（外科学专业论文）胆固醇结石与瘦素、瘦素受体及脂代谢相关性的研究.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要4 研究论文胆固醇结石与瘦素、瘦素受体及脂代谢相关性的研究 1 l j l 日l j 舌8 资料与方法9 结果1 4 附图16 附表17 讨论19 结论2 4 参考文献2 5 综述胆囊胆固醇结石患者血脂代谢相关因子的研究2 7 致谢4 0 个人简历4 1 中文摘要 胆固醇结石与瘦素、瘦素受体及脂代谢相关性的研究 摘要 胆囊胆固醇结石( c h o l e s t e r 0 1s t o n e s ，c s ) 是一种常见病、多发病，多 年的临床和动物实验研究表明，胆汁中因胆固醇浓度过饱和形成的致石性 胆汁是胆囊胆固醇结石形成的主要生理改变。胆汁中胆固醇浓度过饱和的 形成与患者脂类代谢有关，血脂水平、脂蛋白水平、载脂蛋白水平的改变 可能导致了该病的形成。因此对胆囊胆固醇结石患者的血清总胆固醇、甘 油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、部分载脂蛋白水平、胆汁成分变 化以及血清瘦素( 1 印t i l l ) 及其受体之间的关系的研究不仅能够探讨胆囊胆 固醇结石疾病在血脂、血清脂蛋白特征性的表现，还可从胆囊胆汁中总胆 固醇、总胆汁酸等成分的变化进一步分析结石的成因和某些预示因子，可 为该疾病的防治提供新的思路。但国内目前临床瘦素及其受体表达水平与 胆囊胆固醇结石关系的研究较少，并且缺乏胆囊胆固醇结石患者血清瘦素 及瘦素受体表达与胆囊胆汁中总胆固醇、总胆汁酸浓度以及血脂、血清脂 蛋白水平、载脂蛋白水平之间的相关性研究。 目的：本研究通过测定胆囊胆固醇结石患者与胆囊息肉样病变患者血 脂、血清脂蛋白、载脂蛋白、胆囊胆汁中总胆固醇、总胆汁酸的差异和血 清瘦素( 1 印t i n ) 及胆囊组织中瘦素受体表达之间的相互关系，进一步了解瘦 素、瘦素受体及血脂、血清脂蛋白、载脂蛋白和胆囊胆汁中总胆固醇、总 胆汁酸在胆囊胆固醇结石形成过程中的作用机理，可能为预防和治疗胆囊 胆固醇结石提供了理论依据和临床参考。 方法：实验分两组：胆囊胆固醇结石组3 0 例和胆囊息肉样病变组2 2 例。其中胆囊胆固醇结石组患者不伴胆管结石，胆囊息肉样病变组不包括 胆固醇性息肉。胆囊结石经化学分析法进行成分分析其胆固醇含量大于 7 0 为胆固醇结石，两组观察对象均不伴有心、肺、肾、肝及内分泌疾病， 且两组间年龄、性别差异无统计学意义。检测指标包括年龄、性别、身高、 体重、体重指数( b m i ) 、血清总胆固醇( t c h ) 、甘油三酯( t g ) 、低密度脂 蛋白( l d l ) 、高密度脂蛋白( ( h d l ) 、载脂蛋白触( a p o 触) 、载脂蛋白b ( a p 0 一b ) 、载脂蛋白e ( a p o e ) 浓度、血清瘦素及瘦素受体表达水平和胆汁 中文摘要 中总胆固醇和总胆汁酸浓度。其中使用全自动生化分析对血液中血脂、脂 蛋白、载脂蛋白及胆汁中总胆固醇和总胆汁酸浓度进行测定；采用e l i s a 法检测血清瘦素水平；采用r 1 - p c r 检测瘦素受体表达水平。 结果：胆囊胆固醇结石组的h d l 及a p o m 低于胆囊息肉样病变组， 差别有统计学意义；血清t c 、t g 、l d l 高于胆囊息肉样病变组，差别有 统计学意义；血清瘦素水平胆囊胆固醇结石组明显高于胆囊息肉样病变 组，差别有统计学意义。两组观察对象间a p o b 、a p o e 及胆汁胆固醇、 总胆汁酸浓度差别无统计学意义。 两组观察对象血清瘦素与b 均呈正相关，胆囊胆固醇结石组血清 瘦素水平高于胆囊息肉样病变组。在b m i q 5 的人群中，胆囊胆固醇结石 组及胆囊息肉样病变组之间血清瘦素水平差别无统计学意义，但胆囊胆固 醇结石组患者血清瘦素水平高于正常对照组；在b m i 2 5 的人群中，胆囊 胆固醇结石组患者b m i 大于胆囊息肉样病变组，且血清瘦素水平显著高 于胆囊息肉样病变组。 胆囊胆固醇结石组血清瘦素水平与b m i 、t g 、t c 、a p o 枷均呈正相 关，与h d l 呈负相关，与l d l 、a p o b 及a p o e 均无相关。胆囊息肉样 病变组中血清瘦素与b 呈正相关，与其他指标未发现相关性。胆囊胆 固醇结石组中瘦素与胆汁总胆固醇呈正相关、与总胆汁酸呈负相关。胆囊 息肉样病变组瘦素与胆汁中的成分未发现相关关系。 结论： 1 胆囊胆固醇结石患者血脂代谢与胆囊息肉样变患者相比较表现为高 l d l ，低h d l 、低a p o 越的特点。 2 胆囊胆固醇结石患者的血清瘦素水平及瘦素受体表达水平明显高于胆 囊息肉样病变患者，且随着b 的增大而升高。 3 瘦素通过改变l d l 、曲l 、a p o 舭等脂代谢因子参与胆囊胆固醇结石 的形成。 关键词：瘦素；瘦素受体；致石性胆汁；胆固醇结石 英文摘要 s t u d yo ns e r u mi e p t i n ，l e p t i n r e c e p t o r m e t a b o h s m o fl i p i d sa s w e na st h e i rc o r r e l a t i o ni ng a u b l a d d e rc h o l e s t e r o ls t o n e s a b s t r a c t g a l l b l a d d e rc h o l e s t e r o lg a l l s t o n el sac o m m o nd i s e 弱e y e 勰o fc l m l c a l a n d 锄i m a lr e s e m c hh a si n d i c a t o dt h a t ，t h em a i np a t h o p h y s i o l o g i c a lc _ h a n g eo f g a l l b l a d d e rc h 0 1 e s t e r o lg a l l s t o n ef o m a t i o ni sb i l i a 拶c h o l e s t e r o lh y p e r s e c r e t i o n ，w h i c hi s r e l a t e dt ol i p i dm e t a b o l i s m t h ec h a i l g eo fs e m ml i p i d ， 1 i p o p r o t e i na n d 印o l i p o p r o t e i nl e v e l sm a y h a v eb e e ni n v 0 1 v e di nt h ef o 衄a t i o n o ft 1 1 eg a l l s t o n e t h e 咖d yo ns e n l mt o t a lc h o l e s t e r o l ，仃i g l y c 舒d e ，h i 曲d e n s 时 l i p o p r o t e i n ，l o wd e n s 时l i p o p r o t e i na n dt h el e v e l so fs o m ea p o l i p o p r o t e i i l s g i v c su sac h 锄c et od i s c u s st h ec h a r a c t e r i s t i cr 印r e s 咖a t i o no fg a l l b l a d d e r c h 0 1 e s t 啪lg a l l s t o n ei ns e m m1 i p i d ，1 i p o p r o t e i n ，印o l i p o p r o t e i n ， l 印t i na n d l 印t i n - r e c e p t o r b ya u l a l y z i n gs o m ei n g r e d i e n t si nm eg a l l b l a d d e rb i l eo fm e p a t i e n t ss u 仃嘶n gf 如mg a l l b l a d d e r c h o l e s t e r o l s t o n e ， 吐l e e x p e d m e n t - c o n d u c t o r 硫e n d st 0 如吡e re x p l o r e 也ef o m l a t i o nm e c h a n i s m ，n a m e l yh o w t o t a lc h o l e s t e r o la n dt o t a lb i l ea c i di nm eg a l l b l a d d e rb i l ea c t st of o mt h e d i s e 邪eo fg a l l b l a d d e rc h o l e s t e r o l g a l l s t o n e t h u sm a ys u g g e s t an e w t h e o r e t i c a lb 蠲i so fa p p r o a c ht o 也ep r e v e n t i o na 1 1 dt 1 1 e r a p yo ft 1 1 i sd i s e a s e h o w e v m e r eh 嬲b e e nf e wc l i i l i c a ls t u d i e so nt h ec o r r e l a t i o no fs e m m l e p t i n - r e c 邙i t o ra n dc _ h o l e s t e r o lg a l l s t o n e ，a n dm ec o r r e l a t i o nb e t w e e ns e m m l e p t i n ，l e p t i n - r e c e p t o r ，l i p i d ，l i p o p r o t e i n ，a p 0 1 i p o p r o t e i na n dt o t a l c h o l e s t e l l o l ，t o t 2 l lb i l ea c i do ft h eg a l l b l a d d e rb i l e o b j e c t ： m e a s u r et h es e m m1 e v e l so fs e m m l i p i d ，l i p 叩r o t e i n ， 印o l i p o p r o t e i n 觚dt o t a lc h o l e s t e r o l ，t o t a lb i l ea c i di nt h eg a l l b l a d d e rb i l eo f g a l l b l a d d e rc h o l e s t e r o lg a l l s t o n ep a t i e n t sa n dg a l l b l a d d e rp o l y p i ，a n d s t u d yt h ec o r r e l a t i o nb e t w e e ns e r u m1 e p t i n ，l e p t i n r e c e p t o r ，s e r u m l i p i d ，l i p o p r o t e i n ，a p o l i p o p r o t e i n ，a n dt o t a lc h o l e s t e r 0 1 ，t o t a l b i l e a c i do ft h eg a l l b l a d d e rb i l e d i s c u s st h ec h a r a c t e r i s t i c so fs e r u m l i p i d ，l i p o p r o t c i n ，印o l i p o p r o t e i n ，l e p t i n 锄d t h em e c h a n i s mo fg a l l b l a d d c r 3 英文摘要 d 1 0 l e s t 锄lg a l l s t o n ef o m a t i o n ，e v a l u a t et h ev a l u eo fm e a s u r i i 培s e m m1 印t i l l l c v e l sa n do m e rp 蹦吼e t 粥f o r 酬l b l a d d e rc h o l e s t e lg a l l s t o n ep a t i e n t s m e t h o d s ：3 0c a s 镐o fg a l l b l a d d c rc h 0 1 e s t e r o lg a l l s t o n ep a t i e n t sa r c s e l e c t e d 舔g a l l b l a d d e rc h o l 懿t e r o lg a l l s t o n e 舒饥l pw i t h 觚o m e r2 2c 硒骼o f g a l l b l a d d e rp 0 1 y p i 舔t l l ec o n 昀1g r o u p p a t i e n t so fg a l l b l a d d e rc h 0 1 e s t e r 0 1 g a l l s t o n e 掣0 u pa r ew i t h o u tb i l ed u c ts t o n e ，觚dg a l l b l a d d e rg a l l s t o n e sa r e i d e n t i f i e d 弱c h o l e s t e r o lg a l l s t o n 骼丽t hc h o l e s t e r o lc o n t e n tg r e a t e rt h a n7 0 f i o rc o m p o n e ma n a l y s i su s i n gb i o c h e m i c a lm e t h o d t 1 7 l ，og r o u p so fo 场e c t sa r e 研m o u tc a r d i a c ，p u l i n o n a r e n a l ，h 印撕ca n de n d o c r i n ed i s e 觚e s t 1 1 e r ei sn o s i g n i f i c 趾t d i 筇暑r e n c e i n g e n d e r a n d a g e m e a s u r e dp a r a m e t e r s i n d u d e ：b o d y - h e i g h t ，w e i g h t ，b o d y m a s s i n d e x ，s e m m t o t a l c h o l e s t e r o l ， 仃i 哲y c e r i d e ，l l i g hd e n s 毋l i p 叩r o t e i n ，l o wd e n s i t yl i p o p r o t e i n ，印0 1 i p o p r o t e i n a i ，a p o l i p o p r o t e i nb ，印o l i p o p r o t e i ne ，t o t a lc h o l e s t e r o la i l dt o t a lb i l ea c i do f t h e g a l l b l a d d 盯b i l e ，s e m m1 印t i n 锄d l e p i n r e c 印t o r l e v e r s s e n l m l i p i d ，l i p o p r o t e i n ，a p 0 1 i p o p r o t e i n ，t o t a lc h o l e s r t e r o l a n dt o t a lb i l ea c i do ft h e g a l l b l a d d e rb i l e1 e v e l sw e r ed e t e c t e db ya u t o m a t i ca 1 1 a l y z e r ，w h i l es e m m1 印t i n w 弱m e 硒l l r e du s i n ge l i s a 1 印i n r e c 印t o rl e v e lw 硒d e t e c t e db yr e v e r s e t r a n s c r i p t i o np c i u r i t p c r ) t h e d a t aa i i e p r o c e s s e db ys p s s 14 of o r s 伽s t i c a l 趾a l y s i s ，w i t hp 2 5 ，b m i ，s e m ml 印t i n 4 一 薹查塑墨 一 一一一 l e v e l s 孤dl e p n r e c 印t o r 础n ai s 姗c hh i g l l e r i ng a l l b l a d d e rc h o l e s t e r o l g a l l s t o n e 鄹呻也a ni n 鲥1 b l a d d e rp o l y p i a tt l l ew e i g h tl e v d 0 fb m i 翌5 ， t h 哪眦n 0s i 嘶触呲d i 仃e r e n c e sb 咖e e nt h e 啪g r o u p s i ng a l l b l a d d e r c h 0 1 e s t e r o lg a l l s t o n eg r o u p ，s e m ml 印t i nl e v e li sp o s i t i v ec o r r c l 删t ob o d y m a s si n d e x ，s 唧m t o t a le h o l e s t e r o l ，t r i 百y c 耐d e ，a p o - 舭a n d t o t a l c h 0 1 e s t e r o lo ft h eg a l l b l a d d e r b i l e ，w h i l em ) l a i l dt o t a lb l l ea c l do 士 t h eg a l l b l a d d e rb i l e 眦n e g a ：t i v ec o 眦l a t i o n t l l e r ea r ec o 玎e l a t e d t ob e f o u n di ng a l l b l a d d e rp o l y p i t l l es e m ml 印t i n a n dt o t a lc h o l c s t e r o lu l ， a p o b ，a p o - e a r e n oc 0 仃e l a t i o ni n 帆og r o u p s c o n c l u s i o n s ： 11 h e s er e s u l t ss h i o w ：c o m l ) a 僦w i mg a l l b l a d d e rp o l y p i ，s 饥l mt n g l y c e n d e ， t o t a lc h 0 1 e s 姗l ，l d l ，t o t a lc h o l e s t e r o lo ft h eg a l l b l a d d e r b i l e a r eh i 班c r ， w h i l es e n mh d l ，a p o 舭a n d t o t a lb i l ea c i do ft h eg a l l b l a d d e r b i l e 狁 l o w e ri nc h o l e s t e r 0 1g a l l s t o n eg r o u p 2 骶i ss i g m 6 c a n th i g h e rl e v e li ns e m ml 印t i na n dl 印i n - r e c 印t o r 删刚a o f g a l l b l a d d e rc h o l e s t e r o lg a l l s t o n ep a t i e m s 仕姗i n g a l l b l a d d e rp o l y p l 3s e m ml 印t i nm a y b ep l a yak e y r o l ei nc h o l e s t e r o lg a l l s t o n ef o 衄t l o n 皿 c o n c l u s i o i l ，s 唧ml 印t i n ，h d l ，l d l ，a n da p o - m a r ei m p 叫砌p r o g n o s l s f a c 姗f o rg a l l b l a d d e rc h 0 1 e s t e r o lg a l l s t o n e ，m a y b eu s e d f o re 矾yp r e v e n t l o n a l i l de a l l yt r e a t i n e n t k 蚵 w o r d s ： 1 印t i n ；1 印t n r e c 印t o r ；l i t h o g e n i c b i l e s ； c h o l e s t 哪l g a l l s t o n e s 研究论文 胆固醇结石与瘦素、瘦素受体及脂代谢相关性的研究 e ， 莉青 胆囊胆固醇结石( c h o l 骼t e 阳ls t o n e s ，c s ) 是一种常见、多发的消化系统 疾病。近几年来，随着人们的生活环境和饮食习惯的变化，胆囊胆固醇 结石的发病率有逐渐增高的趋势。据统计，我国约有1 2 亿人患胆结石， 其中一半以上是胆囊结石，占普外住院病人总数的1 0 ，很难做出早期 预防及诊断。多年的临床和动物实验研究表明，该病的形成有多种因素 共同参与和相互作用有关。胆汁中胆固醇浓度过饱和是胆囊胆固醇结石 形成的最主要生理改变【l 】，其形成可能与胆固醇的合成、摄取、转运、分 泌及转化等环节有关。此外还与胆囊收缩能力、胆囊粘膜的吸收和分泌 功能以及胆囊粘膜和结石中的细菌有判2 捌。 ? 瘦素( l 印t i n ) 于1 9 9 4 年由yz h a n g 等人发现，为肥胖基因( o b e s eg e n e ) 编码，由脂肪细胞合成和分泌具有多种功能的肽类激素，由1 6 7 个氨基 酸残基组成，分子量为1 4 1 6 l 池。瘦素主要有保持体内能量平衡、维持 正常体重，调节机体脂肪代谢、维持血糖及某些内分泌功能，并参与造 血、骨骼发育及生殖，具有广泛的生物学效应。 瘦素通过与其受体( o b r ) 结合发挥作用，其受体广泛存在于人体组织 中。瘦素与特异性瘦素受体结合后，可通过激活某些特定的信号传递通路， 调控特异性靶基因的转录。瘦素受体( o b r ) 是一种可溶性受体，属于i 类 细胞因子受体家族。协a 9 1 i a 【4 1 等1 9 9 5 年成功克隆了小鼠的瘦素受体 ( l e p r ) 基因，它定位于4 号染色体。人类瘦素受体基因位于1 号染色 体( 1 p 3 1 ) ，长7 0k b ，由2 0 个外显子和1 9 个内含子组成，共编码1 1 6 5 个 氨基酸巧6 】。由于其c 端编码的外显子上有不同的砌妊剪接导致了受体 胞内片断长度及氨基酸序列组成不同。现发现有六种同分异构体，分别为 o b 姒o b r b ，0 b r c ，o b r d ，o b r e ，o b i 也其中o b r b 的胞内结构域最长，由 3 0 2 个氨基酸组成，属于长亚型( o b 鼬) ，其余几种为短亚型( o b 黜) 。瘦素 进入血液循环后，通过血脑屏障后与主要分布于下丘脑弓状核( a r c ) 、背 内侧核( d m h ) 、室旁核( p m 及外侧区的o b 砒受体结合后可激活细胞内 信号转导途径，而发挥瘦素生物效应哺3 。 研究论文 瘦素及其受体与多种疾病的发生、发展均密切相关，特别是与肥胖、 糖尿病、心血管疾病等的发生及转归有一定关系，而肥胖则是胆石症的发 生的重要致病因素。n h a n e s 叫a t i o n a lh e a l t h 锄dn u t r i t i o ne x a 觚n a t i o n s u e y s ，全国健康和营养检查调查) 的研究表明瘦素与胆囊疾病相关，在 控制体重指数( b m i ) 和腰臀比之后，这种相关性不再存在f 7 1 。对于肥胖易 导致胆固醇结石的具体机制尚且不明，但瘦素的一些生物学效应均影响胆 囊胆固醇结石形成过程，因此提示瘦素可能参与了胆囊胆固醇结石的形成 过程，其水平高低也可能作为评估胆囊胆固醇结石易患性的一种指标。 胆囊胆固醇结石的形成与胆固醉的溶解和胆汁酸的代谢关系极为密 切。胆固醇不溶于水，但当胆汁中胆固醇与胆汁酸、卵磷脂按照一定比例 形成微胶粒( i n i c e l l e s ) 时呈溶解形态。微胶粒的周边为胆汁酸，中央为卵磷 脂，呈柱状排列，胆固醇嵌入中央部分形成胶粒，胶粒在胆汁中呈溶解状 态。这种溶解状态的保持需要胆汁中胆固醇、胆汁酸及卵磷脂保持一定比 例，这是一种动态的平衡。一旦破坏了三者之间的正常比例关系，动态平 衡被打破，则胆汁中胆固醇出现过饱和，胆固醇即可能析出沉淀形成结石。 国内目前临床瘦素及其受体表达水平与胆囊胆固醇结石关系的研究 较少，并且缺乏胆囊胆固醇结石患者血清瘦素及其受体表达与胆囊胆汁成 分变化和血脂水平之间的相关性研究。为了进一步揭示上述关系，我们研 究胆囊胆固醇结石病人的血清瘦素及其受体、血脂、脂蛋白、载脂蛋白和 胆汁中胆固醇和胆汁酸在胆囊胆固醇结石形成中的相互关系，以期进一 步解释胆固醇结石形成机制并为预防、治疗胆石提供理论依据。 材料与方法 1 研究对象 1 1 胆囊胆固醇胆石组 随机选择2 0 0 9 年1 0 月至2 0 1 0 年1 0 月河北省人民医院肝胆外科住院 病人中因胆囊胆固醇结石接受腹腔镜胆囊切除术的病人3 0 例，其中男1 2 例，女1 8 例，年龄2 9 6 7 岁，平均4 8 1 岁。所选病例均经b 超和手术证 实为胆囊结石且不伴胆管结石，术中所得结石使用胆石化学定性分类法均 证实为胆固醇结石，且术后病理证实胆囊无急性炎症改变。 研究论文 1 2 胆囊息肉病变样组 随机选择2 0 0 9 年1 0 月至2 0 1 0 年1 0 月河北省人民医院肝胆外科住院 病人因胆囊息肉行腹腔镜胆囊切除术的病人2 2 例。其中男8 例，女1 4 例，年龄2 3 6 5 岁，平均4 6 4 岁。所得胆囊标本均经术后病理证实为非胆 固醇性胆囊息肉( 术后病理证实为胆固醇性胆囊息肉的病例均不列入研究 范围) 。 以上所选病例两组间年龄、性别差异无统计学意义。两组患者全部排 除心、脑、肝、肾及内分泌系统疾病。近期未服用降低胆固醇药物和胆酸、 非甾体抗炎药及生长素等影响胆囊排空药物，三月内无包括胆系感染在内 的急性炎症病史。 2 取材方法 血液标本的采集：所有胆囊胆固醇结石及胆囊息肉样病变患者于入院 次日清晨7 时左右空腹平卧静脉采血，二者均禁食1 2 小时。取非抗凝血 4 m l ，2 小时内离心5 0 0 0 r m i n ，1 0 n l i n 后取血清，部分储存于4 c 冰箱中 备测血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白浓度，部分 置入2 0 待测瘦素。 胆囊标本采集：胆囊均是患胆囊结石和胆囊息肉样病变择期手术的腹 腔镜胆囊切除病人。术中在常规气腹成功后置入腹腔镜暴露胆囊后，在腹 腔镜指引下经皮肤行胆囊穿刺术抽取胆汁( 白胆汁病例不列入研究范围) ， 抽取胆汁时尽量抽空胆囊以避免因胆汁分层造成的误差。所得胆汁置于无 菌试管中，放入2 0 冰箱保存。胆囊切除后，无菌条件下取胆囊壁颈部 和体部部分全层组织，大小约o 5 锄o 5 c m ，置于无菌管内，迅速放入液 氮中冷冻，随后置于8 0 冰箱内保存供检测用。以上所取标本三个月内 行各项指标检测。 3 胆石化学定性分类法 采用叶应妩等学者采取的检测方法：将术中取出的胆囊结石用生理盐 水反复冲洗干净、晾干后研磨成粉末状，取少量胆石粉置于白色陶瓷杯中 先加入醋酸酐5 6 滴，再加入浓硫酸l 滴，观察显色反映。如胆石粉末立 即呈现翠绿色并由中心向四周放射表明为胆固醇结石，如见到呈红色，则 表明为胆色素类结石。( 加入浓硫酸后需立即观察显色反应，反应进行两 分钟后两类结石均变为翠绿色) 研究论文 4 检测指标 所检测指标包括身高、体重、体重指数( b m i ) 、血清总胆固醇( t c h ) 、 甘油三酯( t g ) 、低密度脂蛋白( l d l ) 、高密度脂蛋白( ( 皿l ) 、载脂蛋白 越( a p o - a i ) 、载脂蛋白b ( a p o b ) 、载脂蛋白e ( a p o - e ) 浓度及血清瘦素水 平及瘦素受体表达水平、胆汁中总胆固醇和总胆汁酸浓度。 5 主要仪器和试剂 5 1 主要仪器 b e c k m a nl x 2 0 型全自动生化分析仪美国b e c 妇公司 k a 1 0 0 型台式离心机上海安亭科学仪器厂 a l i s e i 全自动酶标仪意大利西亚克公司 全自动酶标洗板机北京拓扑公司 7 5 6 m c 型缈h 可见分光光度计上海精密科学仪器有限公司生产 p e 9 6 0 0 型p c r 扩增仪美国p e 公司生产 e c p 3 0 0 0 电泳仪及电泳槽北京六一机器厂生产 凝胶图象分析系统法国v l 公司b i o p r o f i f m d f 3 8 2 e 型超低温保存箱日本s a n y o 生产 高速冷冻离心机美国s i 舯唿公司生产 5 2 主要试剂： 人瘦素测定试剂盒( e u s a )晶美生物工程有限公司 t r i z o l 美国i n v i 打o g e n 公司 d e p c 美国s i g m 公司 r t i 沁a g e n t s日本t a k a r a 公司 p c r r e a g e n t s日本t a k a r a 公司 d n a m 冰e r日本t a k a r a 公司 6 检测方法 6 1 血脂的测定 用酶法检测总血清总胆固醇( t c h ) 、甘油三酯( t g ) 、低密度脂蛋白 ( l d l ) 、高密度脂蛋白( ( 皿l ) 、载脂蛋白a i ( a p o - a d 、载脂蛋白b ( a p o b ) 、 载脂蛋白e ( a p o 。e ) 浓度。应用的仪器为美国b h a 悄n 公司的全自动生 化l x 2 0 分析仪。 6 2 胆汁中脂质成分的测定 研究论文 将2 0 冰箱内保存的胆囊胆汁2 i n l ，在4 下解冻后以o 9 的生理盐 水1 ：5 稀释后，5 0 0 0 r m i n 离心1 0 m i n 除胆汁中的固体颗粒成分。取l m l 胆汁 标本置于无菌透明试管中，在4 条件下使用2 0 w 白色日光灯连续照1 2 h ， 降解胆汁中的胆红素等胆色素成分【8 9 1 。应用美国b e k m a n 公司的全自动 生化l x 2 0 分析仪对上述过程处理完毕的胆汁中的胆固醇、总胆汁酸进行 测定。 6 3 瘦素的测定 瘦素的测定采用双抗体夹心e l i s a 法。瘦素试剂盒晶美生物工程有 限公司提供，该试剂盒板内、板间变异系数 2 5 的人群中，胆囊胆固醇结石组患者b m i 大于胆囊息肉样病变组， 血清瘦素水平以及瘦素受体m 】烈a 表达水平均显著高于对照组，差别具 有统计学意义( p = o 0 0 3 o 0 5 ，p = o o o o o 0 5 ) 。 5 胆囊胆固醇结石组与胆囊息肉样病变组瘦素及其受体表达与其他 检测指标的相关性( t a b l e3 ) 。 胆囊胆固醇结石组中血清瘦素水平与b m i 、t g 、t c 、a p o a i 均呈 正相关( 1 ，= o 8 51 ，p = o o o o ；y = o 6 3 3 ，p = o 0 0 2 ；f o 2 2 4 ， p = o 0 2 5 ； f o 3 4 6 ，p - o 0 1 8 ) ，与h d l ( f o 2 0 5 ，p = o 0 1 4 ) 呈负相关( p o 0 5 ) 。胆囊息肉样病变组中血清瘦素与b m i 呈正相关 ( f o 7 6 5 ，p = o o o o ) ，血清瘦素与t g 舻o 1 2 5 ，p = o 8 4 5 ) 、血清瘦素与 t c 忙：o 2 8 9 ，p = o 3 5 4 ) 、血清瘦素与) l 忙：o 3 1 7 ，p = o 4 4 5 ) 、血清瘦素与 u ) l 忙= o 3 2 9 ，p = o 2 7 9 ) 、血清瘦素与a p o - a i 件= 0 3 7 7 ，p = o 2 0 3 ) 、血清瘦素 与a p o b ( 尸o 2 8 7 ，p = o 2 5 5 ) 、血清瘦素与a p o e ( f 0 0 31 ，p = o 7 5 9 ) 均不存 在相关关系。胆囊胆固醇结石组中瘦素与胆汁总胆固醇呈正相关 ( 丫= 0 3 8 4 ，p = o o o o ) 、与总胆汁酸呈负相关( f o 5 4 8 ，p = o 0 2 4 ) 。胆囊息肉 样病变组血脂与胆汁中的成分未发现相关关系( f o 4 9 2 ，p = o 5 6 3 ； f o 4 6 6 ，p = o 1 3 7 ) 。 研究论文 1 0 0 _ b p 2 5 0 b p 5 0 0 b p 7 5 0 b p l 0 0 0 b p 2 0 0 0 b p 附图 ml2345678 f i g 1 1 、2 、3 、4 ：g a l l b l a d d e rc h 0 1 e s t e lg a l l s t o n e ；5 、6 、7 、8 ：g a l l b l a d d e r p 0 1 y p i ；m ：n 洳 1 0 0 b p 2 5 0 b p 5 0 0 b p 7 5 0 b p 1 0 0 0 b p 2 0 0 0 b p 1 4 研究论文 l口 2 口 f i g 3 ：l 印t i nc o r r e l a t et oa p o 一触( g a l l b l a d d e rc h o l e s t e r o lg a l l s t o n ey = o 3 4 6 ，p = 0 o18 ；g a l l b l a d d e rp o l y p iy = 0 3 7 7 ，p = o 2 0 3 ) l ， 口 2 口 f i g 4 ：h d lc o 玎e l a t et 0a p o - m ( g a j l b l a d d e rc h o l e s t e r 0 1g a l l s t o n ey = o 2 0 5 ，p = o 0 1 4 ；g a l l b l a d d 盯p o l 河y = o 3 1 7 ，p = o 4 4 5 ) 1 5 研究论文 附表 t a b l e1d a l ao fb n 、t c 、t g 、h d l 、l d l 、a 舯一越、a 舯一b 、a p o e