[doc格式] 金胺“O”荧光染色法在结核病细菌学检验中的应用.doc

金胺“o”荧光染色法在结核病细菌学检验中的应用中国卫生检验杂志2008年5月第l8卷第5期chinesejournalofhealthlaboratorytechnology,may2008;vol18no5851【微生物检测方法】金胺”0”荧光染色法在结核病细菌学检验中的应用戴学海,金法祥,汤佳良,许鹏(浙江省绍兴市第六人民医院,浙江绍兴312000)摘要目的:比较两种抗酸杆菌染色方法的差异.方法:采用金胺”0”荧光染色法和萋一尼染色法同时对同一病人标本进行检测.结果:经过240例标本对比实验,荧光染色组84例阳性,其阳性率为35.o%,萋一尼染色组7o例,阳性率为29.2%,经检验,x2=1.88,p>0.05,无显着性差异.在两组结果1+的阳性对比中,荧光染色组为15.8%,而抗酸染色组为9.6%,经检验=5.56,p<0.05,两种方法有差异;而2+,3+,4+的阳性率p值均大于0.05,无显着性差异.结论:金胺”0”荧光染色组检出率明显高于萋一尼染色组,尤其是痰液标本菌量是1+,对那些病变轻,排菌量少的肺结核病人的诊断具有重要意义.荧光染色镜检时间短,工作效率高,适用于大量标本的检测.关键词荧光染色;抗酸染色;抗酸杆菌中图分类号r446文献标识码a文章编号10048685(2008)05085102applicationoffluorescencestainofauramineotoinspectionoftuberculosisbacteriologydaixuehai,jinfaxiang,tangjialiang,xupeng(shaoxingsixthpeopleshospital,shaoxing312000,china)abstract0bjective:tocomparethedifferencesbetweenthesetwowaysofacidfaststains.methods:testsimultaneouslyonthespecimensfromthesamepatientsbythewaysoffluorescencestainofauramineoandziehineelsenstain.results:care.fulcontrastofthe240specimens,thereare84onesinthegroupofflouescencestain,whicharepositive,whosepositiverateis35.o%.whileinthegroupofziehineelsenstain,thereare70specimensprovedpositive,whosepositiverateisjust29.2%.throughtheinspectionof,resultingin=1.88,p>0.05,wecanseethereisondifferencebetweenthesetwoways.intermsofwatchingtheirpositivecontrastof1+.therateoffluorescencestainis15.8%.buttherateofacidfaststainisonly9.6%.meanwhile,throughtheinspectionofx,whichresultedin=5.56,p<0.05,obviously,therearesomedifferencesbetweenthem.whatsparedwiththeirpositiveratesof2+.3+.4+.theyareallover0.05.whichisalmostthesame.conclusion:comparedwithziehineelsenstain,fluorescencestainofauramineohasaclearadvantageinseekingrates.especiallytothepatientsofpulmonarytuberculosis.whosebacteriumvolumeofsputumspecimensis1+andthepathologicalchangesarelighterandthebacteriumcapacitiesaresmaller,atthesametime.becauseoffluorescencestain,weneedspendlesstimeonlensexams.whichisevenmoreefficient.nodouhisfitsfortestingagreatspecimen.keywordsfluorescencestain;acidfaststain;acidfastbacillus目前,临床上结核病细菌学的诊断主要采用抗酸染色法,即萋一尼染色法,该法已成为抗酸杆菌检测的经典方法,但因该法检测时间长,阳性检出率低,已无法满足临床诊断需要.我们采用金胺”o”荧光染色法检测240例痰液标本,通过与萋一尼法对比试验,证明荧光染色法能提高抗酸杆菌的阳性检出率.1材料与方法1.1荧光染色液的配制染色液:金胺”0”1g溶于95%乙醇100ml中,加5%石炭酸液900ml混匀即可.脱色剂:3%盐酸酒精.复染剂:高锰酸钾0.5g,溶于100ml蒸馏水.1.2抗酸染色液配制作者简介戴学海(1962),男,学士,副主任医师,主要从事老年内年及基础研究工作.按照”全国结核病诊断细菌学检验规程”进行.1.3标本来源结核病人痰液标本来自我院门诊或住院结核病人,这些病人均经ct,ppd试验及结核抗体检测等临床诊断为肺结核病人.1.4操作方法每份痰液标本按标准(2cm1cm)涂两张大小及厚度相当的片子待干,火焰固定,将痰涂片随机分成荧光染色组和抗酸染色两组进行染色和镜检.1.5染色方法将痰液涂片用荧光染色液染10min,水洗后用3%的盐酸酒精脱色12min,至外观无黄色为止,水洗后加复染剂12min,水洗,晾干待检.抗酸染色法按全国结核病细菌学检验规程进行.(下转第923页)中国卫生检验杂志2008年5月第18卷第5期chinesejournalofhealthlaboratorytechnology,may2008:vol18no5923统计结果显示,微生物性病原是导致食物中毒的主要因素,其中2003,2004年副溶血性弧菌导致的食源性疾病分别占微生物性食源性疾病的40%和23%,已经超过沙门氏菌成为微生物性食物中毒最大的致病菌,而深圳市20032006年细菌性食物中毒的病因分析中,副溶血性弧菌也是排在首位.副溶血性弧菌嗜盐畏酸,在无盐培养基上不能生长,在食醋中只能存活1min,加热至56c510min灭活.由该菌引起的食物中毒多为进食海产品或盐腌渍品,其次为蛋品,肉类或蔬菜.进食肉类或蔬菜而致病者,多因食物容器或砧板污染所引起.根据中毒患者的临床症状,流行病学调查和实验室检查结果,可以确定本次食物中毒是一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒.造成这起中毒事故发生的原因:一方面是由于该店环境卫生条件不良,操作间管理混乱,冰箱内存放的食品生熟不分,冰箱内有血迹及积霜并出现滴水现象;厨房没有粗加工间,砧板生熟不分,有一块砧板出现爆裂现象(砧板1),裂缝内有食物残渣,未及时清除干净;而厨房当班厨师均留有长指甲,带戒指,这些都可能存在交叉污染,为细菌的繁殖提供了条件;另一方面消费者的预防意识不够也是一个主要原因.认为经过火锅的高温煮烫食物就灭菌了,为了保证肉的鲜嫩,甚至煮很短时间就捞出食用,殊不知在高温下作用一定时间细菌才会被杀死,时间过短将起不到应有的杀菌作用.4建议应加强对从业人员的卫生知识培训,提高其食品卫生管理水平,降低操作不当及食品加工过程可能发生的危害因素,保证食物安全卫生;同时也提醒我们卫生部门应加强传染病防治法宣传,加大卫生知识执法力度,在食品卫生监督管理中,预防细菌性食物中毒应重点抓住3个环节:防止食品污染;控制细菌繁殖;食品食用前应彻底加热,以消灭病原菌的传播.消费者也应多了解一些传染病的预防知识,增加自我保护能力.参考文献1扈庆华,郑薇薇,石晓路,等.双重实时pcr快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌j.中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(12):1004一l007.(收稿日期:2008一o118)(上接第851页)1.6镜检荧光染色组采用olympusbx41显微镜观察,20x物镜计数,40x物镜观察抗酸杆菌菌体形态,在暗视野背景下抗酸杆菌发出黄绿色荧光.抗酸染色组涂片采用普通光学显微镜进行检测.荧光染色和抗酸染色镜检时间和结果报告标准均以全国结核病细菌学检验规程为准,以镜检1+以上者作阳性计算,对于13条/50个视野不作阳性计算,应重留标本复杏.2结果240例肺结核病人痰液标本抗酸染色和荧光染色检测结果见表1.表1荧光染色和抗酸染色抗酸杆菌阳性检测结果3讨论近年来,诊断结核病仍主要依靠实验室检测抗酸杆菌,虽然分子生物学方法如聚合酶链反应(pcr),脉冲电场凝胶电泳(pege),is6110一rflp等方法检测结核杆菌dna,具有快速,敏感等优点,但临床诊断需要仍采用痰液涂片抗酸杆菌检测,作为结核病最重要,最直接的依据.常用的萋一尼抗酸染色操作繁琐,染色加热时易产生气溶胶;技术要求较高,油镜观察视野范围小,镜检时间长,检验人员易疲劳,同时对于涂片中存在的少量细菌难以发现.从表中资料结果显示,两组结果中抗酸杆菌1+的阳性率,荧光染色组为15.8%,抗酸染色组为9.6%,=5.56,p<0.05,差别有显着性,而2+以上,均无显着性差异,这表明荧光染色和抗酸染色阳性率差异主要体现在1+(即含菌量较少的痰液标本).对于那些病变轻,排菌量少的肺结核的诊断具有重要价值,通过荧光染色可明显提高阳性检测率,有利于临床诊断.荧光染色镜检的注意事项:荧光染色后涂片应在24h内镜检完成,遇需隔夜时,置4c保存,次et完成镜检,否则荧光减退,会造成阳性结果的不确定或者漏检;荧光素染色液应放置于棕色瓶中暗处存放,且时间不超过2周;有个别菌体40x暗色背景难以区别的抗酸杆菌,一定要转到ioox油镜下加以确认.荧光染色镜检抗酸杆菌在暗色背景下会发出黄绿色荧光,非常醒目,容易发现,而且40x物镜视野大,镜检速度快,而抗酸染色ioox油镜视野较小,镜检较慢,因此,应用金胺“0”荧光染色法检测抗酸杆菌是一种简便,准确方法,适合于大批量标本检测,值得在临床上推广.参考文献1中国防痨协会.结核病细菌学检验规程j.中国防痨杂志,1996,18(1):2829.2kunimotody,peppierms,talbotj,eta1.analysisofmycobactefiumaviumcomplexisolatesfrombloodsamplesofaidspatientsbypulsedfieldgelelectrophoresisj.jclinmicrobiol