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17.2.07 AOAC 官方方法官方方法 990.12 食品中细菌总数的检测食品中细菌总数的检测 再水化干膜法再水化干膜法 （Petrifilm 细菌总数测试片法）细菌总数测试片法） 首次发布首次发布 1990 最终发布最终发布 1994 方法性能： 面粉 sr=0.225; sR=0.246;RSDr=5.3%;RSDR=5.8% 坚果 sr=0.272; sR=0.674;RSDr=7.4%;RSDR=18.4% 虾 sr=0.540; sR=0.615;RSDr=9.8%;RSDR=11.1% 香料 sr=0.274; sR=0.303;RSDr=6.0%;RSDR=6.6% 火鸡 sr=0.278; sR=0.348;RSDr=5.3%;RSDR=6.6% 蔬菜 sr=0.310; sR=0.454;RSDr=6.3%;RSDR=9.2% A. 原理原理 见989.19A（见17.3.03） B. 设备设备 见989.10B（a）和（c）-（e）（见17.3.03） C. 试剂试剂 稀释液在 34g KH2PO4加入 500mL 水稀释，用 1N 的 NaOH 溶液 （大约 175mL） 将 pH 值调整至 7.2， 并用水稀释至 1L，以制备储备液。用煮沸过后冷却的 水将 1.25mL 储备液稀释成 1L， 以制备稀释用缓冲水。 在 121高压灭菌 15 分钟。 D. 样品制备样品制备 见966.23B （见17.2.01） E 测定测定 将细菌总数测试片置于平坦表面。提起上层膜， 将 1mL 样品接种于测试片中央。 小心将上层膜覆盖在 接种面上。对压板（凹面朝下）中心轻轻施压，使样 品分布于限定的生长区域内。将测试片静置 1 分钟， 使凝胶固化。将测试片置于 351C 的条件下培养 483 小时。 将培养板水平朝上放置于培养箱中。每叠不要超 过 20 片。在培养结束后及时进行计数。培养结束时， 测试片能够在冷冻条件下保存 7 天（ -15C） ，但应 避免将此作为常规操作。 使用标准菌落计数器计数。也可以使用放大镜辅 助计数。菌落呈现不同形态的红点。在合理计数范围 （30-300 个）内计算所有的菌落。 将每个测试片的细菌总数（或者同一稀释倍数测 试片上菌落数的平均值）乘以稀释倍数的倒数，得到 细菌总数。当计数连续稀释度的平行测试片时，先计 算每个稀释度的平均菌落数，再计算最终的平均菌落 数。当菌落数大于 300 个时，可以选取 12 个具有代 表性的方格来计数，最后以每个方格的平均菌落数乘 以 20 来报告估算菌落数。圆形生长区域面积等于 20 个 1cm2 方格面积的总和。为了进一步鉴定菌落，可 以将上层薄膜提起，并将菌落从凝胶中取出。 参考文献：JAOAC 73,242（1990） 修改日期
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