维生素类药物的分析.ppt

2019年12月11日,药物分析,主讲:罗容珍,PharmaceuticalAnalysis,第十四章维生素类药物的分析,2019年12月11日,维生素类药物的分析,维生素,维持人类机体正常代谢功能所必须的一类活性物质,主要用于机体的能量转移和代谢调节,体内不能合成,须从食物中摄取。,通俗来讲，即维持生命的物质，是维持人体生命活动必须的一类有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质。维生素在体内的含量很少，但不可或缺。,2019年12月11日,维生素类药物的分析,维生素,醇,从化学结构上来讲，维生素类均属于有机化合物，但并非同一类化合物。,酯,酸,胺,酚,醛,各具有不同的理化性质和生理作用,2019年12月11日,按溶解度分,2019年12月11日,维生素类药物的分析方法,生物法,微生物法,化学法,物理化学法,都是依据药物的化学结构、理化性质与生物特性来进行分析,2019年12月11日,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,主要讲解,2019年12月11日,维生素A的分析,维生素A,是一种不饱和脂肪醇，在自然蜀中主要来源于鲛类海鱼肝脏中提取的脂肪油（鱼肝油）。,鲛类海鱼？,具有多种异构体，有不同的名称，其中活性最好的是维生素A1，也是通常所指的维生素A,2019年12月11日,维生素A的分析,维生素A,具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体,2019年12月11日,维生素A的分析,维生素A,具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体,维生素A醇（Retinol),2019年12月11日,维生素A的分析,维生素A,具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体,维生素A醋酸酯（VitaminAAcetate),2019年12月11日,维生素A的分析,维生素A,具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体,维生素A棕榈酸酯（VitaminAPalmitate),2019年12月11日,维生素A的分析,维生素A,具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体,去氢维生素A（A2dehydroretinol),2019年12月11日,维生素A的分析,维生素A,具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯，具有多个异构体,去水维生素A（A3anhydroretinol),2019年12月11日,第一节VitA,Retinol(VitAalcohol),VAacetate,VApalmitate,2-CisNeovitaminAa4-CisNeovitaminAb2,4-dicisNeovitaminAc6-CisIsovitaminAa,2019年12月11日,第一节VitA,二、主要性质,溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。不稳定性：含有多个不饱和键，性质不稳定，易被被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大吸收，可用于鉴别与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳定的蓝色,2019年12月11日,第一节VitA,二、鉴别试验,1.三氯化锑反应(Carr-Price反应),书上的有点小错误,2019年12月11日,第一节VitA,二、鉴别试验,反应应在无水无醇条件下进行。因为水可使三氯化锑水解，而乙醇可以使碳正离子作用而使反应不能进行,Notice,2019年12月11日,第一节VitA,2.UV,VitA,VitA3,维生素A在无水乙醇盐酸溶液中溶解,立即进行UV扫描,在360nm处有一最大吸收峰.如1.水浴加热30s,迅速冷却,此过程发生脱水反应,扫描时出现三个吸收峰,2019年12月11日,第一节VitA,2.UV,VitA,VitA3,3.TLC：三氯化锑显色，磷钼酸显色,维生素A,去水维生素A,最大吸收峰向长波方向移动：红移,2019年12月11日,三、含量测定,维生素A的测定CHP收载三种,HPLC法,UV,三氯化锑法,2019年12月11日,三、含量测定,UV,维生素A常混有杂质，包括多种异构体，氧化降解产物，合成中间体，副产物等以及常用稀释油类。都有紫外吸收，干扰测定。,咋办呢？,请用三点校正法！,2019年12月11日,第一节VitA,维生素A在325-328nm的波长范围内具有最大吸收，其最大吸收峰的位置随溶剂的不同而异。如下：,应用三点校正法时要注意,2019年12月11日,第一节VitA,A,nm,VitAsample,pureVAacetate,impurities,测定原理,杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（假设）物质对光的吸收具有加和性。（真理）,2019年12月11日,第一节VitA,第一法等波长差法,2,1,3,328,340,316,A1,A2,A3,A1,A2,A3,X1,X2,X3,设：,已知,A1=A1-X1=A1-(m1+C),A2=A2-X2=A2-(m2+C),A3=A3-X3=A3-(m3+C),VitA醋酸酯,Y=mX+C,2019年12月11日,第一节VitA,第一法等波长差法,2,1,3,328,340,316,A1,A2,A3,A1,A2,A3,X1,X2,X3,A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340),VitA醋酸酯,经过一系列变换,得出下式,通过实验求出A1、A2、A3，再用纯品求出K1、K2，再转换,波长为chp2010药典规定,2019年12月11日,第二法等吸收比法,第一节VitA,310,325,334,A2=A3=6/7A1,A1,A2,A3,A2,A1,A3,F,L,D,M,E,A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334,VitA醇,波长为chp2010药典规定,2019年12月11日,测定方法,一、基本步骤,第一步：选择A（A328或A328(校正后)）,选择依据所选A值中杂质的干扰已基本消除,第二步：求,第三步：求效价（每克供试品所含维生素A的国际单位数）,规定,具体步骤,测定A,2019年12月11日,测定方法,1IU=0.344gVitA醋酸酯,1gVitA醋酸酯=106g/0.344(g/IU)=2.907106IU,VitA醋酸酯换算因子=2.907106IU/1530=1900,2019年12月11日,第四步：求标示量(百分),测定方法,Why?,2019年12月11日,第四步：求标示量,测定方法,这是因为标示量是以效价的形式存在的,2019年12月11日,第四步：求标示量,测定方法,测定含量,单位质量1g对应的效价,效价占单位样品质量的百分比,效价占单位质量的百分比,经过变形可得下式,2019年12月11日,第四步：求标示量,测定方法,这是因为标示量是以效价的形式存在的,2019年12月11日,二、第一法纯度高的VitAacetate,测定方法,max应为328nm。,若max不在326329nm之间，则不能用本法测定，改为第二法,A值的选择,测量吸光度,判断,2019年12月11日,测定方法,A.若【(A/A328nm)-规定值】(0.02)A328不校正,B.若【(A/A328nm)-规定值】有超过(0.02)者,A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340),2019年12月11日,测定方法,三、第二法VitAalcohol,皂化法6/7法,样品前处理,酯乙醚提取VA醇，洗涤，过滤异丙醇溶解残渣,在300，310，325，334nm处分别测Ai,max应为325nm。,若max不在323327nm之间，则供试品中杂质含量过高，改为色谱法将未皂化部分纯化后进行测定。,2019年12月11日,测定方法,A.若(A300/A325)0.73,A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334,B.若(A300/A325)0.73色谱法纯化后再测,2019年12月11日,测定方法,应用示例一,VitAD胶丸中VitA的含量测定,精密称取本品(规格10,000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物0.1287g至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度如下，计算VitA的标示量百分含量。,2019年12月11日,测定方法,A=A328校正,2019年12月11日,测定方法,2019年12月11日,测定方法,应用示例二,称取VitA滴剂0.1082g(标示量50000I.U./g)，加环已烷至50.0ml，取出5.0ml置于另一50ml量瓶中，加环已烷至刻度，摇匀后置石英比色皿中，以环已烷为空白，分别于以下波长处测得相应的吸收度值，试求此滴剂中VitA的标示量百分率：,2019年12月11日,A=A328校正,测定方法,2019年12月11日,测定方法,2019年12月11日,第一节VitA,(二)HPLC,RF-HPLC同时测定人血清中VitA和VitE含量,色谱条件,色谱柱：C18流动相：甲醇-水流速：1.2ml/min检测波长与AUFS：08min(330nm,0.25AUFS);8min后(292nm,0.05AUFS)内标：VitA酯,VitA,VitE,2019年12月11日,(三)三氯化锑比色法,第一节VitA,max618nm620nm,2019年12月11日,习题,1.药典中的杂质检查按照操作方法不同可分为下列三种类型对照法、灵敏度法、比较法。,2019年12月11日,习题,2.药物中存在的杂质，主要来源于两个方面，即和。,2019年12月11日,习题,3.药物中微量的氯化物在酸性条件下与反应，生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液（浓度为）在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，判断供试品中氯化物是否符合限量规定。,2019年12月11日,习题,4.巴比妥类药物具有的特性为：A.弱碱性B.弱酸性C.易与重金属离子络合D.易水解E.具有紫外特征吸收,2019年12月11日,习题,5.苯巴比妥钠与铜盐的鉴别反应生成物为:A.紫色B.绿色C.蓝色D.黄色E.紫堇色,2019年12月11日,习题,6巴比妥类药物在吡啶溶液中与铜吡啶试液作用，生成配位化合物，显绿色的药物是:A.苯巴比妥B.异戊巴比妥C.司可巴比妥D.巴比妥E.硫喷妥钠,2019年12月11日,习题,7.巴比妥类药物的鉴别方法有:A.与钡盐反应生成白色化合物B.与镁盐反应生成红色化合物C.与银盐反应生成白色沉淀D.与铜盐反应生成有色产物E.与氢氧化钠反应生成白色沉淀,2019年12月11日,习题,8.于Na2CO3溶液中加AgNO3试液，开始生成白色沉淀经振摇即溶解，继续加AgNO3试液，生成的沉淀则不再溶解，该药物应是:A.盐酸可待因B.咖啡因C.新霉素D.维生素CE.苯巴比妥,2019年12月11日,习题,9.与NaNO2H2SO4反应生成橙黄至橙红色产物的药物是:A.苯巴比妥B.司可巴比妥C.巴比妥D.硫喷妥钠E.硫酸奎宁,2019年12月11日,习题,10.银量法测定苯巴比妥钠含量时,若用自身指示法来判断终点,样品消耗标准溶液的摩尔比应为:A.1:2B.2:1C.1:1D.1:4E.以上都不对,2019年12月11日,习题,11.用酸量法测定巴比妥类药物含量时，适用的溶剂为:A.碱性B.水C.酸水D.醇水E.以上都不对,2019年12月11日,第二节VitB,亦称盐酸硫胺,具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能，主要用于治疗脚气病、多发性神经炎和胃肠道疾病,氨基嘧啶环,噻唑环,亚甲基,季铵,2019年12月11日,第二节VitB,性质,噻唑环,溶解性,季铵,干燥品在空气中迅速吸收4%的水分。在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性,2019年12月11日,第二节VitB,性质,硫色素反应,噻唑环在碱性介质中可开环，再与嘧啶环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈蓝色荧光,2019年12月11日,第二节VitB,性质,分子中具有两个杂环，可与某些生物碱沉淀试剂如碘化钾、三硝基苯酚、碘溶液、硅钨酸反应生成恒定的沉淀,紫外吸收特性,2019年12月11日,第二节VitB,性质,维生素B1为盐酸盐，可呈氯化物的鉴别反应,氯化物的特征,2019年12月11日,第二节VitB,一、Identification,1.硫色素荧光反应为维生素B1所特有,H2O,2019年12月11日,溶于丁醇，显蓝色荧光,第二节VitB,2019年12月11日,第二节VitB,取本品约5mg，加NaOHT.S.2.5ml溶解后，加铁氰化钾T.S.0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使分层，上层显强烈的蓝色荧光；加酸使呈酸性，荧光即消失；再加碱使呈碱性，荧光又重现。,方法,2019年12月11日,第二节VitB,沉淀反应,维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀B.H2HgI4,维生素B1与苦酮酸生成扇形白色结晶,维生素B1与碘生成红色沉淀B.HI.I2,维生素B1与硅钨酸反应生成白色沉淀B2.SiO2(OH)2.12WO3.4H2O,2019年12月11日,氯化物反应,本品是盐酸盐,水溶液呈氯化物的鉴别反应,硫元素反应,2019年12月11日,红外分光光度法,本品,对照品,对照,2019年12月11日,第二节VitB,三、含量测定,非水溶液滴定法(Non-aqueousTitrimetry)紫外分光光度法(UV)硫色素荧光法(ThiochroneFluoremetry),2019年12月11日,第二节VitB,三、含量测定,非水滴定法原理,维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团,在非水溶液中均可与高氯酸作用,以电位指示终点.根据消耗的高氯酸量即可算出维生素B1的含量.,2019年12月11日,第二节VitB,1.Non-aqueousTitrimetry,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,2019年12月11日,第二节VitB,紫外分光光度法原理,维生素B1分子中含有共轭双键结构,在紫外区有吸收,根据最大吸收波长处的吸光度即可以计算含量.,2019年12月11日,第二节VitB,2.UV,10.1MHCl2H203H3PO4buffer4alcohol,246,232,255,2019年12月11日,第二节VitB,3.ThiochroneFluoremetry,硫色素荧光法,2019年12月11日,第三节VitC,烯二醇结构,共轭酸性强,酸性弱,内酯结构,2019年12月11日,第三节VitC,一、主要性质,溶解性酸性旋光性还原性,L-抗坏血酸,(有生物活性),L-二酮古罗糖酸,L-去氢抗坏血酸,无生物活性,2019年12月11日,第三节VitC,水解性,糖类性质,50,UV,2019年12月11日,第三节VitC,二、鉴别,1.与AgNO3反应,2.与2,6-二氯靛酚反应,氧化型,还原型,酸式色碱式色,3.与氧化剂反应,2019年12月11日,第三节VitC,4.与糖类反应,H2O,其它还有薄层色谱法,百分吸收系数法,2019年12月11日,杂质检查,溶液的澄清度与颜色检查维生素C长期贮存会被氧化变色,因而应通过此项检查控制其纯度.铁与铜离子的检查维生素C中可能存在一些铁与铜离子,因而可以采用标准添加对照法进行检查.草酸的检查一般加CaCl2形成草酸钙对测定其浊度.,2019年12月11日,三、含量测定(强还原性),第三节VitC,1.碘量法,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,2019年12月11日,2.2,6-二氯靛酚滴定法,第三节VitC,快速滴定，用于含VitC的制剂与食品分析,3.HPLC,人血浆中VitC浓度的HPLC法测定,2019年12月11日,第三节VitC,标准溶液制备：取VC对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加10%偏磷酸稀释至刻度，得维生素C储备液浓度为1mg/ml，置冰箱中2保存，3日内可用。血浆样品预处理：取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中，3000rpm离心5min；取血浆0.5ml，加入0.5ml10%偏磷酸溶液，涡旋混合0.5min，离心，分取上清液，置冰箱2贮存，直至测定。稳定性考察：VC在血浆中不稳定，在5%偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。样品测定：每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。,2019年12月11日,第四节VitD,胆甾醇,7-脱氢胆甾醇,维生素D3,维生素D2,麦角甾醇,甾醇衍生物,2019年12月11日,第四节VitD,维生素D2维生素D3,溶解性:在三氯甲烷中极易溶解,在丙酮乙醇乙醚中易溶.不稳定性:双键极不稳定,易氧化变色,毒性增强.旋光性:有五到六个手性碳原子,均具有旋光性.显色反应:在三氯甲烷+醋酐+硫酸会从黄到紫再到绿色.紫外吸收:具有吸收基团,2019年12月11日,第四节VitD,二、鉴别,显色反应:,三氯甲烷+醋酐+硫酸,三氯甲烷+三氯化锑,三氯化铁=橙黄色,初显黄色逐渐变红迅即变紫最后变绿,溶液显橙红色,逐渐变粉红色,二氯丙醇和乙酰氯=绿色,2019年12月11日,第四节VitD,二、鉴别,比旋度鉴别,测定比旋度进行鉴别,其它鉴别法,TLCHPLC熔点UVIR等,2019年12月11日,第四节VitD,三、杂质检查,1、麦角醇的检查90乙醇溶解后，加洋地黄皂苷溶液，放置18h，不得发生浑浊。2、前维生素D的光照产物280nm320nm,2019年12月11日,第四节VitD,Ch.P2010NP-HPLC,含量测定,USP34-NF29,化学法,色谱法,微生物法,BP2010,化学法,色谱法,光谱法,2019年12月11日,固定相：硅胶流动相：正己烷正戊醇（997：3）检测波长：254nm,第一法：用于无维生素A醇及其他干扰的供试品第二法：(1)皂化提取;(2)净化用色谱柱系统分离收集维生素D，得供试品溶液B;(3)按第一法进行测定。第三法：当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后，前维生素D峰仍受干扰时，采用此法。,第四节VitD,2019年12月11日,第五节VitE,苯并二氢吡喃醇,VitE(dl-TocopherylAcetate),SyntheticNatural,2019年12月11日,苯并二氢吡喃环+饱和烃链,第五节VitE,溶解性水解性氧化性紫外吸收,二、鉴别,1.硝酸反应,2019年12月11日,第五节VitE,2.三氯化铁反应,2019年12月11日,第五节VitE,4.三氯化铁反应,薄层板硅胶G,展开剂环己烷-乙醚（4：1）,显色剂硫酸（1055）,VitERf=0.7,2019年12月11日,第五节VitE,三、杂质检查,1.酸度2.生育酚,取VitE0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml,2019年12月11日,第五节VitE,四、含量测定,载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标正三十二烷n500R2,1.GCCh.P,USP内标十六酸十六醇酯R1.0,2019年12月11日