血管内皮生长因子(VEGF)对皮肤癌发生与发展的调控ppt课件.ppt

基因的研究进展 2 3 1 赵鑫文益阳刘庆茹何秋瑜陈丽丽韩燕燕 11级研究生一班 专业 病理学与病理生理学 血管内皮生长因子 VEGF 对皮肤癌发生与发展的调控 在人类皮肤癌中 鳞状细胞癌的发病率居第二位 世界上每年有500 000人发病 DMBA TPA 二羟甲基丁酸 对苯二甲酸 化学诱导小鼠皮肤癌 小鼠的鳞状细胞癌和人类极其相似 肿瘤的生长过程中 VEGF能够促进血管内皮细胞增殖从而增加肿瘤的血管密度 促进肿瘤生长 由于血管生成在皮肤鳞状细胞癌的发生发展有重要影响 由此推断 VEGF对皮肤癌的生长也有重要的促进作用 VEGF血管生成皮肤癌 很多肿瘤生长过程中 血管微环境能够影响肿瘤干细胞 CSC 的功能 但是VEGF是否能够直接影响CSC的增殖 尚未有明确结论 VEGF血管生成CSC 一 皮肤癌血管微环境中是否存在CSCs 在脑肿瘤中 血管微环境中存在CSC并能影响其功能 但皮肤癌血管微环境中是否存在CSC尚不明确 皮肤癌中的肿瘤上皮细胞 TEC 具有克隆性增殖潜能 并且TEC移植到免疫缺陷的小鼠后可形成肿瘤 因此可以推断TEC即为CSCs 为确定皮肤癌血管微环境是否存在CSCs 进一步通过免疫组织化学染色研究 三种CSCmarkers CD34 Hmga免疫TECmarkers K5 K14染色ECmarkers endoglin CD31CSC 肿瘤干细胞TEC 肿瘤上皮细胞EC 血管内皮细胞 皮肤癌的TEC可以显示CSC的markersCD34 但内皮细胞没有显示CSC的markersCD34 因此可以排除内皮细胞的影响 证明TEC即为皮肤癌里的CSC血管微环境中存在CSC 二 VEGF对CSC的影响 以上实验已证明小鼠皮肤癌血管微环境中存在CSC 并且现已知VEGF对血管微环境的形成有重要影响 但VEGF对CSC是否有直接影响尚未证实 一 DC101封闭性阻断VEGFR2 二 皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因 三 皮肤癌小鼠模型里过表达VEGF 一 DC101封闭性阻断VEGFR2 通过qRT PCR 免疫荧光可以证明 VEGFR2存在于血管内皮细胞 welcometousethesePowerPointtemplates NewContentdesign 10yearsexperience DC101是VEGFR2的封闭性抗体 强烈抑制肿瘤血管再生 DC101作用于皮肤癌小鼠模型 可见内皮细胞增殖显著减少 肿瘤血管密度明显降低 CSCs的比例降低 VEGF阻断血管生成减少CSC比例降低阻断VEGF能通过减少血管生成使CSCs比例降低 但是VEGF是否能直接影响CSCs的某些基因的表达来直接调控其增殖尚需进一步证实 VEGFCSC qRT PCR表明VEGFa在CD34 CSCs中的表达高于正常上皮细胞和CD34 CSCs 二 皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因 为了探究CSCs分泌的VEGF是否调控皮肤CSCs的自我更新和分化 维持肿瘤的生长 该实验在已经建立皮肤癌的小鼠模型中敲除Vegfa基因 用抗癌药三苯氧胺处理一周后 大多数肿瘤已经萎缩到原来的60 两周后大多数肿瘤完全消失 在癌症的治疗的过程中 单纯的血管增生抑制剂并不能使已经建立的肿瘤完全消失 而上述实验中肿瘤完全消失 表明 Vegfa可以通过除促进血管增生以外的因素影响肿瘤生长 Vegfa基因的缺失导致TECs 即CSCs 显著减少 可以推断 VEGF对皮肤癌的CSCs存在一定影响 从CSCs对称性细胞分裂与非对称性分裂来分析这种假设是否成立 对称性细胞分裂代表细胞正在进行自我更新 非对称性分裂表明肿瘤细胞的分化 在肿瘤生长的过程中 大约40 的TEC处于对称性分裂 自我更新的状态 但是在敲除VEGFa的小鼠皮肤癌模型里 处于增殖的TEC比例大幅度降低 因此VEGF对皮肤CSCs的增殖和自我更新有重要影响 三 皮肤癌小鼠模型里过表达Vegfa 在已经建立皮肤癌的小鼠模型里 特异性使TEC内Vegfa基因过表达 来研究VEGF的增加是否增加CSCs的自我更新能力 Vegfa基因过表达后 可见CSCs大量增殖 对称性细胞分裂的CSC比例增加 结果表明 VEGF可以通过增加CSC的自我更新 促进血管内皮细胞的增殖和血管密度的增加促进肿瘤的生长 VEGF改变CSCs的自我更新和分化能力以及其分子机制 我们从基因水平研究获得 1 regulatestemness Sox Hmga2 proliferation Ccnd1 Ccng13 通过血管微环境调控肿瘤细胞之Genes间的相互作用 Col1 Col3a14 鳞状细胞癌中表达的基因 Krt13 Ano1 在Vegfa基因过表达的皮肤癌小鼠模型中 很多基因表达增加 通过qRT PCR 流式细胞仪分析 免疫荧光染色三种方法分析 大约50 的基因表达上调是由于Vegfa基因的过表达 因此 VEGF在转录水平影响相关基因以调控CSCs的自我更新和分化能力 结论 1 V