(三)网织红细胞计数PPT课件.ppt

实验三网织红细胞计数,一、实验原理网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构，可在显微镜下识别。计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比，或红细胞计数结果报告其绝对值。,1,网织红细胞（Ret）,是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。（、型）,2,网织红细胞,3,计数方法,1、普通光学显微镜法：活体染色后推片镜检2、网织细胞计数仪法：荧光染色后用流式细胞术计数,4,二、试剂器材,1、试剂10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液2、器材毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20mm（较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）,5,三、操作步骤,1.染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合（玻片法）；试管法取染液2滴入试管，加血2滴混匀，封闭好，待15分钟以上时间，2.推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜，3.低倍镜浏览，选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜，在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视野RBC总数1000为止）。,6,Miller窥盘,A,3,1,B,将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。,7,8,四、计算,1.Miller窥盘法：网织红细胞（Retic）百分率(%)=（大方格内Retic总数）/（小方格内RBC总数9）100%2.直接计数法：网织红细胞（Retic）百分率(%)=多个视野内Retic总数/多个视野内RBC总数100%,9,五、注意事项,1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动，使染料和血液混合，防止凝固。2.染色时间一定要充足，混合后不能立即推片，室温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻片防止蒸发。3.染液与血液比例以1：1为宜，贫血适当加血量。4.涂片厚薄均匀适宜，弓形移动，多个区域计数5.试剂应定期重配，以免变质沉淀。6.与变性珠蛋白小体鉴别,10,六、参考值,成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）新生儿：0.02-0.06（2%-6%）儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%）成人绝对值（24-84）109/L,11,七、临床意义,（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型再障时，明显降低。绝对值低于5109/L可做为急性再障的辅助诊断指标。失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常。营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持正常、轻度升高或降低。,12,（2）评价疗效网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗23d后，网织红细胞计数值开始上升，710d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。,13,（3）放、化疗监测机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。,14,RPI=病人网织红细胞（%）/2*病人HCT/正常人HCT（男0.45，女0.40）临床应用：3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；,网织红生成指数（Reticulocyteproductionindex,RPI）,15,