第 2部分。 G B / T 1 8 9 3 2的本部分修改采用美国公职分析化学师协会( A O AC ) 官方方法 9 7 9 . 2 2 ( 蜂蜜中高果 糖淀粉糖浆薄层色谱测定法 ( 英文版) 。本部分在技术内容上与该方法一致， 但是考虑到我国标准 本身的特点及汉语表达习惯， 为使 G B / T 1 8 9 3 2的本部分既与国际标准接轨， 又适合我国国情， 为此， 对 A OA C官方方法 9 7 9 . 2 2 的个别内容作了编辑性修改。 本部分遵循GB / T 1 . 1 -2 0 0 0 标准化工作导则第 1部分: 标准的结构和编写规则 和 G B / T 2 0 0 0 1 . 4 -2 0 0 1 标准编写规则第 4部分: 化学分析方法 的编写规则。 本部分的附录八是规范性附录， 附录 B是资料性附录。 本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本部分由中华全国供销合作总社归口。 本部分负责起草单位: 中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本部分参加起草单位: 国家蜂产品质量监督检验中心。 本部分主要起草人 : 庞国芳 、 范春林、 曹彦忠、 张进杰、 李学民、 曾纪淡、 李子健。 本部分系首次发布的国家标准。 GB/ T 1 8 9 3 2 . 2 -2 0 0 2 蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法薄层色谱法 范 围 G B / T 1 8 9 3 2 的 本部分规定了蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的薄层色谱测定方法。 本部分适用于各种蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的测定 本部分在 点 样量为 2 u L时， 其检出限为1 0 %; 在点样量为6 k L时， 其检出限可达 5 %0 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 G B / T 1 8 9 3 2的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件， 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本部分， 然而， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件， 其最新版本适用于本 部分 。 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法( n e q I S O 3 6 9 6 : 1 9 8 7 ) 3 原 理 试样中的高分子糖， 经活性炭一 硅藻土柱的富集、 浓缩， 再用薄层色谱法分离、 检测， 经与掺有一定含 量高果糖淀粉糖浆的纯蜂蜜比较， 来判定蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的存在。 试 荆和材料 除非另有说明， 所用试剂均为分析纯， 水为 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2中规定的一级水。 4 . 1 无水乙醇 。 4 . 2正丁醇 。 4 . 3乙酸 。 4 . 4丙酮 。 4 . 5 磷酸: 优级纯。 4 . 6 8 5 %磷酸。 4 . 7 活性炭: D a r c o G - 6 0 或相当者， 1 0 0目。 4 . 8 硅藻土: C e l i t e 5 4 5 助滤剂或相当者。 4 . 9 二苯胺盐酸盐( C . A. S . : 5 3 7 - 6 7 - 7 ) , 4 . 1 0 苯胺: 重蒸馏。 4 . 1 1 乙醇溶液( 7 +9 3 ) : 移取3 5 mL无水乙醇至5 0 0 mL试剂瓶中， 加人 4 6 5 m1水混匀。 4 . 1 2 乙醇溶液( 1 +3 ) : 移取 1 2 5 mL无水乙醇至5 0 0 mL试剂瓶中， 加人 3 7 5 m工水混匀。 4 . 1 3 乙醇溶液( 1 +1 ) : 移取 2 5 0 n i l无水乙醇至5 0 0 mL试剂瓶中. 加人 2 5 0 mL水混匀。 4 . 1 4 薄层展开剂: 正丁醇+乙酸+水( 2 +1 +1 ) , 4 . 1 5 显色剂: 称取 1 . 0 g 二苯胺盐酸盐( 4 . 9 ) 至盛有 5 0 . 0 mL丙酮( 4 . 4 ) 的烧杯中， 再加人 1 mL苯胺 ( 4 . 1 0 ) ， 混合搅拌， 同 时加人5 m L 8 5 %的磷酸( 4 . 6 ) ， 完全溶解后， 冷冻保存或使用当日 配制。 4 . 1 6 薄层层析板: 硅胶 G板2 0 0 mm X 2 0 0 mm， 膜厚0 . 2 5 mm， 用前在 1 1 0 活化 1h 后， 置于干燥器 中放冷至室温， 备用。 I GB / T 1 8 9 3 2 . 2 -2 0 0 2 5仪器 5 . 1 真空干燥箱 可调节温度( 6 5 士2 ) 0 C， 真空度 2 6 k P a - - 3 3 k P a 52 恒温干燥箱。 5 . 3 旋转蒸发器 5 . 4 玻璃喷雾器: 薄层色谱用。 5 . 5 真空抽气泵: 可调真空度 。 一1 0 0 k P a , 56 薄层色谱展开槽 5 . 7 微量注射器: 1 0琳 。 5 . 8 分析天平: 感量 。 . 0 0 0 1 g . 5 . 9电吹风机 。 5 . 1 0 活性炭柱: 按附录A中图 A . 1 所示， 在内径 2 0 m m- - 2 2 m m， 长 3 0 0 mm-4 0 0 m m的玻璃管的 底部塞少量的玻璃棉， 关掉活栓后加水到玻璃管的中部， 然后放水除去玻璃棉中的气泡至水量约 1 0 mL 时关掉活栓。在小烧杯中称取 2 . 09的硅藻土( 4 . 8 ) ， 加人少量的水搅拌后注人管中， 自然沉降后在玻 璃棉的上方堆积成约 1 c m厚的硅藻土层， 然后称取活性炭( 4 . 7 ) 和硅藻土混合物( 1 +1 ) 1 2 g ， 加人 工 5 0 mL 的水搅拌后注人管中。打开活栓， 在真空抽气泵的吸引下使活性炭混合物沉降堆积。水面到达 柱面 1 c m时关掉活栓， 用玻璃棒除去沾在管壁的混合物， 再次注人用水混合后的2 . 0 g 硅藻土， 让其 自 然沉降后， 在真空抽气泵吸引下， 用 5 0 0 mL水预洗活性炭柱， 通过调节真空抽气泵的真空度控制流速 在8 . 5 m L / mi n左右。液面到达柱上 1 c m时关掉活栓， 备用。应在使用前填装， 如暂时不用， 可用乙醇 溶液( 1 +1 ) 2 0 0 mL浸泡， 用前再用 2 5 0 mL水预洗。 6 试样制备与保存 6 . 1 试样的制备 对无结晶的实验室样品， 将其搅拌均匀。对有结晶的样品， 在密闭情况下， 置于不超过 6 0 的水浴 中温热， 振荡， 待样品全部融化后搅匀， 迅速冷却至室温。分出。 . 5 k g作为试样。制备好的试样置于样 品瓶中， 密封， 并标明标记 6 . 2 试样的保存 将试样于常温下保存。 7分析步骤 7 . 1 样品前处理 在 5 0 mL烧杯中称取 1 g试样， 精确到 1 m g , 溶于 1 0 mL水后， 缓慢加到活性炭柱( 5 . 1 0 ) 上， 打开 活栓， 在真空抽气泵吸引下， 使试料溶液通过柱子。分两次各用 5 mL水冲洗烧杯后， 冲洗液也加人柱 中， 液面下降到柱面上端时应关闭活栓， 停止吸引， 不要抽干液体。量取乙 醇溶液( 7 + 9 3 ) 3 0 0 m 1 加到 活性炭柱中， 真空抽吸控制流速在8 mL / mi n 左右， 弃掉流出液。然后再加人乙醇溶液( I 十1 ) 1 0 0 ML , 在同样条件下洗脱， 洗脱液全部收集在 2 0 0 mL在干燥器中干燥恒重过的茄形瓶中。用旋转蒸发器在 8 0 水浴中蒸干， 把茄形瓶放人真空干燥箱， 在 6 5 0C, 2 6 k P a -3 3 k P a 减压条件下， 干燥 3 0 m i n 。干燥 后把茄形瓶取出放入干燥器中放冷至室温， 称取茄形瓶的质量， 计算出溶出物的质量 以每1 0 m g 溶出 物加0 . 1 m L 水的比例加人一定量的 水溶解 后， 作为薄层层析用点样液。 7 . 2 薄层层析 用1 0 p L 微量注射器在距离薄层板下端 2 . 0 c m的位置， 点上 2 . 0 p L - - 6 . 0 p L ( 2 X3 p L或 3 X2 p L ) 的点样液， 同时水平间隔2 c m， 点上同样量经过同样处理的纯蜂蜜和含有 5 %, 1 0 %糖浆的蜂 蜜的标准液( 标准液可以一次制备冷冻保存 ， 长期使用) 作为对照。把薄层板放人展开槽中( 薄层展开 c1 3 / T 1 8 9 3 2 . 2 -2 0 0 2 前， 展开槽用展开剂蒸气预饱和 1 5 mi n ) ， 按倾斜上行法展开， 当展开剂前沿到达薄层板顶端时， 从展开 槽中取出薄层板， 用吹风机把展开剂完全吹散后， 把显色剂( 4 . 1 5 ) 均匀喷雾在薄层板上， 等显色剂完全 蒸发后， 放人9 0 C-9 5 的恒温干燥箱中烘 7 m m- 1 0 mi n 使之显色。 7 . 3 结果判定 纯蜂蜜在 R 值 。3 5以上的区域只有 2 - - 3 个蓝色中带灰色或咖啡色的斑点， 相比较搪浆或混有糖 浆的蜂蜜却是从原点开始呈现蓝色带状样的斑点群。参见附录 1 3 中图 1 1 . 1 混有糖浆 5 %的蜂蜜， 如果 点样 6 K L ， 可出现混有糖浆蜂蜜一样的特点因此， 假如从原点开始到尺 值 。 . 3 5附近有蓝色带状斑 点群出现， 应考虑可能混有由淀粉转化来的高果糖淀粉糖浆， 此时判定阳性应经过下面的确证试验。 确证试验: 按 7 . 1 进行样品前处理时， 用乙醇溶液( 7 十9 3 ) 3 0 0 ml冲洗活性炭柱后， 再用乙醇溶液 ( 1 +3 ) 1 0 0 mL冲洗， 最后用乙醇溶液C十1 ) 1 0 0 mL洗脱， 这样得到的样液如果在原点和 R ， 值 0 . 3 5 之 间仍然出现蓝色带状斑点群， 就可以判定阳性。 8结 果表述