PBS缓冲液的配制方法.doc

PBS缓冲液配方不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是常用配方，供大家参考。用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，灭菌即可。0.01M PBS缓冲液 称取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO412H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。一般免疫组化用PBS，主要用来清洗，都只包含Na2HPO412H2O（磷酸氢二钠） 和NaH2PO42H2O（磷酸二氢钠）两种组分，母液的配制：0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。若需要NaCL的话，加入NaCL至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各种另PH值的0.2MPB（100ml)配方：pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7关于磷酸缓冲溶液的一些问答 PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及 3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）。无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为Na2HPO412H2O，则为2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min，存在4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。常用的都是第二种。问题1：磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered sodium），为什么用第三种或第一种呢: 这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。 我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子， 只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和 KCl调节离子浓度。以上是个人的理解，欢迎批评。:问题2：既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？ 我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？问题3：不加NACL会怎么样啊？多省钱啊 在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫