GB-T5009.191-2003食品中3-氯-l,2-丙二醇含量的测定.pdf

I CS 6 7 . 0 4 0C 5 3中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B / T 5 0 0 9 . 1 9 1 -2 0 0 3食品中3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇含量的测定D e t e r m i n a t i o n o f 3 - m o n o c h l o r o - 1 ， 2 - p r o p a n e - d i o l i n f o o d s2 0 0 3 - 0 8 - 1 1 发布2 0 0 4 - 0 1 - 0 1 实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部六中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 “免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 1 - 2 0 0 3前 日 目 本标准修改采用了国际分析化学家协会（ A O A C I n t ） 方法A O A C 2 0 0 0 . O H食品中3 - 抓- 1 , 2 一 丙二醇的质谱检测方法）) ( D e t e r m in a t io n o f 3 - m o n o c h lo r o p r o p a n e - 1 , 2 - d io l in f o o d in g r e d ie n t u s in g m a s s s p e c -t r o m e t r i c d e t e c t i o n ) ( 2 0 0 0 年英文版） 。 本标准与 A O A C 2 0 0 0 . 0 1 主要区别是： 本标准方法的测定限为 5 p g / k g , A O A C 2 0 0 0 . 0 1 的测定限为 1 0 j .g / k g . 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准由卫生部食品卫生监督检验所归口。 本标准起草单位： 中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所、 北京市疾病预防控制 中心、 江苏省疾病预防控制中心、 重庆市疾病预防控制中心。 本标准主要起草人： 吴永宁、 赵云峰、 赵京玲、 涂晓明、 马永建、 赵舰 、 李敬光 。标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 1 -2 0 0 3己I， 刁 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇( 3 - m o n o c h lo r o - 1 , 2 - p r o p a n e -d io l , 3 - M( . P D ） 为国际公认的食品污染物。氯丙醇的主要污染来源于酸水解植物蛋白（ H V P ) ， 由残留的甘油三醋或甘油氯化产生。包括单氯取代的 3 - 氯1 , 2 一 丙二醇( 3 - MC D P ) 和 2 - 氯- 1 , 3 一 丙二醇( 2 - MC D P ) 以及双氯取代的 1 , 3 一 二氯- 2 一 丙醇( 1 , 3 - D C P ) 和 2 ,3 - 氯- 1 一 丙二醇( 2 , 3 - D C P ) 。它们不仅具有致癌作用， 还有抑制精子活性的作用。国际食品法典食品添加剂与污染物委员会（ C C F A C ） 也将其列入制标议程。2 0 0 1 年 6 月， WH O / F A O食品添加剂联合专家委员会（ J E C F A） 第 5 7次会议对3 - MC P D的危险性进行了评估， 最终根据最敏感的肾脏毒性提出3 - MC P I ） 的暂定每 日 最大耐受摄入量( P MI D 1 ） 为 2 p g / k g 体重， 并认为摄入 目 前污染水平的酱油可能造成健康危害。为此， 许多国家制定了最大允许限量标准来控制食品中3 - MC D P的污染水平。我国也制定了水解蛋白调味液的最大允许限量标准， 其他食品（ 特别是酱油和食醋） 的最大允许限量标准也在制定中。然而， 我国到目 前为止还没有与其相适应的国家标准测定方法 。 国际上对 3 - MC P D的检测方法 ， 要求采用最灵敏的检测手段来达到技术上尽可能低的水平 ， 并推荐采用稳定性同位素为定量内标以提高分析结果的准确性。英国农业 、 渔业、 食品部（ MA F F ) 的科学中心实验室( C S I ） 采用 3 - MC P D氛代同位素（ d - 3 - MC P D ） 的同位素稀释技术， 以七氟丁酞基咪哇为衍生化试剂 ， 以气相色谱一 质谱联用技术检测 3 - MC P D 。经过 6 个国家 1 2 个实验室的国际协同性试验后， 该方法被国际分析化学家协会( A O A C I n t ） 采纳， 作为检验 3 - M C P D T式方法（ 方法编号 A O A C 2 0 0 0 . 0 1 ) .为 1 保证该方法对我国的适用性， 通过对比验证， 提出了本标准。 本标准的测定方法修改采用A O A C 2 0 0 0 . 0 1 方法， 方法的灵敏度达到了国际 r 对食品中3 - MC P D痕量检测的要求， 可以满足我国对食品中 3 - MC P D监控需要。标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 1 -2 0 0 3食品中 3 - 抓- 1 , 2 一 丙二醇含量的测定范 围 本标准规定了食品中 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇( 3 - MC P D ） 残留量的测定方法。 本标准适用于水解植物蛋白液、 调味品、 香肠 、 奶酪、 鱼、 面粉、 淀粉、 谷物和面包中 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇含量的测定。 本标准的测定限为 5 t g / k g 。本标准线性范围在 0 . 0 0 5 n g -0 . 6 0 0 n g ,2 原 理 本标准采用同位素稀释技术 ， 以 d 5 - 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇( d 5 - 3 - MC P D ） 为内标定量。试样中加人 内标溶液 ， 以硅藻土（ E x t r e l u t T 2 0 ) 为吸附剂， 采用柱层析分离， 用正 己烷一 乙醚( 9 十1 ) 洗脱样品中非极性的脂质组分， 用乙醚洗脱样品中的 3 - MC P D， 用七氟丁酞基咪哇( H F B I ） 溶液为衍生化试剂。采用选择离子监测（ S I M） 的质谱扫描模式进行定量分析 ， 内标法定量。3 试剂 和材料 除非另有说明， 在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和蒸馏水或相当纯度的水。3 . 1 2 , 2 , 4 一 三甲基戊烷。3 . 2 乙醚 。3 . 3 正 己烷 。3 . 4 氛化钠。3 . 5 无水硫酸钠。3 . 6 E x t r e l u t 2 0 ， 或相当的硅藻土。3 . 7 七氟丁酞基咪哇。3 . 8 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇标准品（ 3 - MC P D ) ， 纯度9 8 %.3 . 9 d 5 - 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇标准品（ d 5 - 3 - MC P D ) ， 纯度9 8 o3 . 9 饱和氯化钠溶液（( 5 m o l / L ) ： 称取氯化钠2 9 0 g ， 加水溶解并稀释至1 0 0 0 ml -3 . 1 0 正己烷一 乙醚( 9 +1 ) ; 量取乙醚 1 0 0 ml - ， 加正己烷 9 0 0 m l . ， 混匀。3 . 1 1 3 - MC P D标准储备液（( 1 0 0 0 m g / L ) ： 称取 3 - MC P D 2 5 m g ( 精确至 0 . 0 1 m g ) ， 置 2 5 ml . 量瓶中，加正己烷溶解， 并稀释至刻度。3 . 1 2 3 - MC P D中间溶液（ 1 0 0 m g / L ) ： 准确移取3 - MC P D储备液1 0 m L , 置1 0 0 m L量瓶中， 加正己烷稀释至刻度。3 . 1 3 3 - MC P D系列溶液： 准确移取 3 - MC P D中间溶液适量， 置 2 5 m L量瓶 中， 加正 己烷稀释至刻度（ 浓度为 0 . 0 0 , 0 . 0 5 , 0 . 1 0 , 0 . 5 0 , 1 . 0 0 , 2 . 0 0 , 6 . 0 0 m g / L ) o3 . 1 4 d 5 - 3 - MC P D储备液（ 1 0 0 0 m g / L ) ： 称取 d 5 - 3 - MC P D 2 5 m g （ 精确至 0 . 0 1 m g ) , 置 2 5 m L量瓶中，加乙酸乙酷溶解 ， 并稀释至刻度。3 . 1 5 d 5 - 3 - MC P D内标溶液（ 1 0 m g / l . ) ： 准确移取 d 5 - 3 - MC P D储备液 1 m l , ， 置 1 0 0 mL量瓶中， 加乙酸乙酷稀释至刻度。标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 1 -2 0 0 34 仪器4 . 24 . 34 . 44 . 54 . 64 . 74 - 8气相色谱一 质谱联用仪（ G C - MS ) o色谱柱； D B - 5 m s 柱， 3 0 mX0 . 2 5 mm X 0 . 2 5 gy m, 或等效毛细管色谱柱。玻璃层析柱： 柱长 4 0 c m， 柱内径 2 c m旋转蒸发器。氮气蒸发器。恒温箱或其他恒温加热器。涡漩混合器。气密针， 1 m l -5 分析步骤5 1 试样制备5 . 1 . 1 液状试样 称取试样4 . 0 0 g ， 置1 0 0 m l , 烧杯中， 加d 5 - 3 - MC P D内标溶液（ 1 0 m g / l . ) 5 0 p L ， 加饱和抓化钠溶液6g ， 超声 1 5 min e5 . 1 . 2 汤料或固体与半固体植物水解蛋自 称取试样 4 . 0 0 g , 置 1 0 0 m L烧杯中， 加 d 5 - 3 - M( , P D内标溶液（ 1 0 m g / L ) 5 0 t l . ， 加饱和氯化钠溶液6g ， 超声 1 5 m in a5 . 1 . 3 香肠或奶酪 称取试样 1 0 . 0 0 g ， 置 1 0 0 m l ， 烧杯中， 加 d 5 - 3 - MC P D内标溶液（ 1 0 m g / 1 . ) 5 0 I LL ， 加饱和氛化钠溶液3 0 g , 混和均匀， 离心（ 3 5 0 0 r / m i n ) 2 0 m i n ， 取上清液1 0 g o5 . 1 . 4 面粉或淀粉或谷物或面包 称取试样5 . 0 0 g , 置1 0 0 m l , 烧杯中， 加d 5 - 3 - M C P l ） 内标溶液（ 1 0 m g / L ) 5 0 ti l - ， 加饱和氯化钠溶液1 5 g ， 放置过夜。5 . 2 试样提取 将一袋E x t r e l u t 2 0 柱填料分为两份， 取其中 份加到试样溶液中， 混匀； 将另一份柱填料装入层析柱中（ 层析柱下端填以玻璃棉） 。将试样 与 吸附剂的混合物装人层析柱中， 上层加 1 c m高度的无水硫酸钠。放置 1 5 m i n 后， 用正己烷一 乙醚( 9 +1 ) 8 0 m l ， 洗脱非极性成分， 并弃取。用乙醚 2 5 0 m l . 洗脱 3 -M C P T ) （ 流速约为 8 n i l , / th i n ) 。在收集的乙醚中加无水硫酸钠 1 5 g ， 放置 1 0 m i n 后过滤。滤液于 3 5 0C .温度下旋转蒸发至约 2 mL ， 定量转移至 5 n i l 、 具塞试管中， 用乙醚稀释至 4 m 工 一 。在乙醚中加少量无水硫酸钠， 振摇 ， 放置 1 5 min以上。5 . 3 衍生化 移取试样溶液 1 T T I I ， 置 5 n i l . 具塞试管中， 并在室温下用氮气蒸发器吹至近干， 立即加人 2 , 2 , 4 一 三甲从戊烷 1 m l , 。用气密针加人七氟丁酞基咪哗0 . 0 5 ml. ， 立即密塞。涡漩混合后， 于 7 0 保温2 0 m i n .取出后 ， 放至室温， 加饱和氯化钠溶液 3 m L ; 涡漩混合 3 0 s ， 使两相分离。取有机相加无水硫酸钠约为0 . 3 g 干燥。将溶液转移至自动进样的样品瓶中， 供 G C - MS 测定。5 . 4 空白试样制备 称取饱和氯化钠溶液（( 5 m o l / I . ) 1 0 m l ， 置于 1 0 0 m L烧杯中， 加 d 5 - 3 - MC P D内标溶液（ 1 0 m g / L )5 0 j1 L ， 超声 1 5 m in 。以下步骤与样品提取及衍生化方法相同（ 5 . 2 和 5 . 3 ) 05 . 5 标准系列溶液的制备 吸取标准系列溶液各 。 . 1 m l - ， 加 d 5 - 3 - M C P D内标溶液（( 1 0 m g / L ) 1 0 pt L ， 加 2 , 2 , 4 一 止 甲基戊烷标准下载网()免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 1 - 2 0 0 30 . 9 ml- ， 用气密针加人七氟丁酸基咪哩 0 . 0 5 m l , ， 立即密塞。以下步骤与试样的衍生化方法相同（ 5 . 2和5 . 3 ) 。5 . 6 测定5 . 6 . 1 色谱条件 色谱柱 ： D B - 5 ms 柱 ， 3 0 mX0 . 2 5 m mX0 . 2 5 p m, 进样口温度 ： 2 3 0 0C e 传输线温度： 2 5 0 0C。 程序温度： 5 0 保持 1 m in ， 以 2 0C / m i n 速度升至 9 0 0C， 再以4 0 0C / m i n的速度升至 2 5 0 0C， 并保持5 mi n a 载气： 氦气， 柱前压为6 p s i , 不分流进样， 进样体积 1 tl l . o5 . 6 . 2 质谱参数 电离模式： 电子轰击源( E D， 能量为 7 0 e V , 离子源温度为 2 0 0 0C o 分析器（ 电子倍增器） 电压为 4 5 0 V o 溶剂延迟为 1 2 m in ， 质谱采集时间为 1 2 m in -1 8 m i n , 扫描方式 ： 采用选择离子扫描（ S I M） 采集 ， 3 - MC P D的特征离子为 m/ z 2 5 3 , 2 7 5 , 2 8 9 , 2 9 1 和 4 5 3 ,d 5 - 3 - M( P D的特征离子为 m / z 2 5 7 , 2 9 4 , 2 9 6 和 4 5 6 。选择不同的离子通道， 以 m/ z 2 5 3 作为 3 - MC P D定量离子 ， m/ z 2 5 7 作为 d 5 - 3 - MC P D的定量离子， 以 m / z 2 5 3 , 2 7 5 , 2 8 9 , 2 9 1 和 4 5 3 作为 3 - MC P D定性鉴别离子 ， 考察各碎片离子与 m/ z 4 5 3 离子的强度比， 要求 ： 四个离子（ m/ z 2 5 3 , 2 7 5 , 2 8 9 和 2 9 1 ) 中至少两个离子的强度比不得超过标准溶液的相同离子强度比的土2 0 % o5 . 6 . 3 测定 量取试样溶液 1 阿, 进样。3 - MC P D和 d 5 - 3 - MC P D的保留时间约为 1 6 m in 。记录 3 - MC P D和 d 5 -3 - MC P D的峰面积。计算3 - MC P D ( m / z 2 5 3 ) 和d 5 - 3 - MC P D ( m / z 2 5 7 ) 的峰面积比， 以各系列标准溶液的进样量（ n g ） 与对应的 3 - MC P D ( m / z 2 3 5 ) 和 d 5 - 3 - MC P D ( m / z 2 5 7 ) 的峰面积比绘制标准曲线。5 . 7 结果计算 按内标法计算样品中 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇的含量。见下式：vA x fA： 二 ： m式 中 ：X 试样中3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇含量 ， 单位为微克每千克（ 或微克每升） Ii g / k g （ 或 Il g / L ) ;A 试样色谱峰与内标色谱峰的峰面积比值对应的 3 - 氯- 1 , 2 一 丙二醇质量， 单位为纳克（ n g ) ;f 试样溶液的稀释倍数 ；m 试样的取样量， 单位为克（ 或毫升） I g （ 或m L ) o计算结果 表示到三位有效数位 。6 精 密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 2 0 %.免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 5 0 0 9 . 1 9 1 -2 0 0 37 其他1 6 . 3 8 11 0 0d 5 - 3 - MCP D m z 2 5 71 4 . 3 9 0 1 4 . 6 5 5 1 4 . 9 9 41 5 . 4 7 91 6 . 4 8 91 0 01 6 . 5 8 0二3 一 MC P D， mz 2 5 31 4 .3 8 1 1 4 . 61 81 5 . 6 6 2 1 6 . 0 6 3 1 6 . 3 3 61 6 . 8 6 93 - 氮- 1 , 2 一 丙二醉及其汽代同位素的全扫描总离子流图1 6 93 一 M CPD7 7 2 5 32 2 5 1 2 8 9I” 那3 4 1 3 6 3 4 1 3 4 2 9 4 5 31嘴图1护 00。5 9 1L119 14 70 1 .1. 5 0 1 0 0 1 5 04 8 94 9 8 m iz2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0197命2001 0 01 6 9一M CP D6 9 7 9 4 60 怡 石 08 11 0 0 一雨 1 19 1 0 0 1 5 0192 0 02 94 32 6 3 9 7 4 13 4 3 1 4 5 6 4 6 43 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 4 9 6彬m / zS o图 2 3 - 氮- 1 , 2 一 丙二醇及其氖代同位素的质谱图1 6 . 1 7 51 6 . 3 7 74 5 34562911 0 0 0d 5