土壤过氧化氢酶活性测定方法(完整).doc_第1页
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高锰酸钾滴定法1. 试剂配制：(1)0.3%过氧化氢溶液：（1：10030%的H2O2和水） （0.5molH2O2+49.5ml蒸馏水） （1ml30%H2O2+99ml蒸馏水）(2)3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）(3)0.1N高锰酸钾溶液：（1.58gKMnO4+100ml蒸馏水）2. 高锰酸钾的标定：准确称取约0.2 g在110干燥至恒量的基准草酸钠。加入250 mL新煮沸过的冷水、10 mL硫酸，搅拌使之溶解。将草酸钠溶液加热到75 85 (即开始冒蒸气时的温度)，趁热用待标KMnO4 溶液进行滴定。开始滴定时反应速度很慢，待溶液中产生M n2+后，反应速度加快，但滴定时仍必须是逐滴加入，至溶液呈粉红色，半分钟内不褪色即为终点。注意滴定结束时的温度不应低于60。2MnO4- + 5C2O42- + 16H+ 75 85 Mn 2+ +10CO2 + 8H2O。参考：高锰酸钾标准溶液标定方法的改进及注意事项王继莲3. 测定：准确称取2 g风干土置100 mL锥形瓶加入40 mL蒸馏水和5 mL0.3%过氧化氢（现配），另设对照 (40 mL蒸馏水和5 mL0.3%过氧化氢)在往复式振荡机上振荡20 min加入5 mL3N硫酸（以稳定未分解的H2O2）用慢速型滤纸过滤，吸取25 ml滤液，用0.1N高锰酸钾的滴定至淡粉红色4结果计算土壤的过氧化氢酶活性，以单位土重的0.1N KMnO4毫升数(对照与试验测定的差) 表示。备注：以容量法测H2O2的酶活：Kappen（1913）首先介绍硫酸存在下用高锰酸钾滴定剩余的过氧化氢测定酶活。此法根据H2O2与土壤相互作用时，未分解的H2O2的数量用容量法（常用高锰酸钾滴定未分解的H2O2）测定H2O2的酶活2KMnO45H2O23H2SO42MnSO4K2S
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