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第1章 无菌操作技术实践 第1节 微生物的分离和培养学业分层测评(建议用时:45分钟)学业达标1下列叙述正确的是() 【导学号:67850005】A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类:液体培养基和固体培养基C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的单个细菌【解析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养基质。培养基的种类根据划分依据的不同而不同,如根据化学成分可分为天然培养基和合成培养基。固体培养基是液体培养基添加凝固剂形成的,其他成分均相同。单个的微生物形体微小,肉眼无法看到,必须借助仪器才能看到,在固体培养基上用肉眼观察到的是一个菌落。 【答案】A2下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中,不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一【解析】该微生物以CO2为唯一碳源,但CO2不能为微生物提供能量,不属于能源物质。【答案】B3下列关于微生物营养物质的描述正确的是()A同一种物质不可能既作碳源又作氮源B除水以外的无机物仅提供无机盐C凡是碳源都能提供能量D无机氮源也能提供能量【解析】对异养型微生物来说,含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源,如蛋白胨既是碳源又是氮源和能源。除水以外的无机物种类繁多,对不同的微生物起的作用可能不同,如CO2是光能自养细菌的碳源,但不能提供能量;NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐;硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨,同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源。【答案】D4不同培养基的具体配方不同,但一般都含()A碳源、磷酸盐和维生素B氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素【解析】培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,此外还应考虑pH、特殊营养物质及O2等条件。【答案】C5下列有关倒平板操作错误的是()A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C将培养皿打开,培养皿盖倒放在桌面上D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置【解析】整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵,因此,灭过菌的培养皿要放在火焰旁;打开的锥形瓶瓶口要迅速通过火焰;培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙,不能将培养皿盖完全打开;等待平板冷却凝固后需要倒过来放置。【答案】C6将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱的目的是() 【导学号:67850006】A对比观察培养基有没有被微生物利用B对比分析培养基上是否生有杂菌C没必要放入未接种的培养基D为了下次接种时再使用【解析】通过设计对照实验,目的是为了检测培养基制备是否成功,即是否污染了杂菌。【答案】B7(2013江苏高考)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是 ()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次【解析】本题考查微生物的分离和培养。A项应在培养基分装到培养皿前进行灭菌。B项中,从前一区域划线的末端开始往后一区域内划线之前,需要灼烧接种环。C项中有机废水中的微生物只能利用现成的有机物,不能进行光合作用,没有必要放在光照培养箱中培养。D项中微生物的繁殖速度很快,应培养24 h后现察和记录结果。【答案】B8下列关于对大肠杆菌的接种的叙述不正确的是()A接种环在接种的试管的斜面上轻轻划“S”型曲线B在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基、培养皿和接种环进行消毒C不能将刚刚灼烧过的接种环直接挑取菌种D使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃【解析】对培养基和培养皿要进行灭菌而不是消毒;因为灼烧过的接种环温度太高,直接接触菌种会将菌种杀死,所以要将接种环接触没有菌种的培养基的顶端待温度降低后再挑取菌种;有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素,所以使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。【答案】B9细菌培养基的配制步骤是()A配制培养液、分装、调节pH、灭菌、包扎、搁置斜面B配制培养液、灭菌、调节pH、包扎、分装、搁置斜面C配制培养液、调节pH、分装、包扎、灭菌、搁置斜面D配制培养液、灭菌、分装、调节pH、包扎、搁置斜面【解析】配制细菌培养基时,配制好培养液后应先调节pH,再分装、包扎、高压蒸汽灭菌并冷却后再搁置斜面。【答案】C10分析有关微生物的资料,回答问题。(1)1982年澳大利亚学者从胃活检组织中分离出幽门螺杆菌。幽门螺杆菌的遗传物质集中分布的区域称为_。(2)如图4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基(琼脂含量3.5g/L)中的生长状态,其中号试管代表幽门螺杆菌的生长状态,由图判断,该菌在_条件下不能生长。(3)下表是某培养基的配方成分葡萄糖KH2PO4MgSO4NaClCaSO4CaCO3琼脂蒸馏水含量10 g0.2 g0.2 g0.2 g0.2 g5 g3.5 g1 L将幽门螺杆菌接种到pH适宜的该培养基中,置于37C下培养一段时间后,在该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时_,主要原因是_。(4)幽门螺杆菌形态如图所示,该菌在人体中可引起胃溃疡等胃部疾病。幽门螺杆菌生长的最适pH为67,人体胃腔内pH在12之间,但胃黏膜的黏液层靠近上皮细胞侧pH为7.4左右。若幽门螺杆菌随食物进入胃腔,结合其结构特点以及能导致胃溃疡的特性,推测该菌在胃内如何存活?_。【解析】(1)幽门螺杆菌为原核生物,没有核膜包围的细胞核,遗传物质集中在拟核内。(2)幽门螺杆菌生活在半固体培养基的中部,说明它不能生活在氧气浓度过高或过低的地方。(3)培养基中缺乏氮源,幽门螺杆菌不能正常生活,数量会减少。(4)幽门螺杆菌进入胃腔后,可以先依靠鞭毛运动至pH较高处缓冲,然后分泌蛋白中和胃酸,提高pH,以便继续生存和繁殖。【答案】(1)拟核(核区)(2)氧气浓度过高或过低(3)少缺少氮源(缺少氮源和生长因子)(4)幽门螺杆菌进入胃腔后,首先依靠鞭毛运动至pH较高处缓冲,然后分泌蛋白中和胃酸,提高pH,以便继续生存和繁殖能力提升11获得纯净培养物的关键是()A将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基等器具进行灭菌B接种纯种细菌C适宜环境条件下培养D防止外来杂菌的入侵【解析】获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。【答案】D12三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基,然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36 h后,计算菌落数,结果如下表。下列选项正确的是()培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖35琼脂、葡萄糖、生长因子250琼脂、生长因子0A.该实验采用的是液体培养基B接种时为方便操作可完全打开皿盖C和对照,说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D和对照,说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖【解析】该培养基加入了琼脂,故为固体培养基;和对照,说明大肠杆菌生长需要葡萄糖,但不能证明是否需要生长因子;和对照,自变量是有无葡萄糖,说明大肠杆菌的生长需要碳源葡萄糖。【答案】D13(2016成都七中检测)牛肉膏蛋白胨培养基中需要加入琼脂这一理想的凝固剂,下列有关琼脂的说法不正确的是() 【导学号:67850007】A不被所培养的微生物分解利用,对所培养的微生物无毒害作用B在微生物生长的温度范围内保持固体状态C琼脂凝固点低,利于微生物的生长D琼脂在灭菌过程中不会被破坏,透明度好,凝固力强【解析】理想的凝固剂应具备以下条件:不被所培养的微生物分解利用;在微生物生长的温度范围内保持固体状态;凝固点不能太低,否则不利于微生物的生长;对所培养的微生物无毒害作用,并且在灭菌时不会被破坏,透明度好,凝固力强;配制方便,价格低廉。琼脂作为一种凝固剂,具备以上条件。【答案】C14(2014江苏高考节选)为了获得胡萝卜素产品,某小组开展了产胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题:(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是_;为了减少灭菌后器皿被污染,灭菌前应该_。(2)为了筛选出酵母菌,培养基中添加了青霉素,其目的是_。(3)下图是灭菌锅及其局部剖面示意图,图中甲、乙、丙指示的依次是_。(填序号)安全阀、放气阀、压力表放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化,挑取了菌落在3块相同平板上划线,结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长,最可能的原因是_。【解析】(1)培养皿灭菌常用的方法有湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)、干热灭菌等。将培养皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎,避免灭菌后的再次污染。(2)青霉素能抑制细菌和放线菌的生长繁殖,但对酵母菌等真菌不起作用,因此添加青霉素可筛选出酵母菌。(3)图中乙连接软管,为排(放)气阀,甲为安全阀,丙是压力表。(4)三块平板中有两块平板长有菌落,说明含有菌株并可在培养基上生长;而其中一块平板未见菌落,说明接种不成功,可能是接种环灼烧后未冷却或未充分冷却,使菌株因温度过高而被杀死。【答案】(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)用牛皮纸(报纸)包扎器皿(2)抑制细菌(放线菌)生长(3)(4)接种环温度过高,菌被杀死15炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列,菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者,可根据噬菌体的宿主专一性,通过实验确诊。 【导学号:67850008】(1)细菌培养:采集疑似患者的样本,分离培养,获得可疑菌落。(2)细菌鉴定:实验流程如下图所示:对配制的液体培养基等需采取_方法灭菌;实验所用液体培养基的碳源为_(填“无机碳”或“有机碳”)。挑选可疑菌落制片后,用_观察,可看到呈竹节状排列的杆菌。接种可疑菌后,35 培养24 h,液体培养基变浑浊,原因是_。对照组试管中应加入_,与实验组同时培养6 h后,若实验组液体培养基的浑浊度比对照组_(填“高”或“低”),则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染;反之则排除。对排除的疑似患者及易感人群,可接种炭疽杆菌疫苗,刺激机体产生相应抗体,与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外,还有_。【解析】培养基应用高压蒸汽方法进行灭菌。炭疽杆菌同化类型为异养型,应选有机碳作为其碳源。微生物个体小,肉眼观察不到,必须借

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