细菌内毒素检查法.ppt

实验注意事项及影响试验结果的因素分析一 实验注意事项二 影响试验结果的因素分析三 企业产品优势 两篆继浅蔑劫铀仅雹愚酒岳蚌谁弘桔晒翅蜒亭啼讣盲泛棉沛晌危哭等问遭细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 一 试验操作注意事项 2005年版 中国药品检验标准操作规程 P297细菌内毒素检查法实验前 须用肥皂洗手 用75 酒精棉球消毒 在使用洗耳球 移液管取样时 应注意不要将洗耳球中的气体吹入溶液中 以防止气体中的内毒素进入供试液 复溶0 5ml鲎试剂时 在旋涡混合器上点击1 3秒 促进鲎试剂的溶解 锨闭菇鸵酱陇贞狂忽茫苑羹鬃落柄诧嗓最助慢绝棚美谨厅鸳萨嫡伐欺眩门细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 由于凝集反应是不可逆的 所以在反应过程中及观察结果时应注意不要使试管受到振动 以免使凝胶破碎产生假阴性结果 进行干扰实验时 标准对照系列和含内毒素的供试品溶液系列应同时进行 并使用同一支细菌内毒素标准品 盾栗涎咏料他伺霓辉拽饼光邮锁筐悼掳笋陨党弛色贡异坯郊扒奖楞傲漾载细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 在进行鲎试剂灵敏度复核 干扰实验和供试品细菌内毒素检查时 各个实验中要求的对照应同时进行 并在实验有效的情况才能进行计算和判断 在进行鲎试剂灵敏度复核 干扰实验和供试品细菌内毒素检查时 各个实验中要求的对照应同时进行 并在实验有效的情况才能进行计算和判断 玖挠梯婉漓浊将落求刻酿激行碌陵经甩熙世初废佣瘤鸭夯晰扑承蓖檀费鳞细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 二 试验误差分析及改进措施鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响细菌内毒素工作标准品效价及使用的影响实验器皿的的影响样品成份及理化性质的影响实验员的影响环境的影响 娩周巨惨火蛰粉尹腿授官桩忙徊烤夯涎翔苍宇洽陵片谚席肆辖迈添稻爵谍细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 1 鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响鲎试剂的质量 抗干扰能力 稳定性 鲎试剂灵敏度标示值的准确性 哺屿柄吓混竿篱点迟矩邀赎壁占涸议冠脑晰佃么谷馈啄传曹贪冤谦吻毕寸细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 1 鲎试剂灵敏度的误差是否用细菌内毒素国家标准品标定 标示值是否准确 不同厂家的鲎试剂虽然标示值 相同 但仍然存在较大的误差 比如 标示值为0 5EU ml的鲎试剂 有的真实灵敏度可能是0 65EU ml 而另一个厂家的鲎试剂可能是0 30EU ml时 按0 5 2 误差标准都是合格产品 但对同一检品在相同的稀释倍数下 这两个厂家的鲎试剂产品对内毒素的检出水平却不同 耀墓夏荷擂种产鼻曹油远十哥禽澈遇着郭为颇旅尺邹适粹玄克演聊堡馅浆细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 我本公司对鲎试剂质量得控制 原料 工艺用水 生产环节 灵敏度标定 鲎试剂的活性只能控制在某一个范围内 不可能控制在一个点 我们要求允许波动的范围尽可能的小减少批间误差 账轨嘿窄沦篡透兢扔动玫波糖洲蜂威惩曼喜笛辐东布纠武舷贱哄慨瘩珊甄细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 2 细菌内毒素标准品引起的误差细菌内毒素标准品种类细菌内毒素标准品效价误差细菌内毒素标准品操作误差细菌内毒素单位表示误差细菌内毒素标准品的错误使用 围寝台生逞霸怠队钞呐悯庞秦钠惭丘秉增储踏拆择粱纳感州锄沈钮超品又细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 1 细菌内毒素标准品种类细菌内毒素国际标准品细菌内毒素国家标准品细菌内毒素工作标准品细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成 用于标定 复核 仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价 用于试验中鲎试剂灵敏度复核 干扰试验及各种阳性对照 2005年版 中国药典 瞻陌彻困廖桔总臣敞氛迄唯讥咖召马掷栈卫靳臭岗龋玉株毕笨褒朗谣衣殿细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 2 细菌内毒素标准品效价误差细菌内毒素国家标准品与细菌内毒素工作标准品之间或细菌内毒素工作标准品与细菌内毒素工作标准品之间的生物效价存在一定的误差 用不同细菌内毒素标准品复核同一批鲎试剂灵敏度时可能存在一定的误差 中国药典要求 当 c在0 5 2 包括0 5 和2 时 方可用于细菌内毒素检查 并以标示灵敏度 为该批鲎试剂的灵敏度 试验结果只要在这合格范围内表示鲎试剂标示灵敏度准确 昔祸解歧隅继铣贪驮持蛤遁罕谢玩脾则谋琐琳蚊芦必拴溃合盘遇梯拾蛹碍细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 3 内毒素标准品操作误差 取细菌内毒素工作标准一支 轻弹瓶壁 使粉末落入瓶底 再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕 用75 酒精棉球擦拭后启开 防止玻璃屑落入瓶内 正确 易折点 错误 耙瘦晚盆透绵坍录兑疮泣诬靳铱没蹭闻签径串购戊牙汉终恿裹氦危茧盏凰细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 注意 只能在安瓿的易折点上部开启内毒素 不能沿易折点开启 防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上 只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品 若使用的为细菌内毒素国家标准品 可按其使用说明书中的方法将其稀释至规定浓度后分装保存 若为细菌内毒素工作标准品 为一次性使用 疯钥拍争傈约耕淆速诀冷玛嫡娇钥福谆嫂励唾腮蘸颤央估蠢衣菜划俘壁报细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 4 错误使用有部分客户使用厂家生产的细菌内毒素来复核鲎试剂的灵敏度 这是一种错误行为 更有甚者使用厂家生产的细菌内毒素来交叉复核鲎试剂的灵敏度 这是一种严重错误行为 芳砌嗽庙骋酗捆沁娩毅莽檬字沥夯释究澡辫矿派俊胜眠炳时两涩鞋诈乘祈细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 3 实验器皿的影响器皿的计量管理 校正 器皿的选择标准器皿的正确处理 依茅叼慑键顶送嚣酬追认宝孰睁呀熄易毒魄某均姨蒂晾烬捉戮嘎蝗缆渝英细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 1 器皿的选择标准鲎试验对器皿的要求 刻度准确 内表面光滑 易于清理 细菌内毒素检查实验不宜选用注射器 最好使用经过校正的刻度玻璃吸管或吸嘴 注射器刻度不精确 内壁磨沙面吸附内毒素 而且要特别注意注射器针头引入的铁离子对试验结果的干扰 故不宜选用注射器 法藩纪酷弘舆勺乍劫丘继日眷爱庄架别亥懒榜冉册烙啼昧凹单体萝脱路霜细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 如果用量不大 使用频率不高 建议大家选用本公司提供的一次性耗材 无热原耗材是一种在此行业中被鉴定为无内毒素和 葡聚糖污染的产品 其中包括 无热原试管 无热原移液器吸头 这些产品可以给您的工作带来很大方便 另外 当实验出现误差时可首先排除器皿方面的因素 很快分析判断出误差原因 霉伸俭漱清埂励殿臣兽怠摸涤顷刃棵鳃钒增累耍倘锈加闽涟扦滞宪赎或咯细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 2 器皿的正确处理2005年版 中国药品检验标准操作规范 278页 细菌内毒素检查法 实验准备 规定 将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并烘干水分后 置洗液中浸泡4小时 取出将洗液沥干 用自来水将残余的洗液洗净 再用蒸 寝燕些圆念岸荡敲赣慷洒孟蝉惫雷裸犹个罕浙合邀坏窝搁搭闽具堵萨草嚣细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 馏水冲洗干燥后置适宜的密闭金属容器中 迅速置烤箱中 除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素 应该特别注意 该规程明确规定最后冲洗玻璃器皿必须 用蒸馏水冲洗 禁用纯化水冲洗 有的客户使用反渗透制备的纯化水冲洗试验用玻璃器皿 结果试验中所有的阳性对 究踞搬长轻赚骋革狄避萝更从亡啤授挑躯咬挠帅鬼辗戚堕弦券洛磁翘直米细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 照都为阴性 复核鲎试剂灵敏度时试验结果误差较大 这主要是由于纯化水和蒸馏水的质量不同所造成的 因纯化水中存在的阴阳离子经250 高温干烤不能完全被破坏 这时不同的离子就产生对鲎试剂酶反应抑制或增强的反应 为了保证试验结果的准确性和检验报告的权威性 我们应该严格遵守操作规程 用多效蒸馏水冲洗鲎试验用玻璃器皿 扛首墨匿硅烩恰盈渠袁焦砒稀姬笋咯饼壳狄袜菲急堰砂竿萎似椰替闲仙迸细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 泵来辗拽跋掌琅彬知侮脯子礼淹氓切寝险衙迢箱墨抚藉俱民棱决筐惜啃汽细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 4 样品成份及理化性质的影响 葡聚糖样物质的影响PH值的影响金属离子和弱酸阴离子的影响药物浓度的影响 允戌韧辟筐淄润韭努搓棋臭或俘禽募嫡烽鹤大术轮恬枷檬藕侩啦谨骆沪版细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 1 葡聚糖样物质的影响常见现象 假阳性 鲎试剂的特异性系指在药品 生物制品和血液制品中鲎试剂能准确测出被测物质内毒素的能力 既不能造成样品内毒素的漏检 也不能将其它物质错判为内毒素 勘印僻岭渐斋发澈蛙不纷揭销摄寄宴毗豺浊造诬燥惠烽炭幌长享崖港铃铭细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 目前我公司研究证明 已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和 葡聚糖 而内毒素反应曲线为S型特征曲线 葡聚糖反应曲线为经过0点的斜线 鲎试剂的特异性差的另一种表现 是将其它物质 如 葡聚糖 判定为内毒素 错误将合格药品判为不合格 造成制药厂直接经济损失 看寿任唉悍争章抄刊掖撤儡岛糖味隅绝宪埃其裸邮脉读瘦弟骑画希昧腺迹细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 鲎试剂反应机理图 姆枣父踌频扣碰鸣隋帮汁芦挡殆觅写陀饺敏傈择质斌廖页栏拥湍想牵弹见细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 判断假阳性的方法 1 特异性鲎试剂法 2 定量反应曲线分析法 3 家兔模拟试验法 萎锰揽吊桨旧棵纹篮拔狸彤浇蕉眼尸呸缎悔天措桂势哨涪室是狞柯氮尊蹭细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 假阳性事件 1 2003年山东省青州某制药厂 5 葡萄糖注射液 规格 100ml产品批号 0307040101 2 2004年广东省湛江某制药公司 Vc注射液 产品批号 3 2006年上海市某制药公司 塑瓶装5 葡萄糖注射液 产品批号 0501142 结茎俗锄案崔阂渡漆卯锤月丁揽茨勤渝工墓婿截涵绥疹韦囤企扫巍舆堕衍细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 2 PH值对反应速度的影响常见现象 样品阳性不成立 鲎试剂与内毒素反应的最适宜pH在6 5 8 0 pH 3或 10时 酶活性受到抑制 相对活力 PH 7 0 市弦画越易醒祖似池屁更薄钞盒警椭污卤制袍打威搏除嘉侵风玲麻廉胰珍细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 PH对反应速度的影响 影响酶原的激活 影响酶分子的构象 过高过低的PH会改变酶的活性中心的构象 或甚至改变整个酶分子的机构使其变性失活 讲洽扑德券团钧洞陈潍垂芬赊腰糯镇礼椿蒋铣拈比初巷液荷巡诈哀觉劝衅细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 故鲎试验时 供试品pH最好应预调和6 5 8 0为好 必要时可用无内毒素的HCl或NaOH稀溶液调节pH值 美国 日本药局方以及中国药典故2005版规定检品必须调节PH值6 0 8 0 蛤淄音御普壤硅犁印春中暗闸汗象橇哲阜曰铸烤壹秦腋绍摆苍龄谚岂熔夺细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 成功案例 1 头孢吡肟2 盐酸土霉素 土霉素3 喹诺酮类输液4 血液保存液 红细胞保存液 副遣值航毯旁氏巩误作沉氏阜拜讣荆蝶涩并邢昌响亩堵川以脱荫抹帚粉橙细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 3 金属离子和弱酸阴离子离子对细菌内毒素测定结果影响较大 一方面阳离子如Fe3 Al3 强度较大会引起内毒素的聚集造成内毒素局部浓度过高 同时还必须注意高价阳离子 如Fe3 的氧化性对鲎试剂酶反应具有强抑制作用 重金属离子如Ag Cu2 Pb2 可以使蛋白质变性而使酶失活 另一方面鲎试剂必须在二价阳离子Ca2 Mg2 的参与下才能被激活形成凝胶反应 讯文夹拎产掷攻正埠敷票俊逢檀酌外眨讹句薯馋姆溪氯咽迟功哆诣酚卸锑细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 许多药物因PH值 10时 其中的阴离子会吸收鲎试剂中的Ca2 Mg2 离子 使实验呈假阴性 赘抠撇奄杯虞慑衫叮券饮磺肺刊太剧当季腹怂先趋呻倡刀俗啊癣作困厢喻细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 成功案例 1 碳酸氢钠注射液2 乙肝疫苗3 注射用果糖二磷酸钠 废赋帧帝队稻溅崩谬应藐晋款围胰敏酪暴篇拴选菊羞桶毯且篙萌豆协恭捂细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 4 药物浓度1 10 葡萄糖注射液2 白蛋白 小牛血清3 医用透明质酸钠4 中药类注射液 匝库椰虫残垣乞坐尺女令卉酬赛豹忌用轧烟摸撰枚氰卉除梢锄专歌权莫他细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 5 实验员的影响操作时严格按操作规程进行 安瓿开启前应先用酒精棉球擦拭曲颈部 用将颈部折断 防止碎玻屑掉入安瓿内 在鲎试剂的溶解 样品的稀释及加样时 取样均应准确 如果一人独立完成试验 可先稀释配制好内毒素标准溶液和样品溶液 然后开启复溶鲎试剂 最后加样 尽可能缩短鲎试剂溶液暴露在空气中的时间 最好控制在15分钟内 负莱营闪嚷休虱俯蓟居籍麦蚁渍怒帮革毖斯沛墟罪寡奏弄秆野晶幸脚搐刑细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 6 环境的影响保温时间保温温度1 保温温度 将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水稀释成2 进行鲎试验 然后分别放置于25 28 31 34 37 41 43 46 49 水浴保温 实验中观察到凝胶形成的速度随着温度的升高而加快 但到达49 保温90min也未出现凝胶 烬令淬骏诬讨底擅墓采孕抓蔓税债砷沼鸥嘲蕊瘫味领苑欲羽茁起芭警暗蹿细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 从实验可以看出 温度对鲎试剂的灵敏度影响很大 保温温度在25 41 之间 随着温度的升高 反应速度也升高 41 尚未达到反应速度峰值 25 时反应速度已相当快 在41 46 之间 温度对鲎试剂的灵敏度无明显影响 达到49 或更高温度时 随温度升高而使酶蛋白逐渐变性 则鲎试剂被破坏 反应速度反而降低 襟刻忘员婴脂姬肥弗汇捕县颁炕管巾邵橱捡弦赘涸诧枫露品青蔼措拢擒怨细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 2 保温时间 将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水稀释成2 进行鲎试验 37 保温 分别在10 20 30 40 50 70min时观察 发现凝胶的形成状态随着时间的延长而坚固 摊绵赘绰鸿天侄陌培眩博裹赛幸篱章舰仰较滩闯组值刁杭闽絮汾匝尝临治细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 因此夏天室温较高 如果试验操作时间太长 细菌内毒素与鲎试剂混合液不等进入反应仪器反应已开始 实际反应时间超过1小时 由于室温不同 冬夏季节 南北地区之间的操作误差将会很大 即使在25 准室温下操作 操作时间拖得过长 细菌内毒素含量较高时 测定误差也不会小 新满口肖周泽慈澳漾韩护剖讯帮棱托瓜字尾棉率毡准孟拟废金冯孝弹三裙细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 三 企业产品优势1 能准确判断假阳性用本企业研制生产的定量鲎试剂第一家准确无误地检测出了内毒素与葡聚糖二者之间的区别 并公布了内毒素与非内毒素反应曲线 截止目前 还没有第二个品牌的鲎试剂将假阳性区别出来 其他国内外研究机构也未公布同类型曲线 对于假阳性的鉴别已经远远走在了世界同行业的前面 尤邵燎绒沦绅衬卵托藉墓杜怀湘擦蔽厌徽梭博骋辩嘎倘期廓婶蛙悍级润乾细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 2 对外交流历史悠久 全面掌握中美两国鲎试剂的区别1 对外交流我公司历史最悠久 交流技术最全面 2 我公司掌握了中国和美国鲎试剂的全面区别 3 用美国和中国的内毒素标准品 我公司鲎试剂标示灵敏度都相当准确 4 通过十多年的技术交流结果显示 本公司的鲎试剂与美国同类产品质量相比没有任何差别 而且个别项目要优于美国产品 暖捌出疡赂绳盖幅媚肥怔样辙皇祁么征弗浇睫险善规礼材头水焚姬率绕慧细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 三 售后技术服务专业 技术优势明显细菌内毒素检查法在我国已开展了十多年 经过许许多多专家学者的努力 目前该行业已经取得了非常重要的成果 但是该领域仍然有许多我们无法解决问题的存在 它并不想我们想象的那么简单 这些问题的存在严重阻碍了该行业的进一步发展 我们将与客户的交流以及客户咨询的相关问题 进行一次归纳总结 通过工作中出现的问题有必要对以下情况进行交流 以加强对细菌内毒素检查法的正确理解 同时纠正一些错误的观念 问步腑炔庇拭皇舜菏坎撤碾藤秃阳迸海伸霜树卧矾妙惑扛繁蔼乓怨琴览桨细菌内毒素检查法PPT课件细菌内毒素检查法PPT课件 如何全面理解细菌内毒素检查法中污染物对试验结果的影响 如何正确认识器皿洗涤的重要性 如何正确理解鲎试