HPV分型试剂盒及市场各产品比较.doc

hpv分型试剂盒1、 hpv目前市场上主要产品：杂交法（达安19、凯普21、亚能23、透景26）；实时荧光pcr（之江13种高危分型、港龙凯普亚能13种高危不分型、达安8个型定量）；第二代杂交捕获法（hc2）等2、操作方法：200ul标本hpv所有厂家标本处理操作流程（包括之江生物，都大同小异）：12000rpm离心5min沉淀加1ml生理盐水混匀12000rpm离心5min沉淀加100ul核酸提取液混匀100温浴10分钟12000rpm离心5minpcr试剂配制点样上pcr仪扩增hpv实验：a、杂交法：首先加样上pcr仪做扩增，上机时间大约一个半小时左右。pcr完成后做杂交，目前市场上有手工杂交和使用杂交仪杂交。操作时间2-4个小时。b、第二代杂交捕获法（hc2）: 原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测, c、荧光定量pcr：直接上机通过荧光信号累积实时监测整个pcr进程，之江生物是用多重pcr对标本进行准确的13个高危型的具体分型，其他不能具体分型。举例之江产品：之江八管双通道仪器(双色荧光pcr仪器都可以用)：123456789101112amix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1bmix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2cmix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3dmix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4emix5mix5mix5mix5mix5mix5mix5mix5mix5mix5mix5mix5fmix6mix6mix6mix6mix6mix6mix6mix6mix6mix6mix6mix6gmix7mix7mix7mix7mix7mix7mix7mix7mix7mix7mix7mix7hmix8mix8mix8mix8mix8mix8mix8mix8mix8mix8mix8mix8一排八管做一个标本即可具体分型！结果判断：hpv核酸荧光pcr检测混合液若fam通道ct值35，结果判断为若vic通道ct值35，结果判断为mix116+56hpv16hpv56mix218+45hpv18hpv45mix335+59hpv35hpv59mix439+51hpv39hpv51mix558+52hpv58hpv52mix631hpv31mix733hpv33mix868hpv68四管四通道仪器（abi7500、罗氏480、伯乐cfx96、slan96孔等四色荧光pcr仪器）：123456789101112amix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1bmix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2cmix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3dmix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4emix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1mix1fmix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2mix2gmix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3mix3hmix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4mix4四管做一个标本即可具体分型！结果判断：hpv核酸荧光pcr检测混合液若fam通道ct值35，结果判断为若vic通道ct值35，结果判断为若610通道ct值35，结果判断为若670通道ct值35，结果判断为mix116+56hpv16hpv56mix218+52+58+31hpv18hpv52hpv58hpv31mix335+45+33+68hpv35hpv45hpv33hpv68mix439+51+59hpv39hpv51hpv593、 产品分析比较：之江hpv试剂hc-ii试剂检测方法荧光pcr法二代杂交捕获核酸检测技术检测hpv分型13种高危型具体分型不能分型检测时间1.5-2小时4小时以上操作简单繁琐（涉及10多种试剂配制等）检测过程pcr扩增，仪器自动完成多步加液安全性闭管反应，安全性高多种试剂，操作过程接触有毒物质检测仪器pcr仪器分子杂交仪等专用仪器灵敏度高灵敏较灵敏检测方式闭管检测，有效防止污染不进行pcr扩增，无污染检测通量基本已适合目前医院标本量通量高结果分析仪器自动分析人工阅读或需专用阅读仪及软件样本类型生殖道分泌物、宫颈细胞等生殖道分泌物、宫颈细胞等实验室要求pcr实验室验收不需之江hpv试剂凯普hpv试剂检测方法荧光pcr法核酸扩增及导流杂交技术检测时间1.5-2小时4-8小时pcr反应体积40ul25ulpcr扩增模板4ul1ul检测仪器pcr仪器pcr仪器及分子杂交仪检测hpv型别高危13型21型灵敏度高灵敏较灵敏样本类型生殖道分泌物、宫颈细胞等生殖道分泌物、宫颈细胞等检测方式闭管检测，有效防止污染杂交为开放式反应，易产生交叉污染检测通量基本适合目前医院标本量通量高结果分析仪器自动分析人工阅读或需专用阅读仪及软件生物安全闭管反应，安全性高杂交过程会接触有危险物质如：nbt/bcpi有毒溶液等多种混合型抗干扰能力强干扰，不宜检测4、上海之江hpv优劣势: 优点：闭管pcr操作，避免扩增污染能够对13个高危型精确分型灵敏度高，操作简单，减少了杂交的操作程序，一个实验大约2个小时内完成针对开放荧光pcr检测系统，无需额外增加设备，有人员培训基础。可以相对定量：ct值30（+）；30 ct值24（+）；