干扰实验.ppt

实验六：干扰试验,一、实验目的1掌握GOD-POD法测定血糖的原理及临床意义。2掌握干扰试验的原理和方法。,二、实验原理1、GOD-POD法测血糖原理：葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GOD）能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。后者在过氧化物酶（peroxidase，POD）的作用下与色原性氧受体4-氨基安替比林偶联酚缩合成红色醌类化合物，即Trinder反应。该红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。,2、干扰实验原理：选用维生素C做GOD-POD法测血糖的干扰试验，维生素C可和GOD反应生成的H2O2发生反应，使部分H2O2不能参与第二步POD催化的偶联反应，从而降低显色强度，产生负的测定误差。,微量移液器,三、器材,三用水浴箱,722型可见光分光光度计,计算器,四、试剂,1血清标本含血糖6.7mmol/L的血清2葡萄糖标准液（5.55mmol/L）3GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒4.1g/L、2g/L、3g/L维生素C溶液,1干扰样品制备基础样品：血清0.9ml+蒸馏水0.1ml。干扰样品：血清0.9ml+1g/L维生素C溶液0.1ml干扰样品：血清0.9ml+2g/L维生素C溶液0.1ml干扰样品III：血清0.9ml+3g/L维生素C溶液0.1ml,五、操作步骤,2、按下表操作,混匀，置水浴箱37，15分钟，505nm空白管调零，722型分光光度计分别测各管A值。,1干扰物加入浓度计算：干扰物加入浓度干扰物溶液浓度2干扰值计算：干扰值(mmol/L)干扰样品测定浓度基础样品测定浓度3干扰率计算：干扰率100%,六、结果计算,4计算结果请填入表内：,七、注意事项,1干扰试验的对象有厂商研制的新产品；新建立的方法；新引进的方法或试剂。2应做的主要干扰物：病人标本中常出现的黄疸、脂血和溶血；某些药物如维生素C等；实验常用的抗凝剂，防腐剂和稳定剂。3可疑干扰物浓度加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所见浓度的上限，有可能时应达到病理标本的最高值。,4无论是方法特异性差或是受干扰，都影响到测定结果的正确性，影响的程度与与非分析物的量有关，所以产生的误差都是恒定系统误差，常以偏差Bias作为统计量。5由某些物质引起测定结果的偏差，足以影响临床解释者谓之干扰，但各项测定的临床要求至今仍未确定，建议将该分析方法批内测定值1.96s作为控制限度。,八、方法学评价,干扰试验的方法主要有“配对差异”试验及用病人标本作偏差分析。所谓“配对差异”试验，即将不同浓度的干扰物加入到实验标本中，然后分别测定加与不加干扰物的标本，比较二者有无偏差，并了解干扰物浓度与偏差的关系。,所谓用病人标本作偏差分析即选择病人标本，如肝脏、肾脏或心脏疾病患者，用服用了某种可能有干扰的药物的病人标本，以及含有高胆红素，高血脂和血红蛋白的标本，用候选方法和参考方法同时测定，将两方法的测定结果进行比较，以确定某物质对候选方法是否有干扰及干扰程度。本次实验所选用的方法为“配对差异”试验。,这两种干扰试验各有优缺点，第一种方法的不足之处是实验标本的介质可能与病理标本的介质不尽致，病理标本中的干扰物可能不是原来的药物，加入的干扰物可能与病理标本中的干扰物不完全相同。第二种方法的不足之处是病人通常用多种药物，难以确定